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簡(jiǎn)介：生物醫(yī)用高分子材料及應(yīng)用POLYMERICBIOMATERIALSANDITSAPPLICATIONS,,生物醫(yī)用高分子材料定義,生物醫(yī)用高分子材料POLYMERICBIOMATERIALS是指在生理環(huán)境中使用的高分子材料,它們中有的可以全部植入體內(nèi),有的也可以部分植入體內(nèi)而部分暴露在體外,或置于體外而通過(guò)某種方式作用于體內(nèi)組織。,生物醫(yī)用材料分類(lèi),天然生物材料如豬心瓣膜、牛心包、羊膜等金屬材料如鈦及其合金、無(wú)機(jī)非金屬材料如羥基磷灰石、生物玻璃等高分子材料雜化生物醫(yī)用材料。,生物醫(yī)用高分子的發(fā)展,材料發(fā)展的第一階段始于1937年,其特點(diǎn)是所用高分子材料都是已有的現(xiàn)成材料,如用丙烯酸甲酯制造義齒的牙床。,,第二階段始于1953年,其標(biāo)志是醫(yī)用級(jí)有機(jī)硅橡膠的出現(xiàn),隨后又發(fā)展了聚羥基乙酸酯縫合線(xiàn)以及四種聚醚氨酯心血管材料,從此進(jìn)入了以分子工程研究為基礎(chǔ)的發(fā)展時(shí)期。該階段的特點(diǎn)是在分子水平上對(duì)合成高分子的組成、配方和工藝進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì),有目的地開(kāi)發(fā)所需要的高分子材料。,,目前的研究焦點(diǎn)已經(jīng)從尋找替代生物組織的合成材料轉(zhuǎn)向研究一類(lèi)具有主動(dòng)誘導(dǎo)、激發(fā)人體組織器官再生修復(fù)的新材料,這標(biāo)志著生物醫(yī)用高分子材料的發(fā)展進(jìn)入了第三個(gè)階段。其特點(diǎn)是這種材料一般由活體組織和人工材料有機(jī)結(jié)合而成,在分子設(shè)計(jì)上以促進(jìn)周?chē)M織細(xì)胞生長(zhǎng)為預(yù)想功能,其關(guān)鍵在于誘使配合基和組織細(xì)胞表面的特殊位點(diǎn)發(fā)生作用以提高組織細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)速度,醫(yī)用高分子分類(lèi)及應(yīng)用,1與血液接觸的高分子材料與血液接觸的高分子材料是指用來(lái)制造人工血管、人工心臟血囊、人工心瓣膜、人工肺等的生物醫(yī)用材料,要求這種材料要有良好的抗凝血性、抗細(xì)菌粘附性,即在材料表面不產(chǎn)生血栓．不引起血小板變形,不發(fā)生以生物材料為中心的感染。,,人工血管材料有尼龍、聚酯、聚四氟乙烯、聚丙烯及聚氨酯等。人工心臟材料多用聚醚氨酯和硅橡膠等。人工肺多用聚四氟乙烯、硅橡膠等材料人工腎材料除要求具備良好的血液相容性外,還要求材料具有足夠的濕態(tài)強(qiáng)度、有適宜的超濾滲透性等,可充當(dāng)這一使命的材料有乙酸纖維素、銅氨再生纖維素、尼龍、聚砜及聚醚砜等。,,為提高人造器官的血液相容性,現(xiàn)階段的研究重點(diǎn)是對(duì)現(xiàn)有生物材料的表面進(jìn)行改性和修飾,其方法有接枝親水性長(zhǎng)側(cè)鏈引入生物活性物質(zhì)抑制血液與外源材料的相互作用使材料具有微相分離結(jié)構(gòu)聚合物表面種植內(nèi)皮細(xì)胞等,2組織工程用高分子材料,細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的日臻成熟和生物相容性材料的開(kāi)發(fā)與研究,使得創(chuàng)造由活細(xì)胞和生物相容性材料組成的人造生物組織或器官成為可能。生物相容性材料的開(kāi)發(fā)是組織工程核心技術(shù)之一。,,組織工程中的生物材料主要發(fā)揮下列作用提供組織再生的支架或三維結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能免疫保護(hù)，當(dāng)完成自己的使命后,作為組織生長(zhǎng)骨架的生物高分子材料則降解為無(wú)毒的小分子被機(jī)體吸收。作為這種材料使用的聚合物主要有聚乳酸PLA等。,3藥用高分子材料,作為藥用高分子必須具備下列條件本身及其分解產(chǎn)物應(yīng)無(wú)毒,不會(huì)引起炎癥,無(wú)致癌性進(jìn)入血液系統(tǒng)的藥物不會(huì)引起血栓具有水溶性,能在體內(nèi)水解為具有藥理活性的基團(tuán)能有效到達(dá)病灶處,并積累一定濃度口服藥劑的高分子殘基能通過(guò)排泄系統(tǒng)排出體外。,,藥用高分子可分為三類(lèi)（１）具有藥理活性的高分子藥物。它們本身具有藥理作用,斷鏈后即失去藥性,是真正意義上的高分子藥物。天然藥理活性高分子有激素、肝素、葡萄糖、酶制劑等。合成藥理活性高分子如聚4乙烯吡啶N氧撐是較早研究的代用血漿。,,（２）低分子藥物的高分子化。低分子藥物在體內(nèi)新陳代謝速度快,半衰期短,體內(nèi)濃度降低快,從而影響療效,故需大劑量頻繁進(jìn)藥,而過(guò)高的藥劑濃度又會(huì)加重副作用,此外,低分子藥物也缺乏進(jìn)入人體部位的選擇性。將低分子藥物與高分子結(jié)合的方法有吸附、共聚、嵌段和接枝等。第一個(gè)實(shí)現(xiàn)高分子化的藥物是青霉素,,（３）藥用高分子微膠囊。將細(xì)微的藥粒用高分子膜包覆起來(lái)形成微小的膠囊是近年來(lái)生物醫(yī)藥工程的一場(chǎng)革命。藥物經(jīng)微膠囊化處理后可以達(dá)到下列目的延緩、控制釋放藥物,提高療效掩蔽藥物的毒性、刺激性和苦味等不良性質(zhì),減小對(duì)人體的刺激使藥物與空氣隔離,防止藥物在存放過(guò)程中的氧化、吸潮等不良反應(yīng),增加貯存的穩(wěn)定性,4醫(yī)藥包裝用高分子材料,包裝藥物的高分子材料大體上可分為軟、硬兩種類(lèi)型。硬型材料如聚酯、聚苯乙烯、聚碳酸酯等,由于其強(qiáng)度高、透明性好、尺寸穩(wěn)定、氣密性好,常用來(lái)代替玻璃容器和金屬容器,制造飲片和膠囊等固體制劑的包裝。軟型材料如聚乙烯、聚丙烯、聚偏氯乙烯及乙烯醋酸乙烯共聚物等,常加工成復(fù)合薄膜,主要用來(lái)包裝固體沖劑、片劑等藥物。,5眼科用高分子材料,隱形眼鏡是最常見(jiàn)的眼科用高分子材料制品，它對(duì)材料有如下要求具有優(yōu)良的光學(xué)性質(zhì),折光率與角膜相接近良好的潤(rùn)濕性和透氧性生物惰性,即耐降解且不與接觸面發(fā)生化學(xué)反應(yīng)有一定的力學(xué)強(qiáng)度,易于精加工及抗污漬沉淀等。常用的隱形眼鏡材料有聚甲基丙烯酸Β羥乙酯等，發(fā)生病變的角膜和晶狀體也可用人工角膜和人工晶狀體替代。,6醫(yī)用粘合劑與縫合線(xiàn),生物醫(yī)用粘合劑是指將組織粘合起來(lái)的組織粘合劑,醫(yī)用粘合劑可粘合各種組織,例如可進(jìn)行牙齒粘合,血管、組織、肌肉粘合,腦動(dòng)脈瘤表面補(bǔ)強(qiáng)、防止破裂粘合,及骨粘合等。常用的粘合劑有Α氰基丙烯酸烷基酯類(lèi),甲基丙烯酸甲酯苯乙烯共聚物等。,,手術(shù)用縫合線(xiàn)可分為非吸收型和可吸收型兩大類(lèi)。非吸收類(lèi)包括天然纖維如蠶絲、、馬毛等和合成纖維。可吸收類(lèi)包括天然高分子材料如、骨膠原、纖維蛋白等和合成高分子材料如聚乙烯醇、聚乳酸等。其中,由聚乳酸制成的縫合線(xiàn)因性能優(yōu)越而倍受關(guān)注。這種縫合線(xiàn)強(qiáng)度可靠,對(duì)創(chuàng)口縫合能力強(qiáng),又可生物降解而被肌體吸收,是一種理想的醫(yī)用縫合線(xiàn)。,7醫(yī)療器件用高分子材料,高分子材料制的醫(yī)療器件有一次性醫(yī)療用品注射器、輸液器、檢查器具、麻醉及手術(shù)室用具、血袋、尿袋等。血袋一般由軟PVC或LDPE制成。聚氨酯制的繃帶固化速度快,質(zhì)輕層薄,不易使皮膚發(fā)炎,可取代傳統(tǒng)的固定材料石膏硅橡膠、聚四氟乙烯及聚乙烯醇等都是性能良好的矯形材料,已廣泛用于假肢制造及整形外科等領(lǐng)域。,總結(jié),生物技術(shù)將是21世紀(jì)最有前途的技術(shù),生物醫(yī)用高分子材料將在其中扮演重要角色,其性能將不斷提高,應(yīng)用領(lǐng)域也將進(jìn)一步拓寬。今后的發(fā)展趨勢(shì)將主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面（１）醫(yī)用可生物降解高分子材料因其具有良好的生物降解性和生物相容性而受到高度重視,論是作為緩釋藥物還是作為促進(jìn)組織生長(zhǎng)的骨架材料,都將得到巨大的發(fā)展。,,（２）復(fù)制具有人體各部天然組織的物理力學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)的生物醫(yī)用材料,達(dá)到高分子的生物功能化和生物智能化,是醫(yī)用高分子材料發(fā)展的重要方向。此外,用生物技術(shù)合成高分子的反應(yīng)條件更溫和、產(chǎn)物的生物降解性能更好,因而具有誘人的前景。,,（３）人工代用器官在材料本體及表面結(jié)構(gòu)的有序化、復(fù)合化方面將取得長(zhǎng)足進(jìn)步,以達(dá)到與生物體相似的結(jié)構(gòu)和功能,其生物相容性將大大提高。,,THANKYOU,

簡(jiǎn)介：CHAPTER10GENEMUTATION,SEVEREACUTERESPIRATORYSYNDROMESARS,,H1N1流感病毒,流感的啟示,問(wèn)題,1、為什么每一次大流行的流感病毒的類(lèi)型都不一樣2、為什么如此猖狂和恐怖的流感病毒不能像天花病毒一樣被“消滅”為什么不能通過(guò)接種疫苗進(jìn)行有效的預(yù)防,血凝素（HA）,神經(jīng)氨酸酶（NA），,SARS的S蛋白質(zhì)和M蛋白質(zhì)的變異點(diǎn)位達(dá)到31個(gè)，這說(shuō)明SARS病毒具有極強(qiáng)的變異能力，這意味著研究SARS疫苗可能會(huì)同研究流感疫苗一樣困難重重,1、WHATAREMUTATIONS,4、WHATCAUSESMUTATIONS,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONS,5、HOWTODETECTTHEGENEMUTATION,2、FEATURESOFGENEMUTANTION,OUTLINE,CHAPTER10GENEMUTATION,1、WHATAREMUTATIONS,★ANYHERITABLECHANGEINTHEDNA（RNA）SEQUENCEOFANORGANISMISAMUTATION★MUTATIONSCANBEDIVIDEDINTOTHREEMAINTYPES1CHROMOSOMEMUTATIONS（染色體突變）2GENOMEMUTATIONS（基因組突變）3GENEMUTATIONS（基因突變）RELATIVELYSMALLCHANGESINDNASTRUCTURETHATOCCURWITHINAPARTICULARGENE,★GENEMUTATION（基因突變）CHANGESINONEORAFEWNUCLEOTIDES★POINTMUTATION點(diǎn)突變AREMUTATIONSOFASINGLENUCLEOTIDEINCLUDESTHEDELETION,INSERTION,ORSUBSTITUTIONINAGENE（堿基的增加及缺失、堿基替換）,替換,增加及缺失,,ATRANSITION轉(zhuǎn)換ISACHANGEOFAPYRIMIDINEC,TTOANOTHERPYRIMIDINEORAPURINEA,GTOANOTHERPURINEATRANSVERSION顛換ISACHANGEOFAPYRIMIDINETOAPURINEORVICEVERSA,轉(zhuǎn)換和顛換的相互關(guān)系示意圖,,MUTATIONSMAYALSOINVOLVETHEADDITIONORDELETIONOFSHORTSEQUENCESOFDNA,,5’AACGCTAGATC3’3’TTGCGATCTAG5’,5’AACGCTC3’3’TTGCGAG5’,,DELETIONOFFOURBASEPAIRS,ADDITIONOFFOURBASEPAIRS,MUTATIONSDUETOTRINUCLEOTIDEREPEATS（DYNAMICMUTATION）,MUTATIONSHAPPENREGULARLYMUTATIONRATEFORWARDBACKWARDORREVERSEMUTATIONMULTIPLEORIENTATIONSBENEFICIALDELETERIOUSMUTATIONSIMILARITYBETWEENTHERELATEDSPECIES,2、FEATURESOFGENEMUTANTION,MUTATIONSHAPPENREGULARLY,THEREFORE,THEMUTATIONCANBEPASSEDONTOFUTUREGENERATIONS,,THESIZEOFTHEPATCHWILLDEPENDONTHETIMINGOFTHEMUTATION,THEEARLIERTHEMUTATION,THELARGERTHEPATCH,ANINDIVIDUALWHOHASSOMATICREGIONSTHATAREGENOTYPICALLYDIFFERENTFROMEACHOTHERISCALLEDAGENETICMOSAIC,THEREFORE,THEMUTATIONCANNOTBEPASSEDONTOFUTUREGENERATIONS,MUTATIONRATE,THEFREQUENCYWITHWHICHAPARTICULARMUTATIONAPPEARSINAPOPULATION,FORWARDBACKWARDORREVERSEMUTATION正突變回復(fù)突變,A,,A,,FORWARD,REVERSE,通常從一個(gè)野生型基因變成突變性的頻率總是高于回復(fù)突變率，如何解釋,一突變型回復(fù)成野生型，可能機(jī)制是什么（預(yù)習(xí)基因重組）,,A,,A1,,A2,,A3,,,,,,,,,,MULTIPLEORIENTATIONS（多向性）,BENEFICIALDELETERIOUS,,HARMFUL,ALMOSTALLMUTATIONSARENEUTRAL,BENEFICIAL,,SOMETERMS,LETHALMUTATION（致死突變）MUTATIONTHATEVENTUALLYRESULTSINTHEDEATHOFANORGANISMCARRYINGTHEMUTATIONNEUTRALMUTATION（中性突變）AMUTATIONTHATHASNOSELECTIVEADVANTAGEORDISADVANTAGECONDITIONALMUTATION（條件突變）AMUTATIONTHATISONLYEXPRESSEDUNDERCERTAINENVIRONMENTALCONDITIONS,MUTATIONSIMILARITYBETWEENTHERELATEDSPECIES（突變的平行性）,,,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONS,MUTATIONSINTHECODINGSEQUENCEOFASTRUCTURALGENECANHAVEVARIOUSEFFECTSONTHEPOLYPEPTIDE,MUTATIONSINNONCODINGSEQUENCESAFFECTGENEEXPRESSION,,,,,,,INSERT,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSCODINGSEQUENCE,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSCODINGSEQUENCE,SILENTMUTATIONSORSILENTMUTATION（同義突變）BASESUBSTITUTIONSTHATDONOTALTERTHEAMINOACIDSEQUENCEOFTHEPOLYPEPTIDEMISSENSEMUTATIONS錯(cuò)義突變ARETHOSEBASESUBSTITUTIONSINWHICHANAMINOACIDCHANGEDOESOCCURNONSENSEMUTATIONS（無(wú)義突變）ARETHOSEBASESUBSTITUTIONSTHATCHANGEANORMALCODONTOATERMINATIONCODONFRAMESHIFTMUTATIONS（移碼突變）INVOLVETHEADDITIONORDELETIONOFNUCLEOTIDESINMULTIPLESOFONEORTWO,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSCODINGSEQUENCE,,如果你所研究的基因發(fā)生了突變，你將如何從遺傳學(xué)角度判斷他是錯(cuò)義突變、無(wú)義突變還是移碼突變,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONSNONCODINGSEQUENCE,為什么操縱子區(qū)（OPRATOR）和啟動(dòng)子PROMOTER突變總是順式顯性和反式隱形突變而編碼阻抑蛋白基因突變，則是順式還是反式顯性呢,MUTATIONSCANOCCURSPONTANEOUSLYORBEINDUCEDSPONTANEOUSMUTATIONS自發(fā)突變RESULTFROMABNORMALITIESINCELLULAR/BIOLOGICALPROCESSESFOREXAMPLEERRORSINDNAREPLICATIONINDUCEDMUTATIONS（誘發(fā)突變）CAUSEDBYENVIRONMENTALAGENTSAGENTSTHATAREKNOWNTOALTERDNASTRUCTUREARETERMEDMUTAGENSTHESECANBECHEMICALORPHYSICALAGENTS,4、WHATCAUSESMUTATIONS,1、WHATAREMUTATIONS,4、WHATCAUSESMUTATIONS,3、CONSEQUENCESOFMUTATIONS,2、FEATURESOFGENEMUTANTION,SUMMARY,

簡(jiǎn)介：REPLICATIONDAMAGEREPAIR第二章DNA的復(fù)制、損傷和修復(fù)第一節(jié)DNA的復(fù)制REPLICATIONDNABIOSYNTHESIS指DNA雙鏈在細(xì)胞分裂以前進(jìn)行的復(fù)制過(guò)程。哺乳動(dòng)物的細(xì)胞周期（一）半保留復(fù)制DNA在復(fù)制時(shí)，以親代DNA的每一股作模板，合成完全相同的兩個(gè)雙鏈子代DNA，每個(gè)子代DNA中都含有一股親代DNA鏈，這種現(xiàn)象稱(chēng)為DNA的半保留復(fù)制SEMICONSERVATIVEREPLICATION。意義半保留復(fù)制說(shuō)明DNA在代謝上的穩(wěn)定性。經(jīng)過(guò)許多代的復(fù)制，DNA鏈仍可保持完整，這在生物的遺傳上是十分重要的。一、DNA復(fù)制特征DNA以半保留方式進(jìn)行復(fù)制，是在1958年由MMESELSON和FSTAHL所完成的實(shí)驗(yàn)所證明。該實(shí)驗(yàn)首先將大腸桿菌在含15N的培養(yǎng)基中培養(yǎng)約十五代，使其DNA中的堿基氮均轉(zhuǎn)變?yōu)?5N。將大腸桿菌移至只含14N的培養(yǎng)基中同步培養(yǎng)一代、二代、三代。分別提取DNA，作CSCL密度梯度離心半保留復(fù)制證據(jù)（以原核生物大腸桿菌為例）原料DNTP，MG雙鏈DNA模板引物（PRIMER），常是RNA，有游離的3’OH。引物酶（PRIMASE，DNAG），用于合成復(fù)制所必需的RNA引物解螺旋酶HELICASEDNAB由DNAA和DNAC協(xié)助在復(fù)制的起始點(diǎn)（IC）上解開(kāi)雙螺旋。與復(fù)制有關(guān)的酶和因子復(fù)制的起始點(diǎn)與方向親代DNA開(kāi)鏈，復(fù)制起始點(diǎn)呈叉型移動(dòng)復(fù)制起始點(diǎn)（I）DNA復(fù)制要從DNA分子的特定部位開(kāi)始，此部位稱(chēng)復(fù)制起始點(diǎn)原核一個(gè)起始點(diǎn)，約245BP特殊的重復(fù)序列真核多個(gè)起始點(diǎn)IECOLI復(fù)制起始點(diǎn)IC跨度為245BP，包括兩個(gè)關(guān)鍵序列13BP的序列和9BP序列它是決定和控制ECOLI染色體復(fù)制的唯一片段。13BP序列區(qū)，每一個(gè)順序都由GATC開(kāi)始，富含A和T，有助于螺旋解開(kāi)，控制復(fù)制何時(shí)開(kāi)始。9BP重復(fù)序列，重復(fù)出現(xiàn)4次，能與起始蛋白DNAA特異結(jié)合，當(dāng)DNAA蛋白（約20種）結(jié)合于I的4個(gè)部位上時(shí)復(fù)制開(kāi)始。DNAA蛋白（一種專(zhuān)一的蛋白）和I結(jié)合后，雙螺旋解開(kāi)形成復(fù)制叉。故DNAA蛋白與啟動(dòng)解鏈有關(guān)DNAA蛋白是起始的關(guān)鍵成分。大腸桿菌復(fù)制起點(diǎn)成串排列的重復(fù)序列復(fù)制方向DNA合成的方向單向、雙向1個(gè)起始點(diǎn)復(fù)制中的大腸桿菌染色體放射自顯影圖CAIMS實(shí)驗(yàn)將3H胸苷標(biāo)記大腸桿菌DNA，經(jīng)過(guò)近兩代的時(shí)間，3H胸苷摻入大腸桿菌DNA。用溶菌酶把細(xì)胞壁消化掉，使完整的大腸桿菌染色體DNA釋放出來(lái)，放射自顯影，得到上圖。非復(fù)制部分（C）銀粒子密度較低，由一股放射性鏈和一股非放射性鏈構(gòu)成。已復(fù)制部分站整個(gè)染色體的三分之二，其中一條雙鏈（B）僅有一股鏈?zhǔn)菢?biāo)記的，另外一股雙鏈（A）的兩股鏈都是標(biāo)記的，銀粒子密度為前二者的兩倍。染色體全長(zhǎng)約為1100微米。雙向復(fù)制復(fù)制子真核生物兩個(gè)相鄰復(fù)制起始點(diǎn)之間的DNA片段以起始點(diǎn)為中心，向兩個(gè)方向進(jìn)行復(fù)制多個(gè)起始點(diǎn)二、DNA復(fù)制的酶學(xué)1模板解開(kāi)成單鏈的DNA母鏈3DNA聚合酶，DNAPOL2底物DNTPDATP，DGTP，DCTP，DTTP4引物（PRIMER）RNA引物5其他酶和蛋白質(zhì)因子一、復(fù)制的化學(xué)反應(yīng)生成磷酸二酯鍵DN2TPPPIDNAPOL3’TAGAAGACCTATTGGCC5’5’ATCTTCTGGATAACCGG3’二、解鏈相關(guān)酶類(lèi)1解旋酶HELICASE2拓?fù)洚悩?gòu)酶（TOPOISOMERASEI、II）3單鏈DNA結(jié)合蛋白SSBDNA解旋酶HELICASE（解鏈酶）功能DNA的雙螺旋解鏈（解DNA雙鏈），解開(kāi)一對(duì)堿基，需2分子ATP，作用點(diǎn)DNA上局部單鏈處，向雙鏈方向解鏈。種類(lèi)ECOLI有四種解螺旋酶，I、II、III和REP蛋白。I、II、III中任一種沿模板53方向移動(dòng)，REP蛋白沿模板35方向移動(dòng)。2拓?fù)洚悩?gòu)酶（TOPO）DNA正超螺旋與負(fù)超螺旋負(fù)超螺旋正超螺旋DNA雙螺旋拓?fù)洚悩?gòu)酶首先在大腸桿菌中被發(fā)現(xiàn)，它可使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應(yīng)無(wú)需供給能量。另外，DNA復(fù)制時(shí)負(fù)超螺旋的消除，亦由拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ來(lái)完成，但它對(duì)正超螺旋無(wú)作用。Ⅰ型拓?fù)洚悩?gòu)酶由兩個(gè)A亞基和兩個(gè)B亞基組成，即A2B2。它能使DNA的兩條鏈同時(shí)發(fā)生斷裂和再連接，當(dāng)它引入負(fù)超螺旋以消除復(fù)制叉前進(jìn)帶來(lái)的扭曲張力時(shí)，需要由ATP提供能量。兩種拓?fù)洚悩?gòu)酶在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和重組中均發(fā)揮重要作用。Ⅱ型拓?fù)洚悩?gòu)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑喜樹(shù)堿類(lèi)拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑依托泊苷，多柔比星，阿霉素類(lèi)等3單鏈DNA結(jié)合蛋白（SSB）作用防止單鏈DNA重新形成雙鏈，防止單鏈DNA被核酸酶水解SSB三、DNA聚合酶（DNAPOL）即依賴(lài)于DNA的DNA聚合酶（DDDP）真核生物有多種DNAPOL、、、、原核生物有3種DNAPOLⅠ、Ⅱ、ⅢDNA聚合酶功能53聚合作用53外切酶35外切酶活性大腸桿菌三種DNA聚合酶比較DNA聚合酶Ⅱ分子量每個(gè)細(xì)胞的分子統(tǒng)計(jì)數(shù)53聚合酶作用35核酸外切酶作用53核酸外切酶作用轉(zhuǎn)化率主要功能活性（NTMIN）DNA聚合酶ⅠDNA聚合酶Ⅲ（復(fù)合物）109，0004001校讀修復(fù)1000120，00040005400，000102050復(fù)制100000特性不清填補(bǔ)缺口50四、引物酶PRIMASE和引發(fā)體催化RNA引物合成的酶叫引物酶，它是一種特殊的RNA聚合酶DNA合成需在RNA引物的基礎(chǔ)上進(jìn)行DNAA引發(fā)體（PRIMOSOME）包括解螺旋酶、DNAC、引物酶及DNA復(fù)制的起始區(qū)域小結(jié)主要成員主要作用DNAA識(shí)別復(fù)制起始位點(diǎn)解螺旋酶解開(kāi)DNA雙鏈SSB維持已解開(kāi)單鏈DNA的穩(wěn)定引物酶合成RNA引物TOPO使打結(jié)、纏繞、正超螺旋的DNA松馳DNAPOLⅢDNA復(fù)制DNAPOLⅠ水解引物、填補(bǔ)空隙、修復(fù)作用DNA連接酶催化雙鏈DNA中單鏈缺口的連接第三節(jié)DNA生物合成過(guò)程1復(fù)制的起始2鏈的延長(zhǎng)3復(fù)制的終止一復(fù)制的起始一DNA解成單鏈由特定蛋白質(zhì)識(shí)別復(fù)制起始位點(diǎn)（I），在解螺旋酶、TOPO酶及單鏈DNA結(jié)合蛋白的共同作用下，DNA解鏈，解旋，形成復(fù)制叉倒Y二引發(fā)體的生成解旋酶解開(kāi)雙鏈后引物酶進(jìn)入形成引發(fā)體（三）RNA引物的合成參與復(fù)制起始的蛋白因子名稱(chēng)功能DNAA蛋白辨認(rèn)起始點(diǎn)解螺旋酶（DNAB，REP）解開(kāi)DNA雙鏈DNAC協(xié)助解螺旋酶引物酶（DNAG）催化RNA引物生成SSB穩(wěn)定解開(kāi)的單鏈拓?fù)洚悩?gòu)酶理順DNA鏈ICECOLI復(fù)制起始點(diǎn)領(lǐng)頭鏈的合成復(fù)制過(guò)程簡(jiǎn)圖隨從鏈上不連續(xù)性片段的連接二、真核生物DNA生物合成（一）DNA的復(fù)制只發(fā)生在S期（二）多復(fù)制子（三）真核細(xì)胞含有5種DNA聚合酶（四）端粒復(fù)制染色體兩端DNA子鏈上最后復(fù)制的RNA引物，去除后留下空隙。5335533553333551端粒TELEMER指真核生物染色體線(xiàn)性DNA分子末端的結(jié)構(gòu)。2結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（1）由末端單鏈DNA序列和蛋白質(zhì)構(gòu)成。（2）末端DNA序列是多次重復(fù)的富含G、C堿基的短序列。3功能（1）維持染色體的穩(wěn)定性（2）維持DNA復(fù)制的完整性4端粒酶由RNA和蛋白質(zhì)組成（1）RNA發(fā)揮模板作用（2）蛋白質(zhì)發(fā)揮逆轉(zhuǎn)錄酶活性端粒酶的催化延長(zhǎng)作用爬行模型DNA聚合酶復(fù)制子鏈進(jìn)一步加工引物合成后，由DNAPOLⅢ（在真核細(xì)胞為DNA聚合酶和催化，按堿基配對(duì)原則，將DNTP逐一添加到引物3’末端，形成磷酸二酯鍵，使新合成的鏈不斷延長(zhǎng)二復(fù)制的延長(zhǎng)3’AAGACCTATT5’5’TTCTGGATAA3’DNAPOLIIIIII延長(zhǎng)岡崎片斷（三）終止階段原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片段在復(fù)制的終止點(diǎn)TER處匯合。半不連續(xù)復(fù)制SEMIDISCONTINUOUSREPLICATION領(lǐng)頭鏈連續(xù)復(fù)制而隨從鏈不連續(xù)復(fù)制，就是復(fù)制的半不連續(xù)性。領(lǐng)頭鏈LEADINGSTR隨從鏈LAGGINGSTR基因組能獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的功能單位稱(chēng)為復(fù)制子REPLICON，每個(gè)復(fù)制子都含有控制復(fù)制起始的起點(diǎn)IGIN，可能還有終止復(fù)制的終點(diǎn)TERMINUS。每個(gè)起始點(diǎn)產(chǎn)生兩個(gè)移動(dòng)方向相反的復(fù)制叉，復(fù)制完成時(shí)，復(fù)制叉相遇并匯合連接。習(xí)慣上把兩個(gè)相鄰起始點(diǎn)之間的距離定為一個(gè)復(fù)制子。（2）復(fù)制子DNA復(fù)制時(shí)，以復(fù)制起始點(diǎn)為中心，向兩個(gè)方向進(jìn)行復(fù)制但在低等生物中也可進(jìn)行單向復(fù)制（如滾環(huán)復(fù)制）①原核細(xì)胞染色體和質(zhì)粒固定起點(diǎn)雙向復(fù)制，②真核生物染色體DNA，復(fù)制時(shí)多個(gè)起始點(diǎn)。（3）復(fù)制方向三、需要引物DNA聚合酶不能直接聚合游離的DNTP，必須由一段核酸片段提供3’OH末端作為引物PRIMER，才能開(kāi)始聚合子代DNA鏈。RNA引物的大小，在原核生物中通常為50～100個(gè)核苷酸，而在真核生物中約為10個(gè)核苷酸。RNA引物的堿基順序，與其模板DNA的堿基順序相配對(duì)。四、雙向復(fù)制DNA復(fù)制時(shí)，以復(fù)制起始點(diǎn)為中心，向兩個(gè)方向進(jìn)行復(fù)制。但在低等生物中，也可進(jìn)行單向復(fù)制（如滾環(huán)復(fù)制）。五、半不連續(xù)復(fù)制（SEISCONTINUOUSREPLICATION）由于DNA聚合酶只能以5’→3’方向聚合子代DNA鏈，即模板DNA鏈的方向必須為3’→5’。因此，分別以?xún)蓷l親代DNA鏈作為模板聚合子代DNA鏈時(shí)的方式是不同的。定義在DNA復(fù)制過(guò)程中，親代DNA分子中以3’→5’方向的母鏈作為模板指導(dǎo)新的鏈以5’→3’方向連續(xù)合成另一股以5’→3’為方向的母鏈則指導(dǎo)新合成的鏈以5’→3’方向合成10002000個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的許多不連續(xù)的片段（崗崎片段）。這種復(fù)制方式稱(chēng)之為半不連續(xù)復(fù)制。PPPOHDNA合成方向不可能是3′→5′的解釋5’5’3’3’5’5’3’3’5’5’3’3’前導(dǎo)鏈隨從鏈崗崎片段半不連續(xù)復(fù)制以3→5方向的親代DNA鏈作模板的子代鏈在復(fù)制時(shí)基本上是連續(xù)進(jìn)行的，其子代鏈的聚合方向?yàn)?→3，這一條鏈被稱(chēng)為領(lǐng)頭鏈LEADINGSTR。而以5→3方向的親代DNA鏈為模板的子代鏈在復(fù)制時(shí)則是不連續(xù)的，其鏈的聚合方向也是5→3，這條鏈被稱(chēng)為隨從鏈LAGGINGSTR。前導(dǎo)鏈在引物的3’端按5’→3’方向連續(xù)不斷地合成的DNA鏈。隨從鏈在引物的3’端按5’→3’方向不連續(xù)合成的DNA鏈。岡崎片段隨從鏈上不連續(xù)合成的DNA短片段（不包括引物）由于親代DNA雙鏈在復(fù)制時(shí)是逐步解開(kāi)的，因此，隨從鏈的合成是一段一段的。DNA在復(fù)制時(shí)，由隨從鏈所形成的一些子代DNA短鏈稱(chēng)為岡崎片段OKAZAKIFRAGMENT。岡崎片段的大小，在原核生物中約為1000～2000個(gè)核苷酸，而在真核生物中約為100個(gè)核苷酸。五、DNA聚合酶（DNAPOLYMERASE）聚合酶III主要的復(fù)制酶，兼有校讀、糾錯(cuò)的功能有從5’3’延伸多核苷酸鏈的聚合酶活性，有模板依賴(lài)性，其延伸的方式是依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，將原料DNTP與末端核苷酸游離的3’OH以3’5’磷酸二酯鍵連接，同時(shí)釋出一個(gè)PPI。DNA聚合酶延伸多核苷酸鏈的方向總是5’3’有從3’5’外切酶的活性，以切除可能錯(cuò)配的核苷酸聚合酶I用于切除引物RNA并填補(bǔ)留下的空隙有從5’3’延伸多核苷酸鏈的聚合酶的活性；有從3’5’外切酶的活性，以切除可能錯(cuò)配的核苷酸；有從5’3’外切酶的活性，其作用是切除引物聚合酶II活性弱作用與聚合酶III相似有從5’3’延伸多核苷酸鏈的聚合酶活性；有從3’5’外切酶的活性323個(gè)氨基酸小片段5核酸外切酶活性大片段KLENOW片段604個(gè)氨基酸DNA聚合酶活性5核酸外切酶活性N端C端DNAPOLⅠKLENOW片段是實(shí)驗(yàn)室合成DNA，進(jìn)行分子生物學(xué)研究中常用的工具酶。六、DNA連接酶（LIGASE）將不連續(xù)的DNA片段以3’，5’磷酸二酯鍵連接起來(lái)，原核生物通過(guò)分解NAD為NMN和PI提供能量，真核生物則消耗ATP復(fù)制的終止由DNA聚合酶I完成切除引物，并且填補(bǔ)空隙，由DNA連接酶將DNA片段連接起來(lái)。一個(gè)復(fù)制子只含有一個(gè)專(zhuān)一的復(fù)制起點(diǎn)和復(fù)制結(jié)束的終點(diǎn)。一個(gè)完整的復(fù)制子在一個(gè)細(xì)胞周期只復(fù)制一次真核。原核生物染色體和質(zhì)粒都是獨(dú)立（只有單一個(gè)）復(fù)制子；真核細(xì)胞染色體中有多個(gè)復(fù)制子組成。（七）真核生物端粒的形成端粒TELOMERE是指真核生物染色體線(xiàn)性DNA分子末端的結(jié)構(gòu)部分，通常膨大成粒狀。其共同的結(jié)構(gòu)特征是由一些富含G、C的短重復(fù)序列構(gòu)成可重復(fù)數(shù)十次至數(shù)百次。線(xiàn)性DNA在復(fù)制完成后，其末端由于引物RNA的水解而可能出現(xiàn)縮短。故需要在端粒酶（TELOMERASE）的催化下，進(jìn)行延長(zhǎng)反應(yīng)。端粒酶是一種RNA蛋白質(zhì)復(fù)合體，它可以其RNA為模板，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程對(duì)末端DNA鏈進(jìn)行延長(zhǎng)。端粒（TELOMERE）染色體線(xiàn)性DNA分子末端通常膨大成粒狀共同的結(jié)構(gòu)特征富含TG短重復(fù)序列維持染色體穩(wěn)定端粒酶（TELOMERASE）RNA蛋白質(zhì)復(fù)合體逆轉(zhuǎn)錄酶延長(zhǎng)末端DNA鏈進(jìn)行在真核生物，由端粒酶（TELOMERASE）催化在真核線(xiàn)性DNA的末端形成一種特殊的結(jié)構(gòu)并與蛋白質(zhì)結(jié)合成端粒（TELOMERE）。端粒由成百個(gè)6個(gè)核苷酸的重復(fù)序列所組成（人為T(mén)TAGGG，四膜蟲(chóng)為T(mén)TGGGG）。端粒的功能為穩(wěn)定染色體的末端結(jié)構(gòu)，防止染色體間末端連接，并可補(bǔ)償滯后鏈5′末端在消除RNA引物后造成的空缺。復(fù)制可使端粒5′末端縮短，而端粒酶（TELOMERASE）可外加重復(fù)單位到5′末端上，結(jié)果使端粒維持一定的長(zhǎng)度。4、DNA的幾種復(fù)制方式（1）、直線(xiàn)雙向復(fù)制單點(diǎn)雙向，T7多點(diǎn)雙向，真核染色體DNA（2）、Θ型復(fù)制環(huán)狀雙鏈DNA，對(duì)稱(chēng)復(fù)制，單向或雙向（ECOLI）（3）、滾環(huán)復(fù)制環(huán)狀單鏈DNA，ΦX174（4）、D環(huán)復(fù)制（取代環(huán)復(fù)制）不對(duì)稱(chēng)復(fù)制，線(xiàn)粒體、葉綠體DNA。兩條鏈的復(fù)制起點(diǎn)不在同一點(diǎn)上，一條鏈先復(fù)制，另一條鏈保持單鏈而被取代當(dāng)一條鏈復(fù)制到一定程度時(shí)才暴露出另一條鏈的復(fù)制起點(diǎn)，另一條鏈才開(kāi)始復(fù)制。三、滾環(huán)復(fù)制和D環(huán)復(fù)制滾環(huán)復(fù)制ROLLINGCIRCLEREPLICATION是某些低等生物的復(fù)制形式，如X174和M13噬菌體等。滾環(huán)復(fù)制的過(guò)程D環(huán)復(fù)制DLOOPREPLICATION是線(xiàn)粒體DNAMITOCHONDRIALDNA，MTDNA的復(fù)制形式。線(xiàn)粒體MITOCHODRIADNAMTDNA哺乳動(dòng)物線(xiàn)粒體MTDNA是一個(gè)長(zhǎng)度為165KB的緊密雙鏈閉合環(huán)狀分子，外環(huán)為重鏈（H鏈），內(nèi)環(huán)為輕鏈（L鏈），以D環(huán)復(fù)制方式進(jìn)行。第二節(jié)DNA的損傷一、DNA的損傷（突變）由自發(fā)的或環(huán)境的因素引起DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的任何異常的改變稱(chēng)為DNA的損傷，也稱(chēng)為突變（MUTATION）。常見(jiàn)的DNA的損傷包括堿基脫落、堿基修飾、交聯(lián)，鏈的斷裂，重組等。（一）引起突變的因素1自發(fā)因素1自發(fā)脫堿基由于N糖苷鍵的自發(fā)斷裂，引起嘌呤或嘧啶堿基的脫落。每日可達(dá)近萬(wàn)個(gè)核苷酸殘基。2自發(fā)脫氨基胞嘧啶自發(fā)脫氨基可生成尿嘧啶，腺嘌呤自發(fā)脫氨基可生成次黃嘌呤。每日可達(dá)幾十到幾百個(gè)核苷酸殘基。3復(fù)制錯(cuò)配由于復(fù)制時(shí)堿基配對(duì)錯(cuò)誤引起的損傷，發(fā)生頻率較低。2物理因素由紫外線(xiàn)、電離輻射、X射線(xiàn)等引起的DNA損傷。其中，X射線(xiàn)和電離輻射常常引起DNA鏈的斷裂，而紫外線(xiàn)常常引起嘧啶二聚體的形成，如TT，TC，CC等二聚體。這些嘧啶二聚體由于形成了共價(jià)鍵連接的環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)，因而會(huì)引起復(fù)制障礙。3化學(xué)因素1脫氨劑如亞硝酸與亞硝酸鹽，可加速C脫氨基生成U，A脫氨基生成I。2烷基化劑這是一類(lèi)帶有活性烷基的化合物，可提供甲基或其他烷基，引起堿基或磷酸基的烷基化，甚至可引起鄰近堿基的交聯(lián)。3DNA加合劑如苯并芘，在體內(nèi)代謝后生成四羥苯并芘，與嘌呤共價(jià)結(jié)合引起損傷。4堿基類(lèi)似物如5FU等，可摻入到DNA分子中引起損傷或突變。5斷鏈劑如過(guò)氧化物，含巰基化合物等，可引起DNA鏈的斷裂。（二）DNA突變的類(lèi)型堿基的轉(zhuǎn)換第三節(jié)DNA損傷的修復(fù)DNA損傷的修復(fù)方式可分為直接修復(fù)和取代修復(fù)兩大類(lèi)?！蠬VUV→TT→光復(fù)活酶→修復(fù)TT（一）直接修復(fù)1光復(fù)活（LIGHTREPAIRING）這是一種廣泛存在的修復(fù)作用。光復(fù)活能夠修復(fù)任何嘧啶二聚體的損傷。其修復(fù)過(guò)程為光復(fù)活酶（PHOTOLYASE識(shí)別嘧啶二聚體并與之結(jié)合形成復(fù)合物→在300～600NM可見(jiàn)光照射下，酶獲得能量，將嘧啶二聚體的丁酰環(huán)打開(kāi)，使之完全修復(fù)→光復(fù)活酶從DNA上解離。2轉(zhuǎn)甲基作用在轉(zhuǎn)甲基酶的催化下，將DNA上的被修飾的甲基去除。此時(shí)，轉(zhuǎn)甲基酶自身被甲基化而失活。3直接連接DNA斷裂形成的缺口，可以在DNA連接酶的催化下，直接進(jìn)行連接而封閉缺口。（二）取代修復(fù)1切除修復(fù)EXCISIONREPAIRING這也是一種廣泛存在的修復(fù)機(jī)制，可適用于多種DNA損傷的修復(fù)。該修復(fù)機(jī)制可以分別由兩種不同的酶來(lái)發(fā)動(dòng)，一種是核酸內(nèi)切酶，另一種是DNA糖苷酶?！锌尚迯?fù)TT，電離輻射，某些化學(xué)誘變劑造成的DNA結(jié)構(gòu)的破壞參加的酶有特異的核酸內(nèi)切酶；外切酶；聚合酶；連接酶。2重組修復(fù)RECOMBINATIONREPAIRING這是DNA的復(fù)制過(guò)程中所采用的一種有差錯(cuò)的修復(fù)方式。重組修復(fù)，復(fù)制后修復(fù)3SOS修復(fù)由DNA損傷或抑制復(fù)制的處理所引起的一系列復(fù)雜的誘導(dǎo)效應(yīng)，稱(chēng)為應(yīng)急反應(yīng)（SOS）。這是一種在DNA分子受到較大范圍損傷并且使復(fù)制受到抑制時(shí)出現(xiàn)的修復(fù)機(jī)制，以SOS借喻細(xì)胞處于危急狀態(tài)。DNA分子受到長(zhǎng)片段高密度損傷，使DNA復(fù)制過(guò)程在損傷部位受到抑制。損傷誘導(dǎo)一種特異性較低的新的DNA聚合酶，以及重組酶等的產(chǎn)生。由這些特異性較低的酶繼續(xù)催化損傷部位DNA的復(fù)制，復(fù)制完成后，保留許多錯(cuò)誤的堿基，從而造成突變。DNA損傷與藥物評(píng)價(jià)1遺傳毒性試驗(yàn)遺傳毒性研究在藥物研發(fā)中處于比較的重要位置。遺傳毒性試驗(yàn)?zāi)軝z出DNA損傷及其損傷的固定。以基因突變、較大范圍染色體損傷、重組和染色體數(shù)目改變形式出現(xiàn)的DNA損傷的固定，一般被認(rèn)為是可遺傳效應(yīng)的基礎(chǔ)，并且是惡性腫瘤發(fā)展過(guò)程的環(huán)節(jié)之一。在檢測(cè)這些類(lèi)別損傷的試驗(yàn)中呈陽(yáng)性的化合物為潛在人類(lèi)致癌劑和或致突變劑。由于在人體中已建立了某些化合物的暴露和致癌性之間的關(guān)系，而對(duì)于遺傳性疾病尚難以證明有類(lèi)似的關(guān)系，故遺傳毒性試驗(yàn)主要用于致癌性預(yù)測(cè)。實(shí)驗(yàn)方法AMES試驗(yàn)（污染物致突變性檢測(cè)）是檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)基因突變的常用方法。沙門(mén)氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)鼠傷寒沙門(mén)氏菌（SALMONELLATYPHIMURIUM）的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型（HIS－）菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復(fù)突變的細(xì)胞外，一般只能分裂幾次，形成在顯微鏡下才能見(jiàn)到的微菌落。受誘變劑作用后，大量細(xì)胞發(fā)生回復(fù)突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見(jiàn)的菌落。在評(píng)價(jià)突變危害中常用的有特殊重要意義的試驗(yàn)TK基因突變?cè)囼?yàn)TK基因突變?cè)囼?yàn)是一種哺乳動(dòng)物體細(xì)胞基因正向突變?cè)囼?yàn)近年來(lái)其應(yīng)用價(jià)值有明顯的提高。TK基因突變?cè)囼?yàn)的檢測(cè)終點(diǎn)是胸苷激酶（THYINEKINASE，TK）基因的突變。在人類(lèi)，TK基因定位于17號(hào)染色體長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端；在小鼠則定位于11號(hào)染色體。故TK基因的突變屬于常染色體基因突變。TK基因的產(chǎn)物胸苷激酶在體內(nèi)催化從脫氧胸苷（TDR）生成胸苷酸（TMP）的反應(yīng)。在正常情況下，此反應(yīng)并非生命所必需，原因是體內(nèi)的TMP主要來(lái)自于脫氧尿嘧啶核苷酸（DUMP），即由胸苷酸合成酶催化的DUMP甲基化反應(yīng)生成TMP。但如在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入胸苷類(lèi)似物（如三氟胸苷，即TFTTRIFLUOTHYINE），則TFT在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸，進(jìn)而摻入DNA，造成致死性突變，故細(xì)胞不能存活。若TK基因發(fā)生突變，導(dǎo)致胸苷激酶缺陷，則TFT不能磷酸化，亦不能摻入DNA，故細(xì)胞在含有TFT的培養(yǎng)基中能夠生長(zhǎng)，即表現(xiàn)出對(duì)TFT的抗性。根據(jù)突變集落形成數(shù)，計(jì)算突變頻率，以判定受試物的致突變性。試驗(yàn)采用的靶細(xì)胞系主要有小鼠淋巴瘤細(xì)胞L5178Y以及人類(lèi)淋巴母細(xì)胞TK6和WTK1等。其基因型均為T(mén)K。TK基因突變?cè)囼?yàn)可檢出包括點(diǎn)突變、大的缺失、重組、染色體異倍性和其他較大范圍基因組改變?cè)趦?nèi)的多種遺傳改變。轉(zhuǎn)基因小鼠基因突變?cè)囼?yàn)轉(zhuǎn)基因小鼠基因突變?cè)囼?yàn)可在整體狀態(tài)下檢測(cè)基因突變比較不同組織包括生殖腺的突變率確定靶器官對(duì)誘發(fā)的遺傳改變作精確分析等。國(guó)外已陸續(xù)發(fā)展了多種用于突變檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物其中3種已投入商品化生產(chǎn)MUTATM小鼠、BIGBLUETM小鼠和XENOMOUSE小鼠它們分別采用大腸桿菌乳糖操縱子的LACZ和或LACL作為誘變的靶基因。反向限制性酶切位點(diǎn)突變分析法INVERSERESTRICTIONSITEMUTATIONIRSMIRSM適用于快速檢測(cè)誘變劑所致體內(nèi)外DNA的突變，這些突變的特點(diǎn)是使某一酶切位點(diǎn)變?yōu)榱硪幻盖形稽c(diǎn)。該方法建立者JENKINS等首先將IRSM應(yīng)用于化學(xué)誘變劑所致動(dòng)物體內(nèi)P53基因的突變檢測(cè)小鼠分別口服N乙基N亞硝基脲ENU、2乙酰氨基芴2AAF和二甲基酰肼DMH3天后以IRSM方法相應(yīng)地檢測(cè)小鼠脾、骨髓和肝組織P53基因第6內(nèi)含子區(qū)域的APA→AVA位點(diǎn)反向突變。結(jié)果表明ENU誘發(fā)肝組織P53基因突變的發(fā)生率為33AF使肝組織突變的發(fā)生率為25這一陽(yáng)性突變率反映出了不同誘變劑對(duì)相應(yīng)組織的致突變強(qiáng)度進(jìn)一步驗(yàn)證了該方法的高靈敏度和準(zhǔn)確性。它具有靈敏度高、快速、操作簡(jiǎn)便、以及突變檢測(cè)部位明確等優(yōu)點(diǎn)是一種較具實(shí)用價(jià)值和生命力的突變檢測(cè)手段。但是IRSM的不足之處是僅能檢測(cè)誘發(fā)限制性酶切位點(diǎn)反向的DNA突變。根據(jù)文獻(xiàn)資料分析化合物致突的發(fā)生具有一定的規(guī)律性即結(jié)構(gòu)類(lèi)似的一組化合物常常引起一些特定序列較固定的堿基改變。例如烷化劑和芳香胺類(lèi)雖易使一連串鳥(niǎo)嘌呤G3′端G發(fā)生突變1213這可能與該部位電荷密集有關(guān)多數(shù)活性氧生成物質(zhì)的DNA致突作用也具有類(lèi)似規(guī)律14CPG二核苷常常是DNA加成物致突變作用部位15所以CPG突變的檢測(cè)在化合物致突檢測(cè)中具有重要意義而CPG突變常引發(fā)某些固定酶切位點(diǎn)的變化。很顯然IRSM可較廣泛地應(yīng)用于遺傳毒性化合物致突作用的檢測(cè)。檢測(cè)染色體和染色體組畸變微核試驗(yàn)微核試驗(yàn)是檢測(cè)染色體或有絲分裂器損傷的一種遺傳毒性試驗(yàn)方法。是檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)染色體損傷的基本方法。方法最常用的是嚙齒類(lèi)動(dòng)物骨髓嗜多染紅細(xì)胞PCE微核試驗(yàn)。以受試物處理嚙齒類(lèi)動(dòng)物，然后處死，取骨髓，制片、固定、染色，于顯微鏡下計(jì)數(shù)PCE中的微核。染色體畸變?cè)囼?yàn)染色體畸變?cè)囼?yàn)是檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)影響染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)的基本方法。熒光原位雜交FISH技術(shù)熒光原位雜交最早由BAUMAN1980建立后由LUCAS1989首先應(yīng)用于染色體畸變分析。其原理是按檢測(cè)目標(biāo)準(zhǔn)備恰當(dāng)?shù)腄NA序列作為探針并用生物素標(biāo)記對(duì)載玻片上待測(cè)標(biāo)本中的DNA雜交最后通過(guò)雜交位點(diǎn)的熒光觀(guān)察染色體結(jié)構(gòu)或數(shù)目的改變。應(yīng)用特殊染色體和染色體某區(qū)域的熒光探針可在體內(nèi)檢測(cè)4種類(lèi)型的細(xì)胞遺傳學(xué)終點(diǎn)。1檢測(cè)中期細(xì)胞染色體畸變。2應(yīng)用亞染色體區(qū)域的探針檢測(cè)間期染色體斷裂和非整倍體。3應(yīng)用中心粒探針和或抗著絲點(diǎn)抗體檢測(cè)微核的形成。SCHRIEVERSCHWEMMET等利用CREST間接免疫熒光法以及小鼠次要和主要衛(wèi)星DNA探針在小鼠骨髓細(xì)胞證明了受試物引起微核的來(lái)源。4哺乳動(dòng)物精子非整倍體檢測(cè)。徐德祥1999用雙色FISH方法對(duì)丙烯腈接觸男工精子性染色體數(shù)目畸變進(jìn)行了檢測(cè)證明FISH技術(shù)用于檢測(cè)精子染色體數(shù)目畸變實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠。檢測(cè)DNA原始損傷單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)單細(xì)胞凝膠電泳分析SINGLECELLGELELETROPHESISSCGE是OSTLING等1984首創(chuàng)的以后經(jīng)SINGH等1988進(jìn)一步完善而逐漸發(fā)展起來(lái)的一種快速檢測(cè)單細(xì)胞DNA損傷的實(shí)驗(yàn)方法因其細(xì)胞電泳形狀頗似慧星又稱(chēng)慧星試驗(yàn)COMETASSAY。SCGE是評(píng)價(jià)遺傳毒性損害非常敏感的實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)到每16571037KG中01個(gè)DNA的斷裂。與經(jīng)典的染色體畸變、微核、SCE相比SCGE可以用于活細(xì)胞DNA的檢測(cè)也能用于死亡細(xì)胞DNA的分析使SCGE不僅可以研究低劑量下的生物效應(yīng)也可用于研究高劑量下的生物效應(yīng)同時(shí)SCGE又可提供DNA修復(fù)能力的信息這使得SCGE非常適用于評(píng)價(jià)受試物的遺傳毒性。

簡(jiǎn)介：激光掃描共聚焦顯微鏡LSCM技術(shù)簡(jiǎn)介HEXIAOHUISUMENG90513103LIWEI90513104INTRODUCTIONLSCM是一種高科技顯微鏡熒光顯微鏡成像為基礎(chǔ)，加裝了激光掃描裝置計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理使用紫外或可見(jiàn)光激發(fā)熒光探針得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像。無(wú)損傷的“光學(xué)切片”細(xì)胞三維立體機(jī)構(gòu)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)分析監(jiān)測(cè)光學(xué)顯微鏡部分激光發(fā)射器掃描裝置光檢測(cè)器計(jì)算機(jī)系統(tǒng)包括數(shù)據(jù)采集處理轉(zhuǎn)換應(yīng)用軟件圖像輸出設(shè)備LSCM的基本組成LSCM的原理LSCM對(duì)生物樣品的觀(guān)察的優(yōu)越性連續(xù)掃描三維離子熒光標(biāo)記同時(shí)多重物質(zhì)標(biāo)記LSCM的發(fā)展濾片式LSCM棱鏡狹縫分光式LSCMLSCM在醫(yī)學(xué)及生物學(xué)研究中的應(yīng)用LSCM常用于生物細(xì)胞或組織內(nèi)的分子原位鑒定和定量細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)學(xué)觀(guān)察以及活體細(xì)胞或組織功能的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)在生命科學(xué)領(lǐng)域的分子水平細(xì)胞及組織水平的研究中得到廣泛應(yīng)用一原位鑒定細(xì)胞或組織內(nèi)生物大分子觀(guān)察細(xì)胞及亞細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)在細(xì)胞原位用特異探針標(biāo)記出核酸蛋白質(zhì)多肽酶激素磷脂多糖受體等分子并用激光掃描共聚焦顯微鏡成像從而實(shí)現(xiàn)上述大分子的定位定性及定量檢測(cè)一在細(xì)胞原位檢測(cè)核酸二原位檢測(cè)蛋白質(zhì)抗體及其他分子三檢測(cè)細(xì)胞凋亡四細(xì)胞器觀(guān)察及測(cè)定五檢測(cè)細(xì)胞融合六觀(guān)察細(xì)胞骨架七檢測(cè)細(xì)胞間縫隙連接通訊八檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂肪一在細(xì)胞原位檢測(cè)核酸檢測(cè)核酸的熒光探針1碘化丙啶PI不能進(jìn)入完整的細(xì)胞膜2HOECHST33342HOECHST33258和DAPI3AO吖啶橙二原位檢測(cè)蛋白質(zhì)抗體及其他分子常用的熒光探針1熒光染料FITC藍(lán)光激發(fā)發(fā)出明亮綠色熒光2羅丹明比FITC光穩(wěn)定性好在生理?xiàng)l件下對(duì)PH變化不敏感熒光強(qiáng)度受細(xì)胞自發(fā)熒光的干擾較小3綠色熒光蛋白（GREENFLUESCENTPROTEINGFP）可對(duì)活細(xì)胞中的蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定位及動(dòng)態(tài)觀(guān)察三檢測(cè)細(xì)胞凋亡通常用的方法1細(xì)胞核形態(tài)觀(guān)察2脫氧核苷酸未端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法TUNEL3ANNEXINV試劑盒是檢測(cè)凋亡細(xì)胞膜損傷的新方法四細(xì)胞器觀(guān)察及測(cè)定不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康臉?biāo)記細(xì)胞器的方法也不同1線(xiàn)粒體MITOCHONDRIARODAMIN123MITOTRACKERGREENFMMITOTRACKERANGECMTMROSMITOTRACKERANGE2溶酶體LYSOSOME中性紅AOLYSOTRACKERGREENDND26BLUERED3內(nèi)質(zhì)網(wǎng)ENDOPLASMICRETICULUMDIOC64高爾基體GOLGIAPPARATUSNBDC6CERAMIE五檢測(cè)細(xì)胞融合根據(jù)不同細(xì)胞的特性將每一種細(xì)胞特有的物質(zhì)用不同的熒光控針標(biāo)記融合操作后確認(rèn)不同的熒光信號(hào)是否發(fā)生共定位于同一細(xì)胞如在同一細(xì)胞中同時(shí)檢測(cè)到上述不同的熒光信號(hào)則說(shuō)明已經(jīng)發(fā)生了細(xì)胞融合六觀(guān)察細(xì)胞骨架骨架微絲微管和中等纖維直標(biāo)一抗熒光探針如肌動(dòng)蛋白ACTIN間標(biāo)二抗熒光探針如微管蛋白TUBLIN肌動(dòng)蛋白ACTIN標(biāo)記肌動(dòng)蛋白是微絲的基本成分毒傘素鬼筆環(huán)肽與多聚體肌動(dòng)蛋白微絲專(zhuān)一性結(jié)合起來(lái)且親和作用強(qiáng)烈微管蛋白TUBULIN標(biāo)記七檢測(cè)細(xì)胞間縫隙連接通訊染料熒光黃LY黃色帶電荷的小分子強(qiáng)熒光物質(zhì)不通過(guò)細(xì)胞膜但可以很容易通過(guò)GJIC從標(biāo)記的細(xì)胞劃痕法傳輸?shù)洁徑?xì)胞觀(guān)察LY向鄰近細(xì)胞的傳輸速率用以表示GJIC連接通訊功能漂白細(xì)胞箭頭標(biāo)記熒光漂白前A及漂白后0B、2C和4DMIN時(shí)的熒光恢復(fù)情況經(jīng)瞬間漂白后細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度明顯變?nèi)蹼S著時(shí)問(wèn)的推移熒光逐漸恢復(fù)，至4MIN時(shí)D可見(jiàn)熒光強(qiáng)度明顯恢復(fù)FRAP法測(cè)定膀胱平滑肌細(xì)胞GJIC功能八檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂肪尼羅紅NILERED是一個(gè)理想的脂肪染色劑它只在疏水環(huán)境中顯示很強(qiáng)的熒光除了在所需顯示的脂質(zhì)中被溶解外尼羅紅與組織不發(fā)生任何反應(yīng)二活體細(xì)胞或組織功能的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)利用相應(yīng)的特異熒光控針標(biāo)記后觀(guān)察單個(gè)細(xì)胞不同部位或不同組織區(qū)域接受刺激后的整個(gè)變化過(guò)程一實(shí)時(shí)定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)CA2的變化二測(cè)定細(xì)胞內(nèi)PH變化三檢測(cè)膜電位的變化四檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧物種的產(chǎn)生五檢測(cè)藥物等跨膜進(jìn)入組織或細(xì)胞過(guò)程及其定位六檢測(cè)熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET七檢測(cè)熒光漂白恢復(fù)FRAPFLUO3較為常用基本原理A其乙酰羥甲基酯AM形式是FLUO3AM無(wú)熒光為不帶電荷的親脂性化合物易于滲透脂膜進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)B在胞內(nèi)被非特異酯酶水解釋放出游離酸形式的熒光探針?lè)肿哟擞坞x態(tài)也無(wú)熒光不易漏出胞外C一旦與CA2結(jié)合后便形成復(fù)合物并有較強(qiáng)的熒光產(chǎn)生從而發(fā)揮其鈣探針的作用KCL誘導(dǎo)的細(xì)胞外CA內(nèi)流測(cè)量培養(yǎng)分離的細(xì)胞20MFLUO3AM負(fù)載液3060MIN清洗、換液掃描二測(cè)定細(xì)胞內(nèi)PH變化常用的熒光探針有BCECF和6COFDABCECF的激發(fā)光譜是PH依賴(lài)性的比例法即分別用490NM和440NM光激發(fā)BCECF所得到的發(fā)射熒光之比比例熒光與PH有很好的線(xiàn)性關(guān)系最大分辯率為04PH單位三檢測(cè)膜電位的變化快響應(yīng)探針膜電位直接影響探針?lè)肿拥碾姺植级淖兤涔庾V響應(yīng)快慢響應(yīng)探針主要通過(guò)改變其在膜內(nèi)外的分布來(lái)對(duì)膜電位的變化作出反應(yīng)跨膜運(yùn)動(dòng)需要一定的時(shí)間所以反應(yīng)慢依探針對(duì)電位變化響應(yīng)速度將電位敏感探針?lè)譃榭祉憫?yīng)探針和慢響應(yīng)探針?biāo)臋z測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧物種的產(chǎn)生基本原理ADCFHDA進(jìn)入細(xì)胞后B經(jīng)酯酶作用脫去二酯生成不發(fā)熒光的DCFHC被超氧陰離子過(guò)氧化氫等活性氧化生成發(fā)熒光的DCFD活性氧自由基的含量與熒光探針之熒光強(qiáng)度成正相關(guān)DCFHDA常用于直接測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基的動(dòng)態(tài)變化五檢測(cè)藥物等跨膜進(jìn)入組織細(xì)胞過(guò)程及定位為檢測(cè)藥物分子病毒細(xì)菌等外界物質(zhì)能否跨膜進(jìn)入細(xì)胞組織需利用這些物質(zhì)特異性自發(fā)熒光對(duì)其進(jìn)行熒光標(biāo)記六檢測(cè)熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET由于熒光蛋白的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)其特定的熒光對(duì)理論上可用于活細(xì)胞中實(shí)時(shí)研究大分子間的相互作用熒光能量共振轉(zhuǎn)移FLUESCENCERESONANCEENERGYTRANSFERI熒光能量共振轉(zhuǎn)移受激態(tài)熒光素將其能量向另一個(gè)熒光素傳遞，使后者被激發(fā)，這一過(guò)程稱(chēng)熒光能量共振轉(zhuǎn)移。能量的提供者叫供體熒光素，能量的接受者叫受體熒光素。供體熒光素受體熒光素1供體與受體間的距離10NM或17NM2供體的發(fā)射光譜與受體的吸收光譜有實(shí)質(zhì)性的重疊II熒光能量共振轉(zhuǎn)移的條件488NM520NM650NM供體熒光素CY2受體熒光素CY3供體熒光素CY2受體熒光素CY3七檢測(cè)熒光漂白恢復(fù)FRAPFRAP是將待測(cè)細(xì)胞用熒光物質(zhì)標(biāo)記借助高強(qiáng)度脈沖式激光照射細(xì)胞的某一區(qū)域從而造成該區(qū)域熒光分子的光淬滅通過(guò)低強(qiáng)度激光掃描成像可以探測(cè)到該區(qū)域周?chē)姆谴銣鐭晒夥肿酉蚴苷丈鋮^(qū)域擴(kuò)散的速率從理論上講凡是能夠標(biāo)記待測(cè)分子并且能夠發(fā)生熒光淬滅的熒光物質(zhì)都可以使用1熒光漂白恢復(fù)FLUESCENCERECOVERAFTERPHOTOBLEACHINGFRAP檢測(cè)細(xì)胞連接間的信息傳遞激光掃描共焦顯微鏡的發(fā)展趨勢(shì)多光子激光掃描顯微鏡MULTIPHOTONLASERSCANNINGMICROSCOPY在生物及醫(yī)學(xué)成像單分子探測(cè)三維信息存儲(chǔ)微加工等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用展示了廣闊的發(fā)展前景多光子激光掃描顯微鏡簡(jiǎn)介多光子激光器波長(zhǎng)從7001000NM連續(xù)可調(diào)雙光子波長(zhǎng)350500NM連續(xù)三光子波長(zhǎng)230330NM連續(xù)應(yīng)用可直接清晰活體觀(guān)察某些非標(biāo)記神經(jīng)遞質(zhì)的分泌5HT或NADPH的分布雙光子激光掃描熒光顯微系統(tǒng)照射光波長(zhǎng)大于熒光染料吸收峰波長(zhǎng)2倍高能量2KW、超短脈沖兆分之一秒聚焦使聚焦點(diǎn)瞬間產(chǎn)生高密度光子出現(xiàn)雙光子吸收激發(fā)熒光雙光子吸收僅發(fā)生在聚焦點(diǎn)避免了焦點(diǎn)外激發(fā)而產(chǎn)生的漂白現(xiàn)象高能量、超短脈沖聚焦、穿透性更強(qiáng)50M500M488NM520NMFITC976NM多光子激光掃描顯微鏡優(yōu)點(diǎn)與局限優(yōu)點(diǎn)1對(duì)生物樣品的光損傷小2有效觀(guān)測(cè)時(shí)間長(zhǎng)3穿透深度深4熒光收集率高5對(duì)探測(cè)光路的要求低6適合多標(biāo)記復(fù)合測(cè)量局限1只能對(duì)熒光成像2樣品可能受到熱損傷若樣品含吸收激發(fā)光的色團(tuán)如黑色素3超快激光器較為昂貴例4長(zhǎng)時(shí)間觀(guān)察活體阿爾茨海默病模型小鼠－淀粉蛋白形成的狀況THANKSFYOURATTENTIONSANYQUESTIONS

簡(jiǎn)介：生物系宋彩霞DRUGDISCOVERYBEYONDTHE‘RULEOFFIVE’優(yōu)于“RULEOFFIVE”的藥物發(fā)現(xiàn)摘要“RULEOFFIVE”規(guī)則是小分子藥物設(shè)計(jì)的有效指導(dǎo)原則，但是在某種程度上被過(guò)分強(qiáng)調(diào)。“RULEOFFIVE”規(guī)則是針對(duì)口服藥物總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)性規(guī)律，所以存在著一些局限性。本文在此討論了優(yōu)于“RULEOFFIVE”規(guī)則的藥物發(fā)現(xiàn)的方法如積極主動(dòng)地發(fā)展與口服藥品平行的腸外藥物，發(fā)展與小分子藥物相平行的治療性抗體等生物制品。此外，更應(yīng)努力研究開(kāi)發(fā)天然藥物。新技術(shù)如合成生物就可以解決在基于天然藥物的藥物發(fā)現(xiàn)中存在的包括合成可行性和配基效力等方面的許多問(wèn)題。INTRODUCTION（引言）ALBIOAVAILABILITYDRUGDISCOVERYPRODUCTIVITY（口服生物利用度和藥物發(fā)現(xiàn)效率）NATURALPRODUCTSDRUGDISCOVERYPRODUCTIVITY（天然產(chǎn)物和藥物發(fā)現(xiàn)效率）SYNTHETICBIOLOGYFNATURALPRODUCTDRUGDISCOVERY（用于天然藥物發(fā)現(xiàn)的合成生物學(xué)）CONCLUSIONS（結(jié)論）CONTENTINTRODUCTION（引言）“RULEOFFIVE”規(guī)則，也稱(chēng)為L(zhǎng)IPINSKI定性規(guī)則，主要用于檢驗(yàn)藥物的口服生物利用度。內(nèi)容一個(gè)藥物分子中①氫鍵供體數(shù)大于5，②分子量（MWT）大于500，③油水分配系數(shù)（LOGP）大于5，④氮和氧原子總數(shù)（即氫鍵受體數(shù)）大于10時(shí)，它的口服生物利用度更小。“RULEOFFIVE”規(guī)則優(yōu)點(diǎn)使藥物設(shè)計(jì)更加合理，提高了發(fā)現(xiàn)藥物過(guò)程中對(duì)藥物的ADME（吸收，分布，代謝和消除）和其物理化學(xué)性能的重視，并且有助于在藥物篩選前期就對(duì)其ADME和后ADME毒性進(jìn)行檢測(cè)。缺點(diǎn)過(guò)分地強(qiáng)調(diào)“RULEOFFIVE”規(guī)則的局限是兩方面的一是它不僅過(guò)分強(qiáng)調(diào)藥物的口服生物利用度，二是它將許多藥物尤其是一些天然藥物排除在外?？诜锢枚群退幬锇l(fā)現(xiàn)效率生物利用度BIOAVAILABILITY是指藥物制劑中的活性藥物被全身利用的程度，包括進(jìn)入全身血液循環(huán)的劑量和速度。口服生物利用度（ALBIOAVAILABILITY）則是指藥物經(jīng)口服之后的生物利用度?？诜锢枚仁强诜幬锏囊粋€(gè)重要指標(biāo)，但是今天醫(yī)療實(shí)踐中的很多藥物是腸外給藥，而不是口服給藥。例如1204種美國(guó)FDA批準(zhǔn)的小分子藥物中，803種是可口服給藥的，421種通過(guò)腸外給藥。在這1204種藥物中只有73％（885種）通過(guò)了“RULEOFFIVE”規(guī)則，其中70（619種）是口服給藥的。過(guò)分地強(qiáng)調(diào)“RULEOFFIVE”規(guī)則及口服生物利用度致使藥物發(fā)現(xiàn)效率很低。例如第一種可口服利用的青霉素（青霉素V）的發(fā)現(xiàn)比青霉素G的發(fā)現(xiàn)晚15年之多；在肝素發(fā)現(xiàn)80多年后的2003年，第一種可口服利用的凝血酶抑制劑XIMELAGATRAN才被批準(zhǔn)通過(guò)，但在2006年因?yàn)槠渚哂懈味拘跃捅怀烦隽耸袌?chǎng)。在此期間，用于腸外給藥的凝血酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)很成功。如LEPIRUDIN（1998）、ARGATROBAN（2000）、和BIVALIRUDIN（2001），F(xiàn)ONDAPARINUX（2002）已用于臨床實(shí)踐，并顯著改善了皮下注射時(shí)的治療效果，對(duì)肝素禁忌的病患者的治療效果也得到了改善。因此，我們需要一個(gè)更有效的方法去發(fā)現(xiàn)新藥。開(kāi)發(fā)一些注射藥ENFUVIRTIDE一種新型的HIV融合抑制劑，由皮下注射給藥的，但是很少有口服藥物的報(bào)道。ABT737是BCL2和BCLXL的一種有效低劑量抑制劑，但是ABT737MW803；13個(gè)NO和S等雜原子是不能口服利用的，且不符合“RULEOFFIVE”規(guī)則。ABT263一種可口服利用的BCL2抑制劑，但這種藥物不符合“RULEOFFIVE”規(guī)則。開(kāi)發(fā)一些生物制品如一些治療性抗體（MABS），它不僅在發(fā)展單克隆抗體作為藥品方面很有效，而且也可引領(lǐng)小分子藥物的發(fā)展，早期，由一些MABS，如CETUXIMAB和TRASTUZUMAB產(chǎn)生的一些資料對(duì)于發(fā)展小分子抑制劑如GEFITINIBERLOTINIB和LAPATINIB是非常有利的發(fā)現(xiàn)新藥物時(shí)采取更有效的方法是明智的即①在將過(guò)多的人力和物力投入一種可口服利用的候選藥物之前，首先去開(kāi)發(fā)一種腸外給藥的候選藥物；②在將過(guò)多的人力和物力投入一個(gè)小分子候選藥物之前，首先去發(fā)展一種不論在哪里起作用的治療性抗體（很可能是通過(guò)胃腸給藥的）以上的方法可能對(duì)于發(fā)現(xiàn)那些作用于蛋白酶或決定蛋白質(zhì)相互作用的復(fù)雜靶標(biāo)的新型藥物尤為重要。基于天然產(chǎn)物的藥物發(fā)現(xiàn)的高效率，可能歸因于它們與蛋白質(zhì)靶標(biāo)結(jié)合的化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)被選擇確定。研究人員將SCONP系統(tǒng)與PSSC系統(tǒng)相結(jié)合，將會(huì)選擇一個(gè)結(jié)構(gòu)不很復(fù)雜，且能夠與復(fù)雜先導(dǎo)物的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)結(jié)合的天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)框架。這個(gè)結(jié)構(gòu)框架被用來(lái)作為一種新型化學(xué)模型或化學(xué)起始點(diǎn)，以建立目標(biāo)化合物文庫(kù)。天然產(chǎn)物和藥物發(fā)現(xiàn)效率天然藥物的在藥物中占據(jù)很重要的地位。尤其在治療嚴(yán)重的或威脅生命的疾病，如癌癥和傳染性疾病時(shí)的顯得更加重要。例如所有在1981年到2006年間全球范圍內(nèi)批準(zhǔn)的所有小分子藥物中有34％是天然產(chǎn)物或是它們的直接半合成衍生物；在全部批準(zhǔn)的155種小分子抗癌藥物中，有47％是天然產(chǎn)物或是它們的直接半合成衍生物；全部獲得批準(zhǔn)的抗菌藥物中，超過(guò)75％的是天然產(chǎn)物或其半合成衍生物（即98種中有74種）。在2000年2006年間，高通量生物合成生產(chǎn)批準(zhǔn)的藥品，這些批準(zhǔn)的小分子藥物中大約有50％也都?xì)w于天然產(chǎn)物。用于天然藥物發(fā)現(xiàn)的合成生物學(xué)基于天然產(chǎn)物的藥物發(fā)現(xiàn)的挑戰(zhàn)之一就是其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和合成的可行性。有機(jī)化學(xué)的進(jìn)步和新技術(shù)如合成生物學(xué)（生物合成工程）的出現(xiàn)將有助于克服這一難題。合成生物學(xué)是一個(gè)新興的科學(xué)領(lǐng)域，它旨在了解和設(shè)計(jì)生物系統(tǒng)或其組成部分，以解決各種天然產(chǎn)物無(wú)法解決的問(wèn)題。合成生物學(xué)很大程度上可以被認(rèn)為是“代謝工程或生物合成工程”的代名詞，就是通過(guò)重組DNA技術(shù)來(lái)改變生活系統(tǒng)（如微生物系統(tǒng)）的遺傳信息以獲得期望的終產(chǎn)物。雖然天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)高度復(fù)雜多樣，但其生物合成可通過(guò)很少的且非常簡(jiǎn)單的幾個(gè)類(lèi)型的反應(yīng)來(lái)完成。例如簡(jiǎn)單聚酮化合物雷帕霉素生物合成（圖1）是混合催化I型的PKS非核糖體的肽合成酶（NRPS）系統(tǒng)催化的。廣泛的雷帕霉素類(lèi)似物的生物合成有趣的是，當(dāng)DNA上那些含有激活甲基轉(zhuǎn)移酶和單加氧酶（RAPKIJMNOQL）的后PKS（RAPIJMNOQ）基因區(qū)域被切斷時(shí)，產(chǎn)生的突變體SHYGROSCOPICUSMG210無(wú)法產(chǎn)生前雷帕霉素，除非用外源起始物34二羥基環(huán)己烷羧酸飼喂或者補(bǔ)充基因RAPK。這表明，RAPK的產(chǎn)物參與起始物的合成或調(diào)節(jié)。這樣，飼喂MG210突變體以外源起始物，同時(shí)選擇性表達(dá)POSTPKS（RAPIJMNOQ）就可使突變修復(fù)，使得生物合成雷帕霉素廣泛的類(lèi)似物（圖3）成為了可能。雷帕霉素一種類(lèi)似物BC210（圖4）具有不穩(wěn)定的C39甲氧基，去除C39甲氧基時(shí)，去甲基雷帕霉素（T1259MIN，PAPP29NMS）與雷帕霉素（T1240MIN，PAPP2NMS）相比顯著改善了其代謝穩(wěn)定性和滲透性。BC210體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)顯示具有多種抗癌活性。經(jīng)過(guò)生物合成實(shí)現(xiàn)前體優(yōu)化能保持或增加配體效力，這一優(yōu)點(diǎn)也存在于其它案例中。例如，合成生物學(xué)方法對(duì)天然HSP90抑制劑雙氯西林Ⅰ優(yōu)化，得到NONQUINONE（KD0007ΜM，MW519），與先導(dǎo)物雙氯西林Ⅰ（KD024ΜM，MW559）相比，它對(duì)HSP90的親和力顯著增加，分子量得到減小（圖5）。相反，通過(guò)半合成法對(duì)另一種天然HSP90抑制劑格爾德霉素進(jìn)行優(yōu)化，得到的17烯丙基化TANESPIMYCIN（KD13ΜM，MW586），它與先導(dǎo)物格爾德霉素（KD12ΜMMW561）相比，它對(duì)HSP90具有類(lèi)似的親和力，但分子量卻增加了）（圖5）。生物合成的NONQUINONE與半合成的TANESPIMYCIN相比的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)是，因其不進(jìn)行氧化還原循環(huán)，對(duì)于靶點(diǎn)的毒性顯著降低，所以，治療前景更加廣闊。CONCLUSIONS（結(jié)論）“RULEOFFIVE”規(guī)則具有局限性為了提高藥物發(fā)現(xiàn)效率和解決未滿(mǎn)足的醫(yī)療需要這些問(wèn)題，我們似乎應(yīng)該接受一個(gè)綱領(lǐng)性的近似生物利用度的方法。藥物發(fā)現(xiàn)更應(yīng)致力于天然藥物的研究。新型技術(shù)如合成生物學(xué)，將會(huì)解決許多基于天然藥物的藥物發(fā)現(xiàn)中存在的挑戰(zhàn)性問(wèn)題，如結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和合成的可行性。THANKYOU

簡(jiǎn)介：及其稿件的相關(guān)要求中國(guó)獸藥雜志由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所主辦，農(nóng)業(yè)部主管，面向國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)行的唯一的國(guó)家級(jí)獸藥綜合性、公益性的學(xué)術(shù)性科技期刊。本刊于1955年創(chuàng)刊，一直圍繞農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)獸藥的中心工作積極開(kāi)展工作，宣傳國(guó)家獸藥監(jiān)管法律法規(guī)、解讀獸藥行業(yè)政策、宣傳獸藥檢驗(yàn)新技術(shù)、新標(biāo)準(zhǔn)，介紹獸藥生產(chǎn)新工藝、新方法，推廣科學(xué)用藥、安全用藥、合理用藥的基本常識(shí)。本刊內(nèi)容豐富，選材嚴(yán)謹(jǐn)，實(shí)用性強(qiáng)。讀者群涵蓋了從事獸藥藥政管理、獸藥研究開(kāi)發(fā)、獸藥生產(chǎn)、檢驗(yàn)、經(jīng)營(yíng)、使用、教學(xué)，以及相關(guān)專(zhuān)業(yè)畜牧、醫(yī)藥、化工等專(zhuān)業(yè)技術(shù)、經(jīng)營(yíng)、管理、監(jiān)督人員、教學(xué)科研人員以及廣大的獸醫(yī)工作者和規(guī)?；B(yǎng)殖者。本刊于2010年入選中國(guó)農(nóng)業(yè)核心期刊，2011年被評(píng)為第八屆中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)術(shù)類(lèi)優(yōu)秀期刊，成為宣傳優(yōu)秀企業(yè)、優(yōu)秀產(chǎn)品的重要平臺(tái)，受到行業(yè)內(nèi)各級(jí)部門(mén)廣泛關(guān)注，已成為獸醫(yī)獸藥領(lǐng)域內(nèi)最具影響力的雜志之一。2011年，新版中華人民共和國(guó)獸藥典解讀專(zhuān)欄受到行業(yè)內(nèi)的廣泛關(guān)注及好評(píng)。2012年，我們將以新的欄目、新的視角為行業(yè)發(fā)展做出貢獻(xiàn)。本刊新增“行業(yè)聚焦”和“獸藥經(jīng)營(yíng)”2個(gè)新欄目。我們將圍繞GSP的實(shí)施及大家關(guān)心的熱點(diǎn)問(wèn)題，約請(qǐng)有關(guān)專(zhuān)家撰寫(xiě)文章連續(xù)進(jìn)行深度解讀，敬請(qǐng)大家關(guān)注。您可直接登錄中國(guó)獸藥雜志網(wǎng)站ZGSYZZIVDC投稿或了解相關(guān)信息，敬請(qǐng)關(guān)注期待您來(lái)電、來(lái)訪(fǎng)，電話(huà)01062103602微生物與免疫欄目包括微生物相關(guān)的疫苗檢驗(yàn)檢測(cè)、菌種分離鑒定、免疫原性或效力實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)技術(shù)等內(nèi)容。2012年編輯部力邀企業(yè)在近兩年新批準(zhǔn)的新獸藥研究方面的相關(guān)文章例如豬鏈球菌病滅活疫苗或研發(fā)的國(guó)家重點(diǎn)產(chǎn)品如偽狂犬疫苗與診斷試劑盒等。2012年重點(diǎn)強(qiáng)化欄目產(chǎn)品與工藝欄目包括獸藥或疫苗方面的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)、工藝技術(shù)研究類(lèi)文章。2012年編輯部力邀企業(yè)在重大動(dòng)物疫病疫苗、動(dòng)物疾病診斷制劑、動(dòng)物疾病治療制劑等新產(chǎn)品以及例如細(xì)胞系MDCK微載體懸浮、細(xì)胞系BHK21生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)等新工藝方面的文章。作者投稿錄用流程登陸ZGSYZZIVDC作者注冊(cè)上傳WD格式稿件初審后送專(zhuān)家外審1審稿專(zhuān)家結(jié)論為退稿2審稿專(zhuān)家結(jié)論為修改后發(fā)表3審稿專(zhuān)家結(jié)論為采用編輯做退稿處理把退稿信息反饋給作者結(jié)合審稿意見(jiàn)及批注稿編輯再次審讀作者稿件把編輯和審稿專(zhuān)家意見(jiàn)一起反饋給作者作者網(wǎng)上上傳修改稿填寫(xiě)修改說(shuō)明錄用稿件發(fā)交納版面費(fèi)通知編輯擇期刊登主編終審需關(guān)注文稿的三個(gè)方面形式內(nèi)容格式一、文稿的形式綜述型反映的是某一領(lǐng)域的概況研究型是針對(duì)具體問(wèn)題的研究應(yīng)用型是已知理論、原理、技術(shù)的新應(yīng)用其他二、文稿內(nèi)容（一）選題題材要新穎的、熱點(diǎn)的、實(shí)用的。所謂“新”，包括新發(fā)明、新發(fā)現(xiàn)、新應(yīng)用、新產(chǎn)品、新技術(shù)、新工藝、新理論、新方法、新觀(guān)點(diǎn)、新規(guī)律等。或者新研究對(duì)象、新研究角度、新材料、刊正前人錯(cuò)誤、解決爭(zhēng)議、補(bǔ)充和發(fā)展前人成果等。中國(guó)知網(wǎng)維普資訊萬(wàn)方數(shù)據(jù)CNWWWNCBINLMNIHGOVPUBMED（美國(guó)國(guó)家醫(yī)學(xué)圖書(shū)館期刊文獻(xiàn)檢索系統(tǒng)）（二）科學(xué)性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量、等級(jí)、來(lái)源，陰性陽(yáng)性對(duì)照的安排，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的科學(xué)性，文字與表格中數(shù)據(jù)的對(duì)應(yīng)，結(jié)果與結(jié)論的統(tǒng)一等等。（三）邏輯性文章可根據(jù)不同的內(nèi)容深度及相互的對(duì)應(yīng)關(guān)系進(jìn)行邏輯分層，結(jié)構(gòu)層次要合理。同一級(jí)標(biāo)題盡量做到平衡統(tǒng)一；不同層次的標(biāo)題，在內(nèi)容上應(yīng)相互聯(lián)系?？萍颊撐膶哟我话悴怀^(guò)4級(jí)，各級(jí)統(tǒng)一用阿拉伯?dāng)?shù)字編寫(xiě)。（四）語(yǔ)言文字語(yǔ)言要連貫通順，表達(dá)清晰，避免口語(yǔ)化。文字規(guī)范、術(shù)語(yǔ)準(zhǔn)確。不同形式文稿內(nèi)容的側(cè)重點(diǎn)綜述性文章要注重深度既要對(duì)國(guó)內(nèi)外該領(lǐng)域研究的歷史和現(xiàn)狀進(jìn)行科學(xué)的歸納和分析，也要對(duì)該領(lǐng)域存在的問(wèn)題和發(fā)展趨勢(shì)提出自己的獨(dú)特見(jiàn)解，以對(duì)該領(lǐng)域下一步的研究方向起到指導(dǎo)作用。研究性文章應(yīng)明確研究的創(chuàng)新點(diǎn)這類(lèi)文章一定要是自己的研究。文章應(yīng)明確界定自己提出了什么、解決了什么、改進(jìn)了什么，說(shuō)明研究在實(shí)驗(yàn)、理論或研究成果方面具有的創(chuàng)新點(diǎn)，以及它的驗(yàn)證結(jié)果，不能照搬參考文獻(xiàn)或是已知內(nèi)容。應(yīng)用性文章要側(cè)重于反映自己的具體工作這類(lèi)文稿對(duì)已公知的基礎(chǔ)理論、相關(guān)技術(shù)一筆帶過(guò)或采用參考文獻(xiàn)的形式進(jìn)行角注。三、文稿格式科學(xué)技術(shù)報(bào)告、學(xué)位論文和學(xué)術(shù)論文的編寫(xiě)格式GB77131987指出，規(guī)范的科技論文應(yīng)包含標(biāo)題、作者署名、摘要、關(guān)鍵詞、引言、正文、結(jié)語(yǔ)、參考文獻(xiàn)。（一）題名能展現(xiàn)論文特定內(nèi)容字?jǐn)?shù)一般不超過(guò)20字。用詞要確切、簡(jiǎn)明、嚴(yán)謹(jǐn)。詞語(yǔ)的安排要符合邏輯關(guān)系。盡可能包含論文的主題詞。采用肯定或否定的陳述句式。文題相符。常見(jiàn)的問(wèn)題缺乏新意過(guò)于謙虛淺析、淺談、試論、初探，新解、新論、新思考表達(dá)不確切（小題大做、文不對(duì)題、存在歧義、繁瑣冗長(zhǎng)）用詞不規(guī)范“韓士超能”在搶救瀕死仔豬中的應(yīng)用（復(fù)合維生素葡萄糖）（二）作者署名作者多位作者不在同一單位，可在其名字的右上角加“1，2”角標(biāo)單位單位的名稱(chēng)、所在地、郵政編碼第一作者簡(jiǎn)介在注腳處注明第一作者相關(guān)信息注意事項(xiàng)單位必須用全稱(chēng)標(biāo)注，不得用簡(jiǎn)稱(chēng)。中科院、農(nóng)科院多位作者不同單位時(shí)，作者、單位、角標(biāo)必須準(zhǔn)確對(duì)應(yīng)中英文對(duì)應(yīng)（三）摘要摘要是以提供文獻(xiàn)內(nèi)容梗概為目的，不加評(píng)論和補(bǔ)充解釋?zhuān)?jiǎn)明確切地記述文獻(xiàn)重要內(nèi)容的短文。摘要應(yīng)有獨(dú)立性和自明性，擁有與文章同等量的主要信息。摘要的分類(lèi)報(bào)道性摘要指明主題范圍及內(nèi)容的簡(jiǎn)明摘要，適用于創(chuàng)新性較多的文章。學(xué)術(shù)研究類(lèi)文章需寫(xiě)出報(bào)道性摘要。指示性摘要指明論題及取得成果的性質(zhì)和水平的摘要，對(duì)研究的主要內(nèi)容有一個(gè)輪廓性的了解。綜述類(lèi)的文章需寫(xiě)出指示性摘要。報(bào)道指示性摘要信息價(jià)值較高的部分采用報(bào)道格式，其他部分采用指示性格式。結(jié)構(gòu)式摘要目的OBJECTIVEPURPOSEAIM、方法METHOD、結(jié)果RESULTS、結(jié)論CONCLUSION4個(gè)要素，以其層次清晰、內(nèi)容完整、重點(diǎn)突出、觀(guān)點(diǎn)明確、條理分明的優(yōu)點(diǎn)在近幾年得到廣泛應(yīng)用原則要素要齊全，字?jǐn)?shù)一般不超過(guò)300字。一般不分段。避免使用“我們”、“本文”、“作者”作為主語(yǔ)。不加評(píng)論和注釋?zhuān)绕涫亲晕以u(píng)價(jià)。（本研究已達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平）不引用文獻(xiàn)，除非你證實(shí)或否定了他人已出版的著作避免摘要的第一句話(huà)簡(jiǎn)單重復(fù)題名或題名的一部分。排除本學(xué)科領(lǐng)域已成為常識(shí)的內(nèi)容。不談或盡量少談背景信息，也不要包括作者對(duì)未來(lái)的計(jì)劃（有關(guān)XXX方面的研究有待進(jìn)一步開(kāi)展。）使用規(guī)范化的名詞術(shù)語(yǔ)和符號(hào)。結(jié)構(gòu)嚴(yán)謹(jǐn)，語(yǔ)言精練，語(yǔ)義表達(dá)確切，做到摘要中每一句話(huà)都具備信息價(jià)值。英文摘要題名與中文一致，準(zhǔn)確ACCURACY、簡(jiǎn)練BREVITY、清晰CLARITY）。時(shí)態(tài)一般過(guò)去時(shí)，一般現(xiàn)在時(shí)。語(yǔ)態(tài)不強(qiáng)調(diào)必須用被動(dòng)或主動(dòng)語(yǔ)態(tài)應(yīng)視具體情況可能情況下盡量使用動(dòng)詞的主動(dòng)語(yǔ)態(tài)注意意譯。符合英文的語(yǔ)法規(guī)和表達(dá)習(xí)慣。四關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞是能反映論文主題概念的詞或詞組每篇論文選擇關(guān)鍵詞3～5個(gè)可從題名和摘要中選出關(guān)鍵詞按其重要性排列（五）前言前言（也稱(chēng)引言）作為論文的開(kāi)場(chǎng)白，主要圍繞“為什么研究”來(lái)寫(xiě)。先簡(jiǎn)短介紹寫(xiě)作背景、相關(guān)領(lǐng)域前人所做的工作和研究的概況，提出文中要研究的問(wèn)題，包括論文追求的目標(biāo)、研究范圍和理論、技術(shù)方案的選取等，引導(dǎo)讀者閱讀和理解全文。原則一要開(kāi)門(mén)見(jiàn)山，不繞圈子，避免大篇幅地講述歷史淵源和論題研究過(guò)程。二要突出重點(diǎn)，不應(yīng)詳述同行熟知的及教科書(shū)上已有陳述的基本理論、實(shí)驗(yàn)方法。三要實(shí)事求是，切忌用不適之詞來(lái)評(píng)價(jià)文章的意義。四要注意與結(jié)論相呼應(yīng)，但避免雷同。五要言簡(jiǎn)意賅，不要用華麗的詞藻進(jìn)行刻意的描述。（六）正文引言是提出問(wèn)題“研究什么為什么研究”，正文則是分析問(wèn)題和解決問(wèn)題，主要回答“怎樣研究”。研究性論文一般包括材料、方法、結(jié)果、討論四部分。正文中涉及到的細(xì)節(jié)問(wèn)題對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響或密切相關(guān)的實(shí)驗(yàn)材料必須給出詳細(xì)信息，比如中藥的產(chǎn)地，化藥對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)品的含量，生藥生產(chǎn)材料的來(lái)源、純粹性，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的級(jí)別等。非公知公認(rèn)的名詞術(shù)語(yǔ)在首次出現(xiàn)時(shí)必須加括號(hào)注明原文?？萍颊撐氖褂玫牧亢蛦挝粦?yīng)采用國(guó)家法定的計(jì)量單位。不應(yīng)該再繼續(xù)使用已經(jīng)被廢除的量名稱(chēng)和非法定單位以及非標(biāo)準(zhǔn)單位符號(hào)4圖要精心設(shè)計(jì)和繪制，圖文清晰，大小適中，線(xiàn)條均勻，主輔線(xiàn)分明。圖應(yīng)具有自明性，切忌與表及文字的表述重復(fù)。圖的橫、縱坐標(biāo)要注明對(duì)應(yīng)的量和單位（TH）。顯微鏡病理圖片應(yīng)注明染色方法和放大倍數(shù)。5表格設(shè)計(jì)要科學(xué)，一般采用三線(xiàn)表的格式。表格內(nèi)不能有空白項(xiàng)。表頭內(nèi)項(xiàng)目因空間有限而縮寫(xiě)某項(xiàng)要素名稱(chēng)時(shí)，應(yīng)在表格注釋中說(shuō)明相關(guān)縮寫(xiě)的名稱(chēng)。6圖（表）一般隨文排，先文字后圖（表）。量和單位GB31003102－93列出了614個(gè)量和單位的名稱(chēng)。我國(guó)法定單位包括5部分國(guó)際單位制（SI）基本單位、具有專(zhuān)門(mén)名稱(chēng)的SI導(dǎo)出單位、我國(guó)選定的非SI單位、由以上單位構(gòu)成的組合單位、由SI詞頭與以上單位構(gòu)成的倍數(shù)單位。量的符號(hào)通常是單個(gè)拉丁或希臘字母，有時(shí)帶有下標(biāo)或者其他說(shuō)明性標(biāo)記。一律用斜體只有PH例外。速度V、體積V、時(shí)間T、波長(zhǎng)Λ、質(zhì)量M、攝氏溫度T，熱力學(xué)溫度T、功率P、壓強(qiáng)P、VMAX量符號(hào)的書(shū)寫(xiě)時(shí)一定要注意區(qū)分大小寫(xiě)。圖表中量的數(shù)值采用“量單位”的標(biāo)準(zhǔn)化表示法，TH不要寫(xiě)成TH單位符號(hào)必須正體書(shū)寫(xiě)。M、S、MIN盡量使用單位的國(guó)際符號(hào)。24秒（24S）單位的選取應(yīng)使量的數(shù)值處于011000之間。000394M394MM1401PA1401KPA組合單位符號(hào)的書(shū)寫(xiě)，相乘的用ABC或ABC，相除的寫(xiě)作ABC或ABC1不得寫(xiě)成ABC或者ABC。不得把PPMPPBPPT等縮寫(xiě)字作為單位使用。PPM（PARTSPERMILLION）106PPB（PARTSPERBILLION）109美、法等1012（英、德等）PPT（PARTSPERTRILLION）1012美、法等1018（英、德等）存在問(wèn)題使用已經(jīng)廢棄的量名稱(chēng)。如重量（質(zhì)量）未使用國(guó)家規(guī)定的量符號(hào)。如質(zhì)量未用M，而用W；或者用多個(gè)字母構(gòu)成一個(gè)量符號(hào)。如臨界溫度CRITICALTEMPERATURE寫(xiě)成CT正確的應(yīng)該是TC使用已廢棄的非法定單位或者單位符號(hào)。如RMP轉(zhuǎn)每分，RMIN，M物質(zhì)的量濃度MOLLMMHG壓強(qiáng)，PA非普及性期刊使用單位的中文符號(hào)。12天（12D）單位時(shí)而用中文符號(hào)，時(shí)而用國(guó)際符號(hào)。如天，D；10MG天不善于使用詞頭構(gòu)成十進(jìn)倍數(shù)或分?jǐn)?shù)單位。如100000M000036A在圖、表中未采用“量單位”的標(biāo)準(zhǔn)化表示法。插圖插圖的分類(lèi)線(xiàn)條圖和照片圖。線(xiàn)條圖又包括簡(jiǎn)易函數(shù)圖、各種示意圖、流程圖等。照片圖一般分為彩色圖和黑白圖。函數(shù)圖的要素（體現(xiàn)各項(xiàng)規(guī)范化要求最為全面）圖序、圖題、坐標(biāo)軸、標(biāo)值線(xiàn)、標(biāo)值、標(biāo)目、曲線(xiàn)、圖注、圖例、注釋或說(shuō)明由幾個(gè)分圖組成的插圖中，當(dāng)橫坐標(biāo)的標(biāo)目、標(biāo)值及標(biāo)值線(xiàn)均相同時(shí)，以疊置為宜，此時(shí)分圖題所示的條件可直接標(biāo)入圖中分圖題刪去。當(dāng)一族曲線(xiàn)的線(xiàn)性比較接近，擠在一起影響閱讀時(shí)，可以共用一個(gè)坐標(biāo)軸而分立另外一個(gè)坐標(biāo)軸。當(dāng)一幅圖上有兩條以上不同的函數(shù)關(guān)系曲線(xiàn)是，他們的縱坐標(biāo)需要分立于圖的兩側(cè)。右側(cè)縱坐標(biāo)的標(biāo)目置于坐標(biāo)外側(cè)，自下而上書(shū)寫(xiě)，頂左底右。插圖中圖注符號(hào)的大小要適中圖例形狀或類(lèi)型要有明顯區(qū)別，建議選用“■”“□”“●”“○”“▲”“△”，使曲線(xiàn)更加容易區(qū)分，便于閱讀。表格無(wú)線(xiàn)表項(xiàng)目和數(shù)據(jù)比較少，且內(nèi)容簡(jiǎn)單。不便于排版校對(duì)，也不利于閱讀時(shí)進(jìn)行對(duì)比分析。系統(tǒng)表用于表述隸屬關(guān)系的多層次事項(xiàng)?？ň€(xiàn)表功能比較齊全。缺點(diǎn)是橫線(xiàn)、豎線(xiàn)比較多，且欄頭還有斜線(xiàn)，顯得比較繁雜。三線(xiàn)表是由卡線(xiàn)表簡(jiǎn)化和改造而成的。它以卡線(xiàn)表為基礎(chǔ)，欄頭取消了斜線(xiàn)，省略了橫豎分隔線(xiàn)（行線(xiàn)、欄線(xiàn)），通常只有三條線(xiàn)（注意沒(méi)有豎線(xiàn)），即頂線(xiàn)、底線(xiàn)和欄目線(xiàn)，三線(xiàn)表也由此得名。三線(xiàn)表其實(shí)不一定只有三條線(xiàn)，必要時(shí)可加輔助線(xiàn)，但無(wú)論加多少條輔助線(xiàn)，仍稱(chēng)作三線(xiàn)表。對(duì)表格的要求項(xiàng)目欄中各欄標(biāo)注應(yīng)齊全。表中的術(shù)語(yǔ)、符號(hào)、單位等應(yīng)與圖及文字表述所用的一致。若所有欄的單位相同，應(yīng)將單位標(biāo)注在表的右上角，不寫(xiě)單位二字。欄目有單層次也有多層次的。多層次欄目需用輔助線(xiàn)隔開(kāi)。表身內(nèi)的數(shù)字一般不帶單位，可歸并在欄目中。相鄰欄或上下欄的內(nèi)容相同，應(yīng)重復(fù)寫(xiě)出或采用共用欄的方式處理，不能用“同左”或“同上”。表身無(wú)數(shù)字的欄內(nèi)代號(hào)應(yīng)謹(jǐn)慎書(shū)寫(xiě)，未測(cè)或者空白項(xiàng)一般用“”代表，未發(fā)現(xiàn)用“”代表（最好在表下方做注釋說(shuō)明），實(shí)測(cè)結(jié)果為0時(shí)一定要寫(xiě)出。統(tǒng)計(jì)符號(hào)統(tǒng)計(jì)學(xué)名詞及符號(hào)規(guī)定常用統(tǒng)計(jì)學(xué)符號(hào)一般用斜體樣本的算術(shù)平均數(shù)用英文小寫(xiě)X不用大寫(xiě)X也不用MEAN標(biāo)準(zhǔn)差用英文小寫(xiě)S不用SDMEANSD標(biāo)準(zhǔn)誤用英文小寫(xiě)SX不用SET檢驗(yàn)用英文小寫(xiě)TF檢驗(yàn)用英文大寫(xiě)F卡方檢驗(yàn)用希文小寫(xiě)Χ2相關(guān)系數(shù)用英文小寫(xiě)R樣本數(shù)用英文小寫(xiě)N概率用英文大寫(xiě)P部分外文字母的編排物種的學(xué)名屬、種名包括亞種、變種要斜體，屬名首字母大寫(xiě)屬以上用拉丁文正體BACILLUSSUBTILISESCHERICHIACOLISTAPHYLOCOCCUSAUREAUS限制性?xún)?nèi)切酶前3個(gè)字母用斜體后面的字母和編碼用正體如BAMHⅠ、ECⅠ、MSPⅠ、SAU3AI等氨基酸和堿基的縮寫(xiě)氨基酸縮寫(xiě)用3個(gè)字母表示時(shí)僅第一個(gè)字母大寫(xiě)其余小寫(xiě)正體GLU；堿基縮寫(xiě)為大寫(xiě)正體基因及表型產(chǎn)物的符號(hào)表示基因座名的英文縮寫(xiě)用斜體一般為小寫(xiě)字母基因位點(diǎn)用正體大寫(xiě)，如大腸桿菌AROC基因。蛋白名稱(chēng)的英文縮寫(xiě)用正體，首寫(xiě)字母大寫(xiě)或全部大寫(xiě)。（七）結(jié)論結(jié)論不是論文的必要組成部分，如果文中不可能明顯導(dǎo)出應(yīng)有的結(jié)論，也可以沒(méi)有結(jié)論而進(jìn)行必要的討論。結(jié)論一般應(yīng)與引言相呼應(yīng)，回答“做了什么”。但不應(yīng)寫(xiě)成正文中各段小結(jié)的簡(jiǎn)單重復(fù)。結(jié)論應(yīng)完整、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)潔地指出以下內(nèi)容試驗(yàn)結(jié)果所揭示的原理及其普遍性；研究中有無(wú)發(fā)現(xiàn)例外或本論文尚難以解釋和解決的問(wèn)題；與先前已發(fā)表過(guò)的研究工作的異同；本論文在理論上和實(shí)用上的意義和價(jià)值；進(jìn)一步深入研究本課題的建議。（八）參考文獻(xiàn)著錄參考文獻(xiàn)既能方便地把論文作者的成果與前人的成果區(qū)分開(kāi)來(lái)，是對(duì)他人勞動(dòng)的尊重，也會(huì)起到索引作用。凡引用已發(fā)表文獻(xiàn)中的方法、論點(diǎn)及數(shù)據(jù)等，都要對(duì)它們?cè)谡闹谐霈F(xiàn)的地方予以標(biāo)明，并在文末列出參考文獻(xiàn)表。引用文獻(xiàn)采用“順序編碼制”，應(yīng)按出現(xiàn)的次序用阿拉伯?dāng)?shù)字在引用處右上角用肩碼注明，文后所列出的參考文獻(xiàn)序號(hào)應(yīng)與正文中標(biāo)注的序號(hào)一致。112，140。文獻(xiàn)要避免集中引用，如16，要選擇已公開(kāi)發(fā)表的、最必要、最權(quán)威、最新的文獻(xiàn)（未發(fā)表的不能列入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)）。綜述類(lèi)文章參考文獻(xiàn)要多為近3～5年內(nèi)新文獻(xiàn)，數(shù)量一般不少于10篇。著錄參考文獻(xiàn)應(yīng)齊全、規(guī)范。參考文獻(xiàn)類(lèi)型標(biāo)識(shí)碼期刊文章J、學(xué)位論文D、報(bào)告R、論文集C、專(zhuān)著M、報(bào)紙文章N、網(wǎng)上期刊JOL、專(zhuān)利P、標(biāo)準(zhǔn)S、數(shù)據(jù)庫(kù)DB、網(wǎng)上電子公告EB。ROBBEAUSTERMANSSTABELJRPALMERMVEVALUATIONOFTHEGAMMAJJVETDIAGNINVEST2006182189194中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心狂犬病防控知識(shí)問(wèn)答EBOL2009061220090702WWWCADC陰健中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用M北京中國(guó)古籍出版社199530姜錫洲一種溫?zé)嵬夥笏幹苽浞桨钢袊?guó)881056073P19890726謝希德創(chuàng)造學(xué)習(xí)的新思路N人民日?qǐng)?bào)1998122510值此新年來(lái)臨之際，預(yù)祝大家新年快樂(lè)中國(guó)獸藥雜志編輯部

簡(jiǎn)介：核苷酸代謝METABOLISMOFNUCLEOTIDES五年制臨床醫(yī)學(xué)CHAPTER8JIANJUNXIEMDPHDDEPARTMENTOFBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGYMEDICALCOLLEGEOFSHANTOUUNIVERSITYSHANTOUCHINA為什么要學(xué)習(xí)核苷酸代謝一般發(fā)作部位為大母趾關(guān)節(jié)，踝關(guān)節(jié)，膝關(guān)節(jié)等。長(zhǎng)期痛風(fēng)患者有發(fā)作于手指關(guān)節(jié)，甚至耳廓含軟組織部分的病例。急性痛風(fēng)發(fā)作部位出現(xiàn)紅、腫、熱、劇烈疼痛，一般多在子夜發(fā)作，可使人從睡眠中驚醒。痛風(fēng)（代謝性關(guān)節(jié)炎）一、疾病患者在發(fā)病時(shí)會(huì)毀壞自己的容貌用各種器械把臉弄得猙獰可怕。這種疾病患者常常被束縛在床上或輪椅上。自毀容貌癥患者大多死于兒童時(shí)代很少活到20歲以后。自毀容貌癥嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病多于出生后3個(gè)月內(nèi)開(kāi)始感染病毒、真菌、原蟲(chóng)和細(xì)菌反復(fù)發(fā)生肺炎慢性腹瀉、口腔與皮膚念珠菌感染及中耳炎等。核酸是人體細(xì)胞中的關(guān)鍵物質(zhì)，補(bǔ)充外源核酸，就能延年益壽，乃至“長(zhǎng)壽不老”；補(bǔ)充DNA，則細(xì)胞生長(zhǎng)加快，人體機(jī)能就充滿(mǎn)活力。我們所研究出的生命核酸采取更為科學(xué)的提取方法，直接從動(dòng)物臟器中提取。DNA含量高，純度高，與人體同源性高。加上產(chǎn)品是口服液，更易被人體腸胃所吸收和利用。珍奧核酸2000年核酸是營(yíng)養(yǎng)必需品一部曾經(jīng)轟轟烈烈的鬧劇二、生活世界上曾有38位科學(xué)家因研究核酸而獲得諾貝爾獎(jiǎng)。1998年4月開(kāi)始建廠(chǎng)，同時(shí)其產(chǎn)品被列入“98年國(guó)家級(jí)火炬計(jì)劃”，“確定為全國(guó)基因工程重大成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目”。在短短兩年時(shí)間內(nèi)，“珍奧”獲得了“全國(guó)第十二屆發(fā)明展覽金獎(jiǎng)”，中國(guó)保健科技協(xié)會(huì)“向消費(fèi)者推薦產(chǎn)品”，衛(wèi)生部“2000年中老年保健國(guó)際學(xué)術(shù)論壇暨中國(guó)保健品國(guó)際博覽會(huì)唯一金獎(jiǎng)”，遼寧省政府“醫(yī)藥行業(yè)科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)?！?001年2月底，“衛(wèi)生部中國(guó)保健科技學(xué)會(huì)”，召開(kāi)了一個(gè)“聽(tīng)證會(huì)”，得出“核酸保健品有益于健康”的結(jié)論。珍奧核酸聲稱(chēng)世界衛(wèi)生組織呼吁成年人每天要補(bǔ)充外源核酸1至5克。難道珍奧核酸真的能夠“包治百病，長(zhǎng)生不老”“核酸營(yíng)養(yǎng)是個(gè)商業(yè)大騙局”。2001年1月，方舟子于新語(yǔ)絲人體不需要補(bǔ)充外源核酸，直接服用核酸產(chǎn)品對(duì)改善健康并沒(méi)有幫助。“所謂核酸食品在營(yíng)養(yǎng)價(jià)值上和米粉沒(méi)有太大的差別。中國(guó)“人類(lèi)基因組計(jì)劃”項(xiàng)目負(fù)責(zé)人楊煥明2001年3月1日，英國(guó)自然雜志（國(guó)際上最權(quán)威的科學(xué)雜志之一）刊登了一篇題為中國(guó)的希望與炒作的社論，評(píng)論中國(guó)科技界的現(xiàn)狀，其中提到了中國(guó)的“核酸營(yíng)養(yǎng)”騙局。文章指出“那些懷疑DNA是有益食品的批評(píng)則被忽視或掩蓋?！贝筮B醫(yī)科大學(xué)崔秀云教授核酸是人體細(xì)胞中的關(guān)鍵物質(zhì)，補(bǔ)充外源核酸，就能延年益壽，乃至“長(zhǎng)壽不老”。人包括老年人，孕婦，嬰兒都不需要補(bǔ)充核酸或是核甘。首先，人體日常所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可分為，而且只分為八大類(lèi)蛋白質(zhì)，糖類(lèi)，脂類(lèi)，無(wú)機(jī)元素，維生素，水，氧和纖維素。纖維素嚴(yán)格地說(shuō)不是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因?yàn)槿梭w不能消化和吸收纖維素。但是食物中缺少纖維素會(huì)導(dǎo)致某些疾病發(fā)病率的增高。有些物質(zhì)是人體日常所需，但是不需要補(bǔ)充，如銅。如果明天有個(gè)珍奧銅公司賣(mài)給你銅錠當(dāng)營(yíng)養(yǎng)品，你吃不吃如果沒(méi)有任何外源核甘酸，人體可以自己合成。以嘌呤為例，嘌呤環(huán)上的四個(gè)氮五個(gè)碳是從四個(gè)氨基酸人體從蛋白質(zhì)中獲得和二氧化碳獲得的。上海生物化學(xué)研究所研究員陸長(zhǎng)德又退了一步說(shuō)“核酸不是必需營(yíng)養(yǎng)，并不一定要補(bǔ)充核酸。但吃核苷、核苷酸比從頭合成容易利用，在一定范圍內(nèi)有益無(wú)害”。這位研究員連最基本的醫(yī)學(xué)或生物常識(shí)都沒(méi)有。就算人體不能自己合成核甘，也不必額外補(bǔ)充外源核酸。每天每個(gè)人都要進(jìn)食。我們的食品無(wú)非就是動(dòng)物和植物。每個(gè)動(dòng)植物細(xì)胞里都有DNA和RNA。粗略的估計(jì)，每天的食物濕重就可提供等重的人體細(xì)胞的“外源核甘酸”。人類(lèi)，無(wú)論是誰(shuí)，不管是窮人或是富人，不管是普通人或是孕婦，只要他她食人間煙火就已經(jīng)有足夠的“外源核酸”，再吃核苷、核苷酸只能會(huì)有害無(wú)益。核苷酸是核酸的基本結(jié)構(gòu)單位，人體內(nèi)的核苷酸主要由機(jī)體細(xì)胞自身合成，因此核苷酸不屬于營(yíng)養(yǎng)必需物質(zhì)。核苷酸及其水解產(chǎn)物均可被細(xì)胞吸收，但它們的絕大部分在腸粘膜細(xì)胞中又被進(jìn)一步分解。分解產(chǎn)生的戊糖被吸收而參加體內(nèi)的戊糖代謝，嘌呤和嘧啶則主要被分解而排出體外。因此，實(shí)際上由食物來(lái)源的嘌呤和嘧啶很少被機(jī)體利用。生物化學(xué)第8版191頁(yè)（周愛(ài)儒主編）機(jī)體可以利用一些小分子化合物合成核酸，所以人體不需要靠外界供給核酸。核酸不屬于營(yíng)養(yǎng)素之列。中等教育統(tǒng)一教材生物化學(xué)第99頁(yè)（馬如駿主編）世界衛(wèi)生組織在2000年底發(fā)布的建立世界范圍的人類(lèi)營(yíng)養(yǎng)需求方案報(bào)告中，列出了人類(lèi)所需的全部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)名稱(chēng)，包括蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物、維生素、微量元素等，其中并沒(méi)有核酸一項(xiàng)。WEWILLDESCRIBE核苷酸有哪些重要生理功能食物中核酸如何消化、吸收體內(nèi)核苷酸如何代謝合成與分解核苷酸代謝障礙對(duì)機(jī)體有什么影響核苷酸代謝類(lèi)似物有何臨床作用核酸基本組成單位核苷酸（NUCLEOTIDE磷酸核苷酸戊糖核糖，脫氧核糖核苷嘌呤腺嘌呤（ADENINEA）堿基鳥(niǎo)嘌呤（GUANINEG）嘧啶胞嘧啶（CYTOSINEC胸腺嘧啶（THYMINET尿嘧啶（URACILU知識(shí)回顧核酸和核苷酸的基本知識(shí)核酸分為兩大類(lèi)DNA和RNAADENINEAGUANINEGBASEPURINEBASEPYRIINECYTOSINECURACILUTHYMINETBASESNUCLEOSIDESNUCLEOTIDESBASENUCLEOSIDENUCLEOTIDEADENINEDEOXYADENOSINEDEOXYADENOSINE5’TRIPHOSPHATEDATPAPOSTROPHE第一節(jié)核苷酸的生物學(xué)功能BIOLOGICALFUNCTIONSOFNUCLEOTIDES核酸的消化與吸收食物核蛋白蛋白質(zhì)核酸RNA及DNA核苷酸胰核酸酶堿基戊糖核苷酶戊糖代謝排出，很少被吸收NUCLEOTIDESAMPGMPUMPCMPMMOLDAMPDGMPDCMPDTMPMOLNUCLEOSIDESADENOSINEGUANOSINECYTIDINEURIDINEDEOXYADENOSINEDEOXYGUANOSINEDEOXYCYTIDINETHYINEBASESADENINEGUANINECYTOSINETHYMINEURACILNOTES核苷酸的生物學(xué)功用作為核酸合成的原料最主要功能體內(nèi)能量的利用形式ATP主要形式；GTP蛋白質(zhì)合成；UTP糖原合成；CTP磷脂合成參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝和生理調(diào)節(jié)CAMPCGMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)第二信使ADP誘導(dǎo)血小板的聚集，導(dǎo)致血栓形成；腺苷調(diào)節(jié)冠狀動(dòng)脈血流量等。組成輔酶NAD，F(xiàn)AD，COA的組成成分活化中間代謝物活化中間代謝物的載體SAM（S腺苷甲硫氨酸，甲基的載體）；UDP葡萄糖（合成糖原、糖蛋白的原料）。參與酶活性的快速調(diào)節(jié)變構(gòu)抑制劑或者變構(gòu)激活劑谷氨酸脫氫酶ADPGDPATPGDP；在酶的磷酸化修飾中提供磷酸基。NO與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶磷酸二酯酶血管收縮核苷酸代謝圖解核苷酸的合成代謝從頭合成途徑DENOVOSYNTHESISPATHWAY是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及CO2等簡(jiǎn)單物質(zhì)為原料，經(jīng)過(guò)一系列酶促反應(yīng)，合成核苷酸的途徑。補(bǔ)救合成途徑SALVAGESYNTHESISPATHWAY利用體內(nèi)游離的堿基或核苷，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的反應(yīng)過(guò)程，合成核苷酸的途徑。核苷酸的從頭合成概況5磷酸核糖PRPPASPCO2GLN氨基甲酰磷酸乳清酸UMPDTMPUTPCTPGTPATPAMPGMPIMPGLNGLYGLN一碳單位一碳單位CO2ASP第一節(jié)嘌呤核苷酸代謝METABOLISMOFPURINENUCLEOTIDES肝、小腸和胸腺的胞液，并不是所有細(xì)胞都具有從頭合成嘌呤的能力。（一）嘌呤核苷酸的從頭合成合成部位一、嘌呤核苷酸的合成代謝嘌呤堿合成的元素來(lái)源CO2天冬氨酸甲酰基（一碳單位）甘氨酸甲?；ㄒ惶紗挝唬┕劝滨０罚０坊└拾庇抑姓竟鹊鴥蛇呑笊咸於鳖^頂二氧碳二八倆葉酸1IMP（次黃嘌呤核苷酸，重要的中間產(chǎn)物）的合成1從頭合成途徑磷酸核糖焦磷酸GPATPRPPK磷酸戊糖途徑從頭合成途徑的特點(diǎn)參與從頭合成途徑的酶均在胞液中多以多酶復(fù)合體的形式存在。以磷酸戊糖途徑中合成的5磷酸核糖（5PR）為原料，經(jīng)11步反應(yīng)生成次黃嘌呤核苷酸（IMP）。在合成IMP過(guò)程中，由氨基酸，CO2，一碳單位逐步提供元素或基團(tuán)，在5磷酸核糖分子上完成嘌呤堿基的合成。從IMP出發(fā)再合成AMP和GMP。包括3個(gè)階段A合成激活階段第1步反應(yīng)。B合成咪唑環(huán)的階段26步反應(yīng)。C合成IMP階段711步反應(yīng)。AMP和GMP的合成PRA2AMP和GMP的生成AMPADPATPADPATP激酶ADPATP激酶GMPGDPGTPADPATP激酶ADPATP激酶嘌呤核苷酸是在磷酸核糖分子上逐步合成嘌呤環(huán)的。而不是分別合成，然后結(jié)合，這與嘧啶的合成過(guò)程不同。先合成IMP，再轉(zhuǎn)變成AMP或GMP。PRPP是5磷酸核糖的活性供體。嘌呤核苷酸從頭合成特點(diǎn)2從頭合成的調(diào)節(jié)需要消耗大量的能量，在機(jī)體精確的調(diào)節(jié)之下進(jìn)行。調(diào)節(jié)方式反饋調(diào)節(jié)和交叉調(diào)節(jié)。正性調(diào)節(jié)指促進(jìn)嘌呤核苷酸合成的調(diào)節(jié)（）；負(fù)性調(diào)節(jié)是指抑制嘌呤核苷酸合成的調(diào)節(jié)（）。正性調(diào)節(jié)兩個(gè)關(guān)鍵酶的促進(jìn)作用。PRPP合成酶和酰胺轉(zhuǎn)移酶，底物ATP、5’磷酸核糖和PRPP促進(jìn)其活性，增加IMP的合成；后端正性調(diào)節(jié)由ATP促進(jìn)GMP合成酶，由GTP促進(jìn)腺苷酸代琥珀酸合成酶增加GTP和ATP的合成。負(fù)性調(diào)節(jié)6個(gè)長(zhǎng)反饋調(diào)節(jié)由AMP，GMP和IMP分別反饋抑制PRPPK和GPAT這兩關(guān)鍵酶的活性；2個(gè)短反饋調(diào)節(jié)由AMP反饋抑制腺苷酸代琥珀酸合成酶，由GMP反饋抑制IMP脫氫酶的活性所進(jìn)行的反饋抑制來(lái)調(diào)節(jié)嘌呤核苷酸的從頭合成。IMPAMPSXMPAMPADPGMPGDPGTPATPATPGTP既滿(mǎn)足需要，又不致于浪費(fèi)。維持ATP與GTP濃度的平衡（交叉調(diào)節(jié)）。調(diào)節(jié)的意義（二）嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶ADENINEPHOSPHIBOSYLTRANSFERASEAPRT次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶HYPOXANTHINEGUANINEPHOSPHIBOSYLTRANSFERASEHGPRT腺苷激酶ADENOSINEKINASE參與補(bǔ)救合成的酶補(bǔ)救合成細(xì)胞利用現(xiàn)成的嘌呤堿或嘌呤核苷重新合成嘌呤核苷酸的過(guò)程。過(guò)程簡(jiǎn)單，消耗能量少。補(bǔ)救合成過(guò)程補(bǔ)救合成的生理意義補(bǔ)救合成節(jié)省從頭合成時(shí)的能量和一些氨基酸的消耗。體內(nèi)某些組織器官，如腦、骨髓等只能進(jìn)行補(bǔ)救合成。因此，對(duì)這些組織器官來(lái)說(shuō)，補(bǔ)救合成途徑具有更重要的意義。如果補(bǔ)救合成發(fā)生障礙，就會(huì)導(dǎo)致疾病，如LESCHNYHAN綜合征。LESCHNYHAN綜合征萊施尼漢綜合征，又稱(chēng)雷尼綜合征、自毀容貌綜合征。LESCH與NYHAN與1964年首次報(bào)道并描述本病的臨床特點(diǎn)，本病的臨床特點(diǎn)是男孩發(fā)病、智力低下，舞蹈狀手足徐動(dòng)、腦性癱瘓，強(qiáng)迫性自殘、攻擊性行為和高尿酸血癥等，多于12歲之前死亡，很少活過(guò)20歲。萊施尼漢綜合征屬于伴性隱性遺傳的先天性代謝病，SEEGMILLER于1965年證實(shí)本綜合征由次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶HGPRT缺陷致嘌呤代謝異常所致?；旧惓Ｊ荋GPRT的缺陷，多源于基因的點(diǎn)突變或者缺失。缺乏該酶使得次黃嘌呤和鳥(niǎo)嘌呤不能轉(zhuǎn)換為IMP和GMP，而是降解為尿酸，過(guò)量尿酸將導(dǎo)致LESCHNYHAN綜合癥。神經(jīng)癥狀的機(jī)制未明確，但患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)多巴胺能神經(jīng)元幾乎完全喪失，推測(cè)D1多巴胺拮抗因子可能與本病的神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)尤其是自殘行為有關(guān)。這種疾病患者常常被束縛在床上或輪椅上?，F(xiàn)有的醫(yī)療技術(shù)對(duì)此無(wú)計(jì)可施而只能寄希望于基因治療。HPRT基因已經(jīng)克隆，用特異性探針可檢出HPRT的突變基因用大量毛發(fā)濾泡檢測(cè)其酶活性以查出雜合子，用羊水細(xì)胞或胎盤(pán)絨毛檢出患病的男性胎兒上述雜合子的檢出和產(chǎn)前診斷，都已可能為本病的有效預(yù)防提供了可靠方法。確診的患病男性胎兒可做選擇性流產(chǎn)。（三）嘌呤核苷酸的相互轉(zhuǎn)變（四）脫氧核糖核苷酸的生成體內(nèi)脫氧核糖核苷酸是通過(guò)相應(yīng)的核糖核苷酸還原生成的。這種還原反應(yīng)是由核糖核苷酸還原酶催化，在二磷酸核苷（NDP）水平上進(jìn)行的。脫氧核糖核苷酸的生成過(guò)程核糖核苷酸還原酶的調(diào)節(jié)使得四種脫氧核苷酸控制在適當(dāng)?shù)谋壤齊EVIEW核苷酸合成的途徑從頭合成和補(bǔ)救合成途徑從頭合成在戊糖的基礎(chǔ)上逐步合成嘌呤環(huán)，包括11步反應(yīng)，先合成IMP；PRPP合成酶和酰胺轉(zhuǎn)移酶為關(guān)鍵酶。PRPP為活化的戊糖供體。從頭合成的調(diào)節(jié)反饋調(diào)節(jié)和交叉調(diào)節(jié)。補(bǔ)救合成利用現(xiàn)成嘌呤堿或者嘌呤核苷酸直接合成嘌呤核苷酸，多見(jiàn)于腦和骨髓。APRT和HGPRT參與補(bǔ)救合成途徑，HGPRT缺陷會(huì)導(dǎo)致自毀容貌綜合征。（五）嘌呤核苷酸的抗代謝物嘌呤核苷酸的抗代謝物是一些嘌呤、氨基酸或葉酸等的類(lèi)似物。主要以競(jìng)爭(zhēng)性抑制干擾或阻斷嘌呤核苷酸的合成代謝，從而進(jìn)一步阻止核酸以及蛋白質(zhì)的生物合成。腫瘤細(xì)胞的核酸和蛋白質(zhì)的合成十分旺盛，因此這些抗代謝物可用于抗腫瘤。但是，這些藥物缺乏對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性，故對(duì)增殖速度較為旺盛的某些正常組織亦有殺傷性，有較大的毒副作用。次黃嘌呤H6巰基嘌呤6MP嘌呤類(lèi)似物主要有6巰基嘌呤6MERCAPTOPURINE6MP等。與次黃嘌呤結(jié)構(gòu)相似，1）變?yōu)?MP核苷酸，抑制IMP變?yōu)锳MP和GMP2）競(jìng)爭(zhēng)抑制HGPRT，抑制補(bǔ)救合成途徑；3）反饋抑制PRPP酰胺轉(zhuǎn)移酶，使PRA生成減少。6MP6MP核苷酸從頭合成途徑補(bǔ)救合成途徑HGPRTPRPP酰胺轉(zhuǎn)移酶IMPAMP和GMP6MP核苷酸是IMP的類(lèi)似物氨基酸類(lèi)似物氮雜絲氨酸AS是GLN的類(lèi)似物葉酸類(lèi)似物C2及C8合成受抑制氨蝶呤AP和甲氨蝶呤MTXMTX二、嘌呤核苷酸的分解代謝嘌呤核苷酸的分解代謝包括3個(gè)基本步驟1核苷酸在核苷酸酶的作用下水解為核苷。2核苷在核苷磷酸化酶作用下分解為嘌呤堿基和1磷酸核糖。1磷酸核糖在磷酸核糖變位酶作用下轉(zhuǎn)變?yōu)?磷酸核糖。5磷酸核糖進(jìn)入磷酸戊糖途徑進(jìn)行代謝。3嘌呤堿基進(jìn)一步代謝。一方面可以參加核苷酸的補(bǔ)救合成。另一方面可進(jìn)入分解代謝，最終形成尿酸，隨尿液排出體外。地點(diǎn)肝、小腸和腎中進(jìn)行。嘌呤堿的最終代謝產(chǎn)物AMPGMPH（次黃嘌呤）GX（黃嘌呤）黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶有關(guān)尿酸人體嘌呤分解代謝的終產(chǎn)物；為三氧基嘌呤，其醇式呈弱酸性。各種嘌呤氧化后生成的尿酸隨尿排出。因溶解度較小，體內(nèi)過(guò)多時(shí)可形成尿路結(jié)石或痛風(fēng)。正常人血漿中尿酸含量為26MG；男性平均為45MG，女性為35MG。除了痛風(fēng)，尿酸高還是許多疾病的危險(xiǎn)指征。權(quán)威調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，高尿酸血癥人群罹患冠心病死亡的幾率是尿酸正常人群的5倍。痛風(fēng)痛風(fēng)病是機(jī)體嘌呤代謝紊亂所致的一種代謝性慢性關(guān)節(jié)疾病。是由于嘌呤代謝產(chǎn)物尿酸在血液和組織中積聚，特別是在關(guān)節(jié)及其周?chē)募∪?、韌帶。13～12病人有家族史，以中老年男性腦力勞動(dòng)者多見(jiàn)。其臨床表現(xiàn)，無(wú)癥狀期僅血尿酸升高而急性關(guān)節(jié)炎期常于夜間發(fā)作，突感大腳趾、四肢關(guān)節(jié)、手指等處劇痛，關(guān)節(jié)有紅、腫、熱、痛炎性表現(xiàn)，持續(xù)數(shù)日可緩解或消退慢性期表現(xiàn)發(fā)作頻繁，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，受累關(guān)節(jié)增多，痛風(fēng)結(jié)石侵蝕骨質(zhì)可致骨骼畸形，病人還可伴慢性腎功能不全、冠心病及腦動(dòng)脈硬化等癥。痛風(fēng)病在任何年齡，都可以發(fā)生。但最常見(jiàn)的是40歲以上的中年男人。根據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，男女發(fā)病比例是20∶1。腦力勞動(dòng)者，體胖者發(fā)病率較高。痛風(fēng)偏愛(ài)男性的原因是女性體內(nèi)雌激素能促進(jìn)尿酸排泄，并有抑制關(guān)節(jié)炎發(fā)作的作用。男性喜飲酒，喜食富含嘌呤、蛋白質(zhì)的食物，使體內(nèi)尿酸增加，排出減少。常吃火鍋者發(fā)病也多?；疱佋现饕莿?dòng)物內(nèi)臟、蝦、貝類(lèi)、海鮮，再飲啤酒，自然是火上添油了。調(diào)查證明涮一次火鍋比一頓正餐攝入嘌呤高10倍。飲酒容易引發(fā)痛風(fēng)，因?yàn)榫凭诟谓M織代謝時(shí)，大量吹收水份，使血濃度加強(qiáng)，使到原來(lái)已經(jīng)接近飽和的尿酸，加速進(jìn)入軟組織形成結(jié)晶，導(dǎo)致身體免疫系統(tǒng)過(guò)度反應(yīng)（敏感）而造成炎癥，古稱(chēng)“王者之疾”。一瓶啤酒可使尿酸升高一倍。高血壓病人患痛風(fēng)可能性會(huì)增加10倍。痛風(fēng)與糖尿病一樣是終生疾病。關(guān)鍵是自己控制飲食，多食含“嘌呤”低的堿性食物，如瓜果、蔬菜，少食肉、魚(yú)等酸性食物，做到飲食清淡，低脂低糖，多飲水，以利體內(nèi)尿酸排泄。男性為什么易患痛風(fēng)藥物減少尿酸合成（別嘌呤醇）；增加尿酸排出（丙璜舒，抑制腎小管對(duì)尿酸的再吸收）。尿酸高（痛風(fēng)）飲食控制痛風(fēng)的防治限制高嘌呤食物，如肝臟、腎、胰、腦等動(dòng)物臟器以及濃肉湯、雞湯、肉浸膏、沙丁魚(yú)、魚(yú)子等。限制蛋白質(zhì)，以植物蛋白為主，而牛奶、雞蛋因無(wú)細(xì)胞核，嘌呤含量低，可隨意選用。大量提供B族維生素及維生素C等，使組織中沉積的尿酸鹽溶解。多吃一些堿性食品，如蔬菜、水果、礦泉水等，因?yàn)閴A性環(huán)境中尿酸鹽易溶解，在酸性條件下易結(jié)晶。盡量多飲水，每日攝入量可在3000毫升以上，以促進(jìn)尿酸鹽排出。嚴(yán)禁酗酒。別嘌呤醇痛風(fēng)癥的治療機(jī)制鳥(niǎo)嘌呤次黃嘌呤黃嘌呤尿酸黃嘌呤氧化酶黃嘌呤氧化酶別嘌呤醇別嘌呤醇次黃嘌呤第二節(jié)嘧啶核苷酸的代謝METABOLISMOFPYRIINENUCLEOTIDES（一）嘧啶核苷酸的從頭合成主要是肝細(xì)胞胞液合成部位一、嘧啶核苷酸的合成代謝先合成嘧啶環(huán)，再與磷酸核糖相連。先合成UMP，再轉(zhuǎn)變成DTMP和CTP。特點(diǎn)定義嘧啶核苷酸的從頭合成是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及CO2等簡(jiǎn)單物質(zhì)為原料，經(jīng)過(guò)一系列酶促反應(yīng)，合成嘧啶核苷酸的途徑。嘧啶合成的元素來(lái)源氨基甲酰磷酸用同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)證明CO2、谷氨酰胺和天冬氨酸是嘧啶堿基的元素來(lái)源（1）尿嘧啶核苷酸的合成1從頭合成途徑氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ和Ⅱ的區(qū)別（N乙酰谷氨酸）嘧啶核苷酸從頭合成的特點(diǎn)合成所需要的酶系大多在胞液內(nèi)。真核細(xì)胞中，嘧啶核苷酸合成的前三個(gè)酶（氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ、天冬氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶和二氫乳清酸酶）位于同一肽鏈上，是多酶復(fù)合體，有利于以均勻的速度參與嘧啶核苷酸的合成。合成從CO2和谷氨酰胺開(kāi)始，經(jīng)6步反應(yīng)先合成出尿嘧啶核苷酸（UMP）。由UMP出發(fā)再合成其它的嘧啶核苷酸。UMP的從頭合成分三個(gè)階段第一個(gè)階段是氨基甲酰磷酸的合成。第二個(gè)階段是氨基甲酰天冬氨酸的合成。第三個(gè)階段是嘧啶環(huán)的合成。（2）CTP的合成是在三磷酸水平上進(jìn)行的。ATP尿苷酸激酶UDPUMP二磷酸尿苷激酶ADPUTPGLNATPGLUADPPIATPADPCTPCTP合成酶（3）DTMP或TMP的生成是在一磷酸水平上進(jìn)行的。DCMPDUDPPINH3DUMPDTMPATP激酶DTDP激酶ADPDTTPATPADPDTMP2從頭合成的調(diào)節(jié)1）正性調(diào)節(jié)ATP磷酸核糖焦磷酸合成酶PRPP乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶嘌呤和嘧啶核苷酸從頭合成途徑有共同的正性調(diào)節(jié)。保證嘌呤和嘧啶核苷酸合成速度的同步化，以便合成出等量的嘌呤和嘧啶核苷酸。2）嘧啶核苷酸負(fù)性調(diào)節(jié)合成產(chǎn)物的反饋抑制進(jìn)行調(diào)節(jié)。主要集中在對(duì)4個(gè)關(guān)鍵酶的反饋抑制上A氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ（CPSⅡ）由UMP反饋抑制。B天冬氨酸轉(zhuǎn)氨基甲酰酶由UMP和CTP反饋抑制。C磷酸核糖焦磷酸合成酶由ADP和GDP反饋抑制。DCTP合成酶CTPS，由CTP反饋抑制。CTP對(duì)天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的反饋調(diào)節(jié)為變構(gòu)調(diào)節(jié)CTP濃度升高時(shí)，CTP與調(diào)節(jié)亞基結(jié)合使調(diào)節(jié)亞基和催化亞基變構(gòu)，酶由活性態(tài)轉(zhuǎn)為無(wú)活性態(tài)，實(shí)現(xiàn)反饋抑制調(diào)節(jié)。（二）嘧啶核苷酸的補(bǔ)救合成嘧啶PRPP嘧啶核苷酸PPI嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶尿嘧啶胸腺嘧啶乳清酸胞嘧啶尿嘧啶核苷ATPUMPADP尿苷激酶胸苷激酶TK與惡性腫瘤（三）嘧啶核苷酸的抗代謝物嘧啶類(lèi)似物胸腺嘧啶5氟尿嘧啶5氟尿嘧啶5FU是胸腺嘧啶的類(lèi)似物。5FU5FDUMP5FUTPDUMPDTMP合成RNA破壞RNA的結(jié)構(gòu)胸甘酸合酶5FUMP氨基酸類(lèi)似物（GLN）如氮雜絲氨酸抑制CTP的合成。如甲氨喋呤抑制DTMP的合成。葉酸類(lèi)似物（FOLICACID）核苷類(lèi)似物阿糖胞苷胞嘧啶核苷抑制CDP變?yōu)镈CDP氮雜絲氨酸阿糖胞苷氨甲碟呤氮雜絲氨酸二、嘧啶核苷酸的分解代謝嘧啶堿1磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷核苷酸酶PPI核苷磷酸化酶尿素TAC乙酰輔酶A琥珀酰輔酶A嘌啶核苷酸與嘧啶核苷酸合成的比較相同點(diǎn)1合成原料基本相同嘌啶核苷酸嘧啶核苷酸2合成部位對(duì)高等動(dòng)物來(lái)說(shuō)主要在肝臟3都有2種合成途徑從頭和補(bǔ)救途徑4都是先合成一個(gè)與之有關(guān)的核苷酸然后在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步合成核苷酸不同點(diǎn)1在5PR基礎(chǔ)上合成嘌呤環(huán)2最先合成的核苷酸是IMP3在IMP基礎(chǔ)上完成AMP和GMP的合成1先合成嘧啶環(huán)再與5PR結(jié)合2先合成UMP3以UMP為基礎(chǔ)完成CTPDTMP的合成總結(jié)5PRPRPPIMPDAMPGMPDGMPAMPDADPGDPDGDPADPDATPGTPDGTPATPUMPCMPDUMPUDPCDPDUDPUTPCTPDUTPDTMPDCMPDTDPDCDPDTTPDCTPCO2GLNH2NCOPOMP核苷酸的從頭合成過(guò)程總結(jié)DCMP核苷酸代謝障礙引起的疾病臨床疾病缺陷的酶原因臨床特點(diǎn)遺傳類(lèi)型1嘌呤核苷酸代謝障礙痛風(fēng)①PRPP合成酶調(diào)節(jié)失常嘌呤產(chǎn)生和X染色體連②HGPRT酶排泄過(guò)多鎖，隱性遺傳LESCHNYHAN綜合征HGPRT酶遺傳缺陷嘌呤產(chǎn)生排泄X染色體連多腦性癱瘓鎖，隱性遺傳自毀容貌癥免疫缺陷癥①腺苷脫氨酶遺傳缺陷B細(xì)胞免疫缺陷常染色體隱性遺傳ADA缺乏脫氧腺苷尿癥②嘌呤核苷磷酸化酶PNP腎結(jié)石APRT酶遺傳缺陷2，8二羥基腺常染色體隱性遺傳嘌呤腎結(jié)石黃嘌呤尿黃嘌呤氧化酶遺傳缺陷黃嘌呤腎結(jié)石，常染色體隱性遺傳低尿酸血癥2嘧啶核苷酸代謝障礙先天性乳清乳清酸磷酸遺傳缺陷乳清酸排泄多常染色體隱性遺傳酸尿癥核糖轉(zhuǎn)移酶紅細(xì)胞性貧血乳清酸核苷酸遺傳缺陷乳清酸排泄較多常染色體隱性遺傳脫羧酶總結(jié)物質(zhì)代謝的聯(lián)系與調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝的相互聯(lián)系代謝調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝的相互聯(lián)系METABOLICINTERRELATIONSHIPS一、在能量代謝上的相互聯(lián)系三大營(yíng)養(yǎng)素共同中間產(chǎn)物共同最終代謝通路糖脂肪蛋白質(zhì)乙酰COATAC2H氧化磷酸化ATPCO2三大營(yíng)養(yǎng)素可在體內(nèi)氧化供能。從能量供應(yīng)的角度看，三大營(yíng)養(yǎng)素可以互相代替，并互相制約。一般情況下，供能以糖、脂為主，并盡量節(jié)約蛋白質(zhì)的消耗。任一供能物質(zhì)的代謝占優(yōu)勢(shì)，常能抑制和節(jié)約其他物質(zhì)的降解。例如饑餓時(shí)肝糖原分解，肌糖原分解肝糖異生，蛋白質(zhì)分解以脂酸、酮體分解供能為主蛋白質(zhì)分解明顯降低12天34周（一）糖代謝與脂代謝的相互聯(lián)系1攝入的糖量超過(guò)能量消耗時(shí)二、糖、脂和蛋白質(zhì)之間的相互聯(lián)系葡萄糖乙酰COA合成脂肪（脂肪組織）合成糖原儲(chǔ)存（肝、肌肉）2脂肪的甘油部分能在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)樘侵嵋阴OA葡萄糖脂肪甘油甘油激酶肝、腎、腸磷酸甘油葡萄糖3脂肪的分解代謝受糖代謝的影響?zhàn)囸I、糖供應(yīng)不足或糖代謝障礙時(shí)（二）糖與氨基酸代謝的相互聯(lián)系例如丙氨酸丙酮酸脫氨基糖異生葡萄糖1大部分氨基酸脫氨基后，生成相應(yīng)的Α酮酸，可轉(zhuǎn)變?yōu)樘恰?糖代謝的中間產(chǎn)物可氨基化生成某些非必需氨基酸糖丙酮酸草酰乙酸乙酰COA檸檬酸Α酮戊二酸1蛋白質(zhì)可以轉(zhuǎn)變?yōu)橹?氨基酸可作為合成磷脂的原料（三）脂類(lèi)與氨基酸代謝的相互聯(lián)系但不能說(shuō)，脂類(lèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)榘被帷?脂肪的甘油部分可轉(zhuǎn)變?yōu)榉潜匦璋被幔ㄋ模┖怂崤c糖、蛋白質(zhì)代謝的相互聯(lián)系1氨基酸是體內(nèi)合成核酸的重要原料2磷酸核糖由磷酸戊糖途徑提供葡萄糖、糖原丙酮酸乙酰COA脂肪草酰乙酸Α酮戊二酸琥珀酸延胡索酸代謝調(diào)節(jié)THEREGULATIONOFMETABOLISM代謝調(diào)節(jié)普遍存在于生物界，是生物的重要特征。主要通過(guò)細(xì)胞內(nèi)代謝物濃度的變化，對(duì)酶的活性及含量進(jìn)行調(diào)節(jié)，這種調(diào)節(jié)稱(chēng)為原始調(diào)節(jié)或細(xì)胞水平代謝調(diào)節(jié)。單細(xì)胞生物高等生物三級(jí)水平代謝調(diào)節(jié)細(xì)胞水平代謝調(diào)節(jié)一、細(xì)胞水平的代謝調(diào)節(jié)細(xì)胞水平的代謝調(diào)節(jié)主要是酶水平的調(diào)節(jié)。細(xì)胞內(nèi)酶呈隔離分布。代謝途徑的速度、方向由其中的關(guān)鍵酶KEYENZYME的活性決定。代謝調(diào)節(jié)主要是通過(guò)對(duì)關(guān)鍵酶活性的調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)的。（一）細(xì)胞內(nèi)酶的隔離分布代謝途徑有關(guān)酶類(lèi)常常組成多酶體系，分布于細(xì)胞的某一區(qū)域。多酶體系在細(xì)胞內(nèi)的分布酶的隔離分布的意義避免了各種代謝途徑互相干擾。①速度最慢，它的速度決定整個(gè)代謝途徑的總速度，故又稱(chēng)其為限速酶LIMITINGVELOCITYENZYMES。②催化單向反應(yīng)不可逆或非平衡反應(yīng)，它的活性決定整個(gè)代謝途徑的方向。③這類(lèi)酶活性除受

簡(jiǎn)介：201977血培養(yǎng)VS分子生物學(xué)血流感染快速分子診斷分子診斷不受抗菌藥物使用的影響血培養(yǎng)陽(yáng)性后分子診斷直接使用血標(biāo)本進(jìn)行分子診斷快速但不能提供藥敏結(jié)果血培養(yǎng)陽(yáng)性瓶分子鑒定ANTIGONEKOTSAKIETALEXPERTOPINMEDDIAGN201263209陽(yáng)性血培養(yǎng)－基于PCR的檢測(cè)PCR特異性檢測(cè)病原特異性PCR特定耐藥基因檢測(cè)葡萄球菌MECA腸球菌VAN細(xì)菌載量肺炎鏈球菌自溶毒A基因LYTA拷貝數(shù)廣譜檢測(cè)PCR擴(kuò)增特定靶位多態(tài)性分析測(cè)序后續(xù)基因檢測(cè)種特異性REALTIMEPCREXPERTOPINMEDDIAGN201263209CURROPININFECTDIS2011242137QPCR鑒定血培養(yǎng)陽(yáng)性瓶中銅綠假單胞菌5TARGETECFXGENE血培養(yǎng)系統(tǒng)BACTALERT，87瓶FA、13瓶FN，涂片均顯示GB對(duì)照方法氧化酶，API20EDNA提取05ML肉湯，離心后加裂解液，水煮法定量PCR擴(kuò)增OLIGONUCLEOTIDEPRIMERS基因特異性檢測(cè)FLUESCENTLABELEDHYBRIDIZATIONPROBES，152BPFRAGMENTANNALCLINMICROBIOLANTIMICROB2010921QPCR鑒定血培養(yǎng)陽(yáng)性瓶中銅綠假單胞菌633瓶PAE，敏感性和特異性均為1001瓶KPNPAE，由于PAE20CFUML≤KPN108CFUML，PCR檢測(cè)限將ATCC27853ECFX基因克隆至TOP10ECOLIANNALCLINMICROBIOLANTIMICROB2010921陽(yáng)性血培養(yǎng)－基于PCR的檢測(cè)最常見(jiàn)病原體多重PCR電泳譜、ELISA雜交、多重REALTIMEPCRHYPLEXBLOODSCREENBAGLICHGERMANY多重PCRELISA456H完成PROVEITSEPSISMOBIDIAGHELSINKIFINL多重REALTIMEPCR微陣列分析，檢測(cè)多種病原及MECA，3H完成多重REALTIMEPCREXPERTOPINMEDDIAGN201263209血培養(yǎng)陽(yáng)性－多重REALTIMEPCRNEWMICROBIOLOGICA3665742013血培養(yǎng)陽(yáng)性－多重REALTIMEPCRNEWMICROBIOLOGICA3665742013血培養(yǎng)陽(yáng)性－PNAFISH核酸熒光原位雜交10血培養(yǎng)陽(yáng)性肉湯革蘭染色PNAFISH革蘭陰性菌商品化試劑盒ECOKPNPAEEFA其它腸球SAUSCNCALCGL其它念珠菌報(bào)道SALMONELLASPP90MINPNAFISH完成APPLENVIRONMICROBIOL2010764476JCLINMICROBIOL20135141301JCLINMICROBIOL200947247MALDITOFMS基質(zhì)輔助激光解析電離（MALDI）原理將樣品分散在基質(zhì)分子中形成結(jié)晶后直接進(jìn)樣，當(dāng)用激光照射結(jié)晶時(shí)，基質(zhì)吸收了激光的大部分能量，使基質(zhì)分子和樣品獲得能量投射到氣相并得到電離，成為帶電荷的離子?；|(zhì)在樣品離子形成過(guò)程中起到了質(zhì)子化或去質(zhì)子化的作用，使樣品帶上正電荷或負(fù)電荷，成為帶電荷的離子基質(zhì)會(huì)干擾被檢測(cè)分子質(zhì)譜峰的大小和濃度；不同類(lèi)型的分析物選擇不同的基質(zhì)MALDITOFMS飛行時(shí)間（TOF）原理離子源產(chǎn)生的離子在加速電場(chǎng)獲得動(dòng)能，當(dāng)進(jìn)入高真空無(wú)電場(chǎng)飛行管道并在此管道內(nèi)飛行時(shí)，質(zhì)量較輕的離子飛行速度快，早到達(dá)檢測(cè)器；質(zhì)量較重的離子飛行速度慢，晚到達(dá)檢測(cè)器。因此依據(jù)離子的飛行時(shí)間與其質(zhì)荷比平方根（MZ）成正比的關(guān)系，通過(guò)測(cè)定飛行時(shí)間，計(jì)算出相應(yīng)離子的分子量。MALDITOFMS操作步驟MALDITOFMS快速鑒定陽(yáng)性血培養(yǎng)14使用菌落、陽(yáng)性血培養(yǎng)肉湯鑒定快速20分鐘從報(bào)警到鑒定出結(jié)果）MALDITOFMSBRUKERBACTECBD正確鑒定193213陰性菌（包括厭氧菌）9061，284319陽(yáng)性菌8902809復(fù)數(shù)菌正確鑒定出一種，7株緩癥鏈球菌鑒定為SPNMALDITOFMSBRUKERBACTALERTBIOMRIEUX388個(gè)陽(yáng)性瓶，種正確率91（包括念珠、厭氧菌）15瓶復(fù)數(shù)菌使用通用庫(kù)多鑒定出一種，革蘭染色后使用陰性或陽(yáng)性庫(kù)分析，6瓶鑒定出第二種菌CLINMICROBIOLINFECT2010161631JCLINMICROBIOL2010481542MALDITOFMS15VITEKMSBIOMRIEUX以16S為金標(biāo)準(zhǔn)，980株臨床分離株，ID正確率腸桿菌科977非發(fā)酵菌92葡萄球菌屬943鏈球菌屬848HACEK84酵母菌852JCLINMICROBIOL201048900PCRESIMS廣譜PCR－ESIMS（電噴射質(zhì)譜）189陽(yáng)性血培養(yǎng)和45陰性血培養(yǎng)，一致率9876例SPN標(biāo)本方法陰性提供定量結(jié)果－－評(píng)估病原體載量假陰性率24幾乎均由混合感染導(dǎo)致56H完成檢測(cè)結(jié)合PCR的敏感性和ESIMS特異性可以直接檢測(cè)標(biāo)本，不需要培養(yǎng)PROCNATLACADSCI20051028012血標(biāo)本分子檢測(cè)種特異性、屬特異性、廣譜、多重PCR、微陣列分析血培養(yǎng)陰性的苛養(yǎng)菌，如BARTONELLASPP巴爾通體COXIELLABURII伯氏考克斯體MYCOPLASMASPP支原體CHLAMYDIASPP衣原體RICKETSSIASPP立克次體，TROPHERYMAWHIPPLEI商品化分子生物學(xué)檢測(cè)方法血標(biāo)本18SEPTIFASTROCHEMULTIPLEXREALTIMEPCR，種屬特異性熒光探針，檢測(cè)重要血流感染致病菌SEPSITESTTMMOLZYMEUBACTERIALPANFUNGALREALTIMEPCR，A16S18SRRNAGENEBASEDUNIVERSALPCRSEQUENCING，幾乎可以鑒定所有細(xì)菌、真菌VYOOSIRSLABMULTIPLEXPCR，檢測(cè)重要血流感染菌，電泳分離擴(kuò)增片段PLEXIDABBOTTEUBACTERIALPANFUNGALPCR質(zhì)譜，幾乎可以鑒定所有細(xì)菌、真菌INTENSIVECAREMED2011MAYPUBLISHONLINESEPTIFASTTEST檢測(cè)的病原譜BMJOPEN20122E000392INTENSIVECAREMED20103649–56SEPTIFASTTEST評(píng)估INTENSIVECAREMED20103649–56SEPTIFAST與PCT、CRP相關(guān)性L(fǎng)ANGENBECKSARCHSURG2012397447–455VYOO檢測(cè)能力評(píng)估PLOSONE20127E38916SEPSIS非感染SIRS血培養(yǎng)陽(yáng)性血培養(yǎng)陰性，其它標(biāo)本培養(yǎng)陽(yáng)性SEPSIS所有培養(yǎng)陰性VYOO與微生物學(xué)一致性為462仍需改進(jìn)PLOSONE20127E389163種商品化PCR檢測(cè)系統(tǒng)比對(duì)MEDKLININTENSIVMEDNOTFMED20133種商品化PCR檢測(cè)系統(tǒng)比對(duì)MEDKLININTENSIVMEDNOTFMED2013分子生物檢測(cè)血標(biāo)本26幾乎所有與血培養(yǎng)對(duì)照的研究，都顯示更高的敏感性，但并非所有血培養(yǎng)陽(yáng)性菌一定能檢測(cè)出來(lái)不可替代血培養(yǎng)相較于血培養(yǎng)，其高敏感性可以更早地開(kāi)始抗菌治療，或改變治療方案污染導(dǎo)致的假陽(yáng)性無(wú)法排除評(píng)估血培養(yǎng)陰性的PCR陽(yáng)性結(jié)果分析其它微生物檢查結(jié)果（如BALF，傷口拭子等）免疫反應(yīng)指標(biāo)INTENSIVECAREMED2011MAYPUBLISHONLINE小結(jié)BSI發(fā)病率逐年升高，尤其是革蘭陽(yáng)性菌和真菌BSI病原菌耐藥率持續(xù)升高優(yōu)化血培養(yǎng)流程，提高陽(yáng)性率，降低污染率結(jié)合臨床分析血培養(yǎng)結(jié)果分子生物學(xué)技術(shù)快速診斷BSI，MALDITOFMS、商品化多重PCR檢測(cè)平臺(tái)、PNAFISH成為未來(lái)發(fā)展方向血培養(yǎng)不可被分子方法取代

簡(jiǎn)介：第二章電離輻射的分子生物學(xué)效應(yīng)第一節(jié)DNA的電離輻射效應(yīng)輻射所致DNA損傷的類(lèi)型DNA鏈斷裂、DNA堿基損傷、DNA交聯(lián)一、DNA鏈斷裂單鏈斷裂（SINGLESTRBREAK，SSB雙鏈斷裂（DOUBLESTRBREAK，DSB一、DNA損傷的種類(lèi)DNA鏈斷裂單鏈斷裂（SSB）雙鏈斷裂（DSB）DNA交聯(lián)DNA鏈交聯(lián)DNA蛋白質(zhì)交聯(lián)DNA二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化其中DSB是輻射所致生物學(xué)效應(yīng)中最重要的原初損傷，而非重接性的DSB則被認(rèn)為是細(xì)胞殺傷效應(yīng)的最重要的損傷。DNA鏈斷裂（DNASTRBREAK單鏈斷裂（SINGLESTRBREAK，SSBDNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中一條鏈斷裂雙鏈斷裂（DOUBLESTRBREAK，DSBDNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中兩條互補(bǔ)鏈于同一對(duì)應(yīng)處或相鄰處同時(shí)斷裂單鏈斷裂雙鏈斷裂1DNA鏈斷裂的分子機(jī)制（1）脫氧戊糖和磷酸二酯鍵的破壞（直接）三種自由基EAQ，OH，HDNA鏈斷裂主要與OH作用有關(guān)，從脫氧戊糖抽氫，形成了5中不同的反應(yīng)產(chǎn)物。OH從脫氧戊糖中抽氫，主要作用于C3’，5’），C（3’上磷酸二酯鍵斷裂多余C（5’）端。OH攻擊糖基C1’、2’、4’形成堿不穩(wěn)定性位點(diǎn)（ALKALILABILESITESALS），這些位點(diǎn)在堿處理后發(fā)生鏈斷裂。堿不穩(wěn)定性位點(diǎn)（ALS）OH對(duì)C（1’），C（2’），C（3’），C（4’）攻擊后的產(chǎn)物，在與六氫吡啶供熱后都能導(dǎo)致DNA鏈的斷裂。所以，在DNA鏈上含有損失后經(jīng)堿處理后導(dǎo)致DNA鏈斷裂的位點(diǎn)，這些位點(diǎn)稱(chēng)為堿不穩(wěn)定性位點(diǎn)（ALS）（2）堿基損傷BASEDAMAGE1、充氧溶液中堿基損傷嘧啶堿羥自由基攻擊5、6位腺嘌呤羥自由基攻擊8位鳥(niǎo)嘌呤羥自由基攻擊4、5、8位2、細(xì)胞中堿基損傷進(jìn)展不大，用電子自旋共振儀酶敏感位點(diǎn)ENZYMESENSITIVESITES，ESS）堿基損傷可引起DNA雙螺旋的局部變性，特異的核酸內(nèi)切酶能識(shí)別和切除這種損傷，并通過(guò)酶的作用，產(chǎn)生鏈斷裂。這種特異性酶敏感位點(diǎn)稱(chēng)為ESS。無(wú)嘌呤或無(wú)嘧啶位點(diǎn)（APURINICAPYRIINICSITES，APS）DNA鏈上損傷的堿基可被特異的DNA－糖基化酶除去或由于N－糖基鍵的化學(xué)水解而丟失，形成APS。形成APS在內(nèi)切酶的作用下形成鏈斷裂。2DNA鏈斷裂的主要特點(diǎn)1單鏈斷裂與雙鏈斷裂的比值DSB約為SSB的110120SSB由一個(gè)自由基攻擊引起。DSB必須由兩個(gè)以上自由基引起。一定能量的射線(xiàn)所產(chǎn)生的SSB和DSB有一個(gè)大致的比值，但比值不是恒定的。2）LET對(duì)鏈斷裂的影響各種射線(xiàn)對(duì)鏈斷裂效應(yīng)的順序中子＞Γ射線(xiàn)、Χ＞紫外線(xiàn)SSB與DSB的比值與LET的高低有關(guān)。隨著LET的升高，SSB減少，DSB增多。3）氧效應(yīng)對(duì)鏈斷裂的影響氧效應(yīng)可增加鏈斷裂的程度主要原因是氧效應(yīng)可增加羥自由基的產(chǎn)生。4）DNA鏈發(fā)生的部位劑量不同，DNA堿基發(fā)生斷裂的概率亦不同。當(dāng)劑量＜10GY照射時(shí)，堿基斷裂順序G＞A＞T≥C。當(dāng)劑量＞4080GY照射時(shí)，堿基斷裂順序T＞G＞A≥C。5）DNA鏈斷裂與細(xì)胞輻射敏感性DNA的斷裂程度與輻射敏感性有關(guān)。不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)輻射的敏感性有很大差異，平均致死劑量（D0）亦不同。DNA自然斷裂的發(fā)生通常情況下DNA斷裂的本底水平可達(dá)總DNA的百分之幾。一般方法難以測(cè)量，常引入凝膠模塊的方法來(lái)解決。DNA交聯(lián)（DNACROSSLINKING交聯(lián)種類(lèi)1、鏈間交聯(lián)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，一條鏈上的堿基與其互補(bǔ)鏈上的堿基以共價(jià)鍵結(jié)合。2、鏈內(nèi)交聯(lián)DNA分子同一條鏈上的兩個(gè)堿基相互以共價(jià)鍵結(jié)合3、DNA－蛋白質(zhì)交聯(lián)（DNAPROTEINCROSSLINKING，DPC）DNA與蛋白質(zhì)以共價(jià)鍵結(jié)合1DNAPROTEINCROSSLINKING（DPC1DPC存在的證據(jù)小牛胸腺脫氧核糖核蛋白DNP在UV或Γ射線(xiàn)照射后，其中DNA的不能被提取的部分隨著照射劑量的增加而增多，但如果用胰蛋白酶處理，則觀(guān)察到這部分DNA。這是因?yàn)閁V和Γ射線(xiàn)照射導(dǎo)致了DNA與核蛋白的交聯(lián)，影響了DNP中DNA的提出，胰蛋白酶能夠裂解DNA與蛋白質(zhì)之間的共價(jià)鍵，消化DNP中的蛋白質(zhì)部分所以全部DNA都能被提取出來(lái)。2、DPC形成的分子機(jī)制羥自由基有關(guān)（OHDNA與蛋白質(zhì)之間形成共價(jià)鍵的分子機(jī)制1）輻射后蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸形成了自由基。2）蛋白質(zhì)中的芳香族氨基酸形成酚型或酚氧型自由基，這類(lèi)自由基在DPC中起著主要作用。3、影響DPC形成的因素氧效應(yīng)如紫外線(xiàn)＋O2→DPC↑Γ射線(xiàn)＋O2→DPC↓溫度孵育（45℃）＋照射→DPC↑特別是腫瘤細(xì)胞，已用于臨床染色質(zhì)的狀態(tài)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)愈緊，愈容易交聯(lián)。細(xì)胞的不同周期，DPC不同。S期交聯(lián)最多，G1G2期很少4、體內(nèi)DPC形成時(shí)DNA和蛋白質(zhì)的選擇性DNA的選擇性具有轉(zhuǎn)錄活性的DNA。此處易發(fā)生SSB單修復(fù)也快。蛋白質(zhì)的選擇性組蛋白、非組蛋白、調(diào)節(jié)蛋白、拓?fù)洚悩?gòu)酶以及與復(fù)制轉(zhuǎn)錄有關(guān)的核基質(zhì)蛋白。組蛋白中H3H4H2AH2B2DNADNA鏈間交聯(lián)在放射生物學(xué)中研究DNADNA鏈間的交聯(lián)的報(bào)道較少。在干燥及含25水的DNA中鏈間斷裂占優(yōu)勢(shì)；隨著水分子的增加DNA鏈斷裂生成率上升，而鏈間斷裂下降。DAN鏈間交聯(lián)多見(jiàn)于化學(xué)損傷，如氮芥、硫芥等；放射損傷時(shí)較少見(jiàn)到。放射損傷時(shí)，DNA鏈間交聯(lián)與鏈斷裂相互競(jìng)爭(zhēng)。3DNA鏈內(nèi)交聯(lián)多見(jiàn)于紫外線(xiàn)照射，電離輻射較少二聚體形成是紫外線(xiàn)照射后胸腺嘧啶自由基加合而成；是紫外線(xiàn)照射引起DNA的特征性改變。在DNA接近其最大吸收波長(zhǎng)260NM相鄰的嘧啶堿基共價(jià)交聯(lián)形成環(huán)丁烷四元環(huán)－嘧啶二聚體此反應(yīng)是可逆的。分布是非隨機(jī)性的，相鄰的兩個(gè)T、或兩個(gè)C、或C與T間都連成二聚體，其中最容易形成的是TT二聚體DNA二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化DNA變性DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)，氫鍵斷裂，克原子磷消光系數(shù)顯著升高，出現(xiàn)了增色效應(yīng)，比旋光性和粘度降低，浮力密度升高，酸堿滴定曲線(xiàn)改變，同時(shí)失去生物活性。1增色效應(yīng)和TM值TM將DNA克原子磷消光系數(shù)Ε（P）值達(dá)到最高值12時(shí)的溫度稱(chēng)之為熔解溫度（TM增色效應(yīng)隨DNA變性程度的增加，其克原子磷消光系數(shù)值增大，這種現(xiàn)象稱(chēng)增色效應(yīng)。R射線(xiàn)照射后的特點(diǎn)1、TM值↓2、增色效應(yīng)有限，與鏈間交聯(lián)有關(guān)2旋光色散（OPTICALROTATYDISPERSIOND和圓二色性DNA的D光譜在228和229NM波段有高峰，在257NM有低谷。照射后，228和257NM發(fā)生與劑量呈線(xiàn)性的變化粘度隨劑量的增加，粘度降低。3粘度DNA溶液粘度的改變可反映出DNA結(jié)構(gòu)的改變。二、DNA損傷的修復(fù)亞致死損傷修復(fù)（SUBLETHALDAMAGEREPAIRSLDR）將預(yù)定的照射劑量分次給予，生物效應(yīng)明顯減輕，表明在兩次照射間隔中細(xì)胞有所修復(fù)，這種修復(fù)稱(chēng)作SLDR。潛在致死性損傷修復(fù)（POTENTIALLYLETHALDAMAGEREPAIRPLDR照射后改變細(xì)胞所處的狀態(tài)和環(huán)境，如延長(zhǎng)接種或給予不良的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件，均能提高存活率。不同類(lèi)型DNA損傷的修復(fù)1、DNA單鏈斷裂的修復(fù)絕大多數(shù)正常細(xì)胞都能修復(fù)單鏈斷裂DNA修復(fù)與時(shí)間呈指數(shù)關(guān)系，修復(fù)速率依賴(lài)于溫度與SLDR有關(guān)2、DNA雙鏈斷裂的修復(fù)斷裂后即刻，細(xì)胞內(nèi)酶修復(fù)系統(tǒng)啟動(dòng)。修復(fù)速率的快慢與水平的高低直接決定損傷的殘留以及細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸。（部分修復(fù)早期修復(fù)快，隨后修復(fù)的慢）與PLDR有關(guān)3、堿基損傷的修復(fù)種類(lèi)多，分析較困難以嘧啶二聚體為模型，能修復(fù)但只能部分修復(fù)。4、DNA修復(fù)合成DNA期外合成或程序外DNA合成（UNSCHEDULEDDNASYNTHESISUDS）DNA合成適于損傷后即刻，隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，但與細(xì)胞周期沒(méi)有關(guān)系，是一種修復(fù)合成。DNA的損傷修復(fù)機(jī)制1、回復(fù)修復(fù)細(xì)胞對(duì)DNA的某些損傷可以用很簡(jiǎn)單的方式加以修復(fù)在單一基因產(chǎn)物的催化下，一步反應(yīng)就可以完成。這種修復(fù)方式叫回復(fù)。1）酶學(xué)光復(fù)活光復(fù)活酶或DNA光解酶它的作用分成三個(gè)步驟①酶與DNA中的二聚體部位相結(jié)合；②吸收波長(zhǎng)為260～380NM的近紫外光，酶被激活，使二聚體解聚；③酶從DNA鏈上釋放，DNA恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)。2）DNA單鏈斷裂重接DNA單鏈斷裂中有一部分是通過(guò)簡(jiǎn)單的重接而修復(fù)的，只需要一種酶DNA連接酶LIGASE參加，因此也屬于直接回復(fù)。DNA連接酶能催化DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中一條鏈缺口處的5’磷酸根與相鄰的一個(gè)3’羥基形成磷酸二酯健。連接所需的能量ATP如動(dòng)物細(xì)胞。3）嘌呤的直接插入嘌呤插入酶受損嘌呤→APS→插入嘌呤（糖苷鍵）K糖基化酶嘌呤插入酶2、切除修復(fù)將損傷的部位（或連同其附近的一定部位）切除，然后用正確配對(duì)的、完好的堿基替代修復(fù)。有多種酶和基因參與過(guò)程識(shí)別（損傷位點(diǎn)→切除→修復(fù)（補(bǔ)）連接DNA連接酶酶和蛋白質(zhì)DNA聚合酶兩個(gè)特點(diǎn)準(zhǔn)確、正確修復(fù)。1堿基切除特點(diǎn)是切除受損傷的堿基。主要過(guò)程是水解受損傷的堿基與脫氧核糖磷酸鏈之間的N糖苷鍵。反應(yīng)由一類(lèi)糖基化酶催化。也即糖基化酶→APS→內(nèi)、外切酶去除殘基。整個(gè)修復(fù)過(guò)程可分以下幾步。2）核甘酸切成（一段寡核苷酸）首先由一個(gè)酶系統(tǒng)識(shí)別損傷；然后在損傷兩側(cè)各水解一個(gè)磷酸二酯鍵；釋放出一段寡核苷酸；填補(bǔ)缺損區(qū)連接酶重新完成連接。3、多聚ADP核糖的作用ADP－核糖基多聚物的形成與存在是提高連接酶活性的重要因素，在DNA損傷修復(fù)過(guò)程中起著重要作用。4、損傷的“耐受”DNA分子的損傷有時(shí)不能立即修復(fù)。特別是在復(fù)制已經(jīng)開(kāi)始，而損傷又在復(fù)制叉附近時(shí)，細(xì)胞會(huì)通過(guò)另一些機(jī)制，使復(fù)制能進(jìn)行下去，待復(fù)制完成后，再通過(guò)某種機(jī)制修復(fù)殘留的損傷。復(fù)制時(shí)損傷并未消除，故稱(chēng)“耐受”。包括重組修復(fù)（復(fù)制后修復(fù)）、SOS修復(fù)1）、重組修復(fù)當(dāng)DNA雙鏈發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)需要另一種機(jī)理來(lái)完成正確的修復(fù)。一種情況是兩條鏈同時(shí)受到損傷；另一種情況是單鏈損傷尚未修復(fù)時(shí)發(fā)生了復(fù)制，造成對(duì)應(yīng)于損傷位置的新鏈缺乏正確模板；此時(shí)需要重組酶系將另一段未受損傷的雙鏈DNA移到損傷位置附近，提供正確的模板，進(jìn)行重組。這便是重組修復(fù)。2）SOS修復(fù)細(xì)胞DNA受到損傷或復(fù)制系統(tǒng)受到抑制，產(chǎn)生一種調(diào)控信號(hào)，解除對(duì)許多基因的抑制，這些基因的產(chǎn)物參與修復(fù)過(guò)程。SOS修復(fù)過(guò)程是在損傷信號(hào)誘導(dǎo)下發(fā)生的，又稱(chēng)可誘導(dǎo)的DNA修復(fù)。修復(fù)過(guò)程容易發(fā)生錯(cuò)誤，故又稱(chēng)易錯(cuò)修復(fù)。4、錯(cuò)配修復(fù)錯(cuò)配修復(fù)是生物維持生命、保持物種穩(wěn)定的種重要功能。從細(xì)菌、酵母直至哺乳動(dòng)物都普遍具有此修復(fù)機(jī)理。在修復(fù)、重組的過(guò)程中或外界損傷因子的作用下都有可能發(fā)生錯(cuò)配。在修復(fù)過(guò)程中首先要識(shí)別錯(cuò)配堿基對(duì)。然后需要分辨錯(cuò)配的哪一側(cè)屬于母鏈，哪一側(cè)屬于新合成的錯(cuò)誤鏈。最后修復(fù)。錯(cuò)配糾正過(guò)程是很復(fù)雜的，至少需要10種活性因子參加?；蚪M修復(fù)的不均一性特點(diǎn)1）轉(zhuǎn)錄活性DNA修復(fù)優(yōu)于靜止的基因2）轉(zhuǎn)錄鏈優(yōu)于非轉(zhuǎn)錄鏈－修復(fù)與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)1、重復(fù)序列中的DNA修復(fù)靈長(zhǎng)類(lèi)細(xì)胞基因組中存在一種高度重復(fù)順序，在非洲綠猴細(xì)胞中此順序占總DNA的15％一20％，堿基組成與總DNA相近，長(zhǎng)度為172BP，沒(méi)有轉(zhuǎn)錄功能。2、活性基因中的修復(fù)活性基因片段中二聚體的清除非?；钴S，如紫外線(xiàn)照射20J2M2后8小時(shí)，已清除47左右。3、活性基因中轉(zhuǎn)錄鏈的修復(fù)轉(zhuǎn)錄鏈優(yōu)先修復(fù)，其機(jī)制以轉(zhuǎn)錄修復(fù)偶聯(lián)因子的作用解釋。DNA修復(fù)基因1、原核細(xì)胞的修復(fù)基因占基因組總量1％。2、酵母有三組RAD基因（RADIATIONSENSITIVE的前三個(gè)字母）3、人類(lèi)基因1）XRCC（XRAYREPAIRCROSSCOMPLEMENTING）基因；2）ERCC三、DNA損傷與修復(fù)的生物學(xué)意義DNA結(jié)構(gòu)的完整與穩(wěn)定在生物學(xué)上有著特別重要的意義。在射線(xiàn)作用下，DNA堿基的損傷或脫落改變了密碼，引起基因的突變。導(dǎo)致細(xì)胞的突變或轉(zhuǎn)化。雙鏈DNASSB能迅速修復(fù)，DSB經(jīng)原位重接很少，重組修復(fù)則易發(fā)生染色體畸變。DNA交聯(lián)會(huì)影響核小體及更高層次的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，影響復(fù)制。活性染色質(zhì)的破壞影響基因的表達(dá)和調(diào)控。與DNA損傷修復(fù)有密切關(guān)系的另一個(gè)因素是真核細(xì)胞的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。而染色質(zhì)包括DNA、組蛋白、非組蛋白及少量RNA。1染色質(zhì)2核小體常染色質(zhì)異染色質(zhì)活性染色質(zhì)非活性染色質(zhì)Χ染色體四、染色質(zhì)損傷對(duì)DNA輻射效應(yīng)的影響一、染色質(zhì)的輻射敏感性染色質(zhì)（CHROMATIN真核細(xì)胞間期的核中DNA、組蛋白、非組蛋白以及少量RNA所組成的復(fù)合體。染色體（CHROMOSOME）有絲分裂期，染色質(zhì)的細(xì)纖絲高度壓縮，濃集成為光學(xué)顯微鏡下能看到的深染的結(jié)構(gòu)。染色質(zhì)和染色體是細(xì)胞周期中不同的時(shí)期的兩種不同形態(tài)，化學(xué)本質(zhì)是相同的。1、染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)與分類(lèi)染色質(zhì)是由核小體的重復(fù)亞單位連接而成串珠狀結(jié)構(gòu)。核小體由直徑為10NM55NM的組蛋白核心和盤(pán)繞于此核心之外的DNA構(gòu)成組蛋白H2A，H2B，H3，H4各兩分子組成八聚體蛋白，外繞DNA長(zhǎng)約200個(gè)堿基對(duì)140個(gè)堿基對(duì)形成超螺旋結(jié)構(gòu)，60個(gè)為連接區(qū)。H1在連接區(qū)連接兩個(gè)核小體，起穩(wěn)定作用常染色質(zhì)與異染色質(zhì)（EUCHROMATINHETEROCHROMATIN）常染色質(zhì)纖絲折疊疏松，在細(xì)胞分裂間期著色微弱，其中含有單一和重復(fù)順序的DNA，能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。異染色質(zhì)纖絲折疊緊密、在細(xì)胞分裂間期著色深，也含有重復(fù)和非重復(fù)順序的DNA，但都不能轉(zhuǎn)錄。隨體DNASATELLITEDNA）往往含有高度重復(fù)序列，聚集于異染色質(zhì)區(qū)，靠近著絲點(diǎn)。常染色質(zhì)和異染色質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上沒(méi)有什么差別，而可能是由于DNA核苷酸順序和折疊不同，導(dǎo)致染色質(zhì)以?xún)煞N不同狀態(tài)存在?；钚匀旧|(zhì)ACTIVECHROMATIN具有轉(zhuǎn)錄活性的染色質(zhì)非活性染色質(zhì)INACTIVECHROMATIN不具有轉(zhuǎn)錄活性的染色質(zhì)2、核小體連接區(qū)的輻射效應(yīng)1、是合成RNA引物的起始部位，前者是DNA復(fù)制的起始步驟2、連接區(qū)DNA是組蛋白H1的結(jié)合部位，組蛋白H1的磷酸化與細(xì)胞分裂啟動(dòng)有關(guān)。此區(qū)受輻射作用使H1的磷酸化受抑制，影響細(xì)胞分裂。3、連接區(qū)DNA易受DNASE的攻擊。受照后更易。4、DNA修復(fù)合成從連接區(qū)開(kāi)始故連接區(qū)受到輻射后，意義更大3、染色質(zhì)緊密程度對(duì)輻射敏感性的影響4、活性染色質(zhì)與非活性染色質(zhì)的輻射敏感性二、染色質(zhì)的輻射降解1機(jī)制2組織的輻射敏感性與復(fù)賽中降解程度3蛋白酶在染色質(zhì)降解中的作用4核酸酶在染色質(zhì)自身消化中的作用三、染色質(zhì)蛋白的輻射效應(yīng)1組蛋白的輻射效應(yīng)2非組蛋白的輻射效應(yīng)第五節(jié)細(xì)胞通信和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的電離輻射效應(yīng)第五蛋白質(zhì)和酶的輻射生物效應(yīng)一、輻射對(duì)蛋白質(zhì)和酶的結(jié)構(gòu)和功能的影響1、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)（PRIMARYSTUCTURE肽鍵1、多肽鏈的氨基酸殘基的排列順序2、基因上遺傳密碼的排列順序決定的3、通過(guò)肽鍵連接即每一種蛋白質(zhì)分子都有自己特有的氨基酸的組成和排列順序即一級(jí)結(jié)構(gòu)，由這種氨基酸排列順序決定它的特定的空間結(jié)構(gòu)，也就是蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定了蛋白質(zhì)的二級(jí)三級(jí)等高級(jí)結(jié)構(gòu)，這就是榮獲諾貝爾獎(jiǎng)的著名的ANFINSEN原理。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)（SECONDARYSTRUCTURE）多肽鏈借助于氫鍵沿一維方向排列成具有周期性結(jié)構(gòu)的構(gòu)象，是多肽鏈局部的空間結(jié)構(gòu)（構(gòu)象），主要有?。菪?、Β－折疊、Β－轉(zhuǎn)角等幾種形式，它們是構(gòu)成蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)的基本要素。三級(jí)結(jié)構(gòu)（TERTIARYSTRUCTURE）主要針對(duì)球狀蛋白質(zhì)而言是指整條多肽鏈由二級(jí)結(jié)構(gòu)元件構(gòu)建成的總?cè)S結(jié)構(gòu)，包括一級(jí)結(jié)構(gòu)中相距遠(yuǎn)的肽段之間的幾何相互關(guān)系骨架和側(cè)鏈在內(nèi)的所有原子的空間排列。球狀蛋白質(zhì)，側(cè)鏈基團(tuán)的定位是根據(jù)它們的極性安排的蛋白質(zhì)特定的空間構(gòu)象是由氫鍵、離子鍵、偶極與偶極間的相互作用、疏水作用等作用力維持的，疏水作用是主要的作用力。有些蛋白質(zhì)還涉及到二硫鍵。四級(jí)結(jié)構(gòu)（QUATERNARYSTRUCTURE）四級(jí)結(jié)構(gòu)是指在亞基和亞基之間通過(guò)疏水作用等次級(jí)鍵結(jié)合成為有序排列的特定的空間結(jié)構(gòu)。亞基通常由一條多肽鏈組成，有時(shí)含兩條以上的多肽鏈，單獨(dú)存在時(shí)一般沒(méi)有生物活性。1、輻射對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響一級(jí)結(jié)構(gòu)主要是肽鍵斷裂，其次巰基氧化、二硫鍵還原、旁側(cè)羥基被氧化等。高級(jí)結(jié)構(gòu)主要是肽鍵氫鍵、側(cè)鏈氫鍵、離子鍵和疏水鍵的改變。一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變必然影響高級(jí)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的功能改變，酶活性改變。二、輻射對(duì)蛋白質(zhì)和酶生物合成的影響DNA→→→MRNA→→→PROTEIN輻射對(duì)DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的影響均可不同程度的影響蛋白質(zhì)合成，對(duì)其翻譯過(guò)程產(chǎn)生效應(yīng)。抑制與激活并存三、輻射對(duì)蛋白質(zhì)分解代謝的影響分解代謝增強(qiáng)IR→細(xì)胞溶酶體破壞→組織蛋白酶釋放→PR降解↑蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物↑如尿中肌酸、牛黃酸、尿素等↑復(fù)習(xí)與思考了解2、4、5節(jié)熟悉3和6節(jié)掌握1節(jié)名詞解釋DNA鏈的斷裂與交聯(lián)，回復(fù)修復(fù)，重組修復(fù)，SOS修復(fù)，原癌基因，腫瘤抑制基因思考題1、試述輻射引起DNA鏈斷裂的特點(diǎn)及其分子機(jī)制。2、影響DNA－蛋白質(zhì)交聯(lián)的因素有哪些3、試述輻射引起DNA損傷的生物學(xué)意義。4、試述回復(fù)修復(fù)的種類(lèi)及機(jī)理。7、目前在輻射致癌的分子機(jī)制中，初步認(rèn)識(shí)到的有哪幾點(diǎn)

簡(jiǎn)介：HBV分子生物學(xué)陳忠斌博士軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所電磁與激光生物學(xué)研究室在國(guó)內(nèi)因Ｂ型肝炎最為嚴(yán)重，加上會(huì)演變成慢性肝炎，肝硬化甚至肝癌，所以對(duì)人健康之威脅最大。HBV的危害性CLINICALEPIDEMIOLOGICCRELATIONSINHBVINFECTIONNENGLJMED3591486OCTOBER22008350MILLIONHBVCARRIERSWLDWIDEHBV350MILLIONHCV185MILLION乙肝病毒（HBV）與乙型肝炎乙肝病毒（HEPATITISBVIRUS，HBV）可引起肝臟急性、慢性感染，肝硬化和肝細(xì)胞癌（HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC）全世界HBV攜帶者數(shù)量已達(dá)到3億5千萬(wàn)每年死于HBV導(dǎo)致的肝癌患者數(shù)量超過(guò)100萬(wàn)我國(guó)大約有1億2千萬(wàn)的HBV攜帶者慢性乙肝是一種潛在威脅生命的疾病。全球每年有超過(guò)50萬(wàn)人死于原發(fā)性肝癌，而其中多達(dá)80％的原發(fā)性肝癌是由慢性乙肝引起的。在4億慢性乙肝患者中，有75％生活在亞洲，而中國(guó)是全球乙肝和肝癌負(fù)擔(dān)最沉重的國(guó)家。中國(guó)大陸的HBV流行率最高，這里的HBV病毒攜帶者占全球總數(shù)的13以上。據(jù)估計(jì)，中國(guó)大陸有1213億乙肝病毒攜帶者。中國(guó)臺(tái)灣的慢性HBV感染率為1520，估計(jì)有300萬(wàn)乙肝病毒攜帶者。韓國(guó)約有225－227萬(wàn)乙肝病毒攜帶者。印度的乙肝病毒攜帶者估計(jì)達(dá)3400萬(wàn)。新加坡慢性HBV感染率為4％，約有15萬(wàn)乙肝病毒攜帶者。菲律賓的慢性HBV感染率為516。泰國(guó)慢性HBV感染率為36，約有300萬(wàn)乙肝病毒攜帶者。香港地區(qū)慢性HBV感染率為88，約有70萬(wàn)乙肝病毒攜帶者。病毒學(xué)分類(lèi)HEPADNAVIRIDAETHOHEPADNAVIRUSHBVWHVGSHVAVIHEPADNAVIRUSDHBV病毒結(jié)構(gòu)和大小ENV（HBSAG大中小DANE’SPARTICLE42NMHBCAGCEDNAPHBVDNA乙型肝炎病毒乙肝病毒的結(jié)構(gòu)HBVVIRIONSDANEPARTICLES20NMHBSAGPARTICLESSTRUCTUREOFHBSAGASSOCIATEDPARTICLESPHOSPHOTUNGSTICACID–NEGATIVESTAINHBV病毒學(xué)嗜肝DNA病毒科，基因長(zhǎng)32KB4個(gè)開(kāi)放讀碼框架PRESS、POLYMERASE、PRECECE、XCEPROMOTER和PRECE區(qū)變異X蛋白與肝癌的發(fā)生有關(guān)CCCDNA是HBV復(fù)制的模板大多數(shù)抗病毒藥物對(duì)CCCDNA的作用小或無(wú)作用HBVGENOMEPROTEOMESPRES1PRES2SPRES1PRES2PHSARSCPRECCFSHBCAGHBEAGPDNAPDNAPXXGENEHBXAG病毒的基因組HBV基因組又稱(chēng)HBVDNA由3200BP組成為環(huán)狀部分雙股DNA分長(zhǎng)L短S兩股L鏈含4個(gè)開(kāi)放讀碼區(qū)OPENREADINGFRAMEF乙肝病毒的分生檢驗(yàn)掌握血清中HBVDNA的提取方法及原理，HBVDNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR的測(cè)定原理了解核酸測(cè)定引物設(shè)計(jì)原理，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的工作原理及操作要求復(fù)習(xí)“生物大分子的分離純化”及“聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)”章節(jié)病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果分析介紹血清中病毒DNA的提取方法和原理學(xué)生分組提取血清中HBVDNA介紹實(shí)時(shí)熒光定量PCR的測(cè)定原理介紹一般核酸測(cè)定引物設(shè)計(jì)原理介紹HBVDNA測(cè)定引物設(shè)計(jì)思路1DNA提取方法有哪些2PCR原理是什么實(shí)時(shí)熒光PCR原理與普通PCR的什么不同乙型肝炎預(yù)防方法疫苗注射最有效是接受乙型肝炎疫苗注射疫苗一共需要注射三次，第一和第二次相隔一個(gè)月，第二和第三之相隔五個(gè)月。依時(shí)接受三次疫苗注射后，大約9095的人可以產(chǎn)生長(zhǎng)期的免疫力。接受乙型肝炎預(yù)防疫苗之前，應(yīng)該預(yù)先檢驗(yàn)血液，只有從未被乙型肝炎感染過(guò)的人，才需要接受疫苗注射。乙肝病毒細(xì)胞模型和動(dòng)物模型沒(méi)有可感染的細(xì)胞模型只有穩(wěn)定整合HBV基因組的細(xì)胞系HEPG2215細(xì)胞轉(zhuǎn)基因鼠；動(dòng)物HBV土撥鼠肝炎病毒（WHBV）、鴨肝炎病毒（DHBV）抗乙型肝炎病毒治療①抑制病毒復(fù)制，減少傳染性；②改善肝功能；③減輕肝組織病變；④提高生活質(zhì)量；⑤減少或阻止肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生?？共《局委煹哪康穆砸倚透窝卓共《局委熾y度慢性HBV感染難清除●嬰幼兒期感染免疫耐受性HBEAG–慢性乙型肝炎復(fù)發(fā)率很高HBVCCCDNA難消失●CCCDNA與肝細(xì)胞“共存亡”●只要CCCDNA存在復(fù)制不會(huì)停止●當(dāng)前尚無(wú)藥物能直接作用于CCCDNA乙肝的綜合治療抗病毒治療免疫調(diào)節(jié)治療“保肝”治療中醫(yī)藥治療基礎(chǔ)治療及心理治療基因治療抗病毒藥物種類(lèi)目前尚無(wú)一種能迅速、直接殺死清除乙肝病毒的藥物，最好的抗病毒藥物療效也僅能達(dá)到50％左右。目前國(guó)際醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的治療慢性乙肝有確切療效的抗病毒藥物主要有兩大類(lèi)干擾素如賽若金（重組人Α1B干擾素）、進(jìn)口及國(guó)產(chǎn)Α2A，Α2B干擾素等。核苷類(lèi)似物拉米夫定、泛昔洛韋等。APPROVEDTREATMENTSFCHRONICHEPATITISBSTARDINTERFERONIFNPEGYLATEDIFNLAMIVUDINELAM拉米夫定ADEFOVIRDIPIVOXILADV阿德福韋ENTECAVIRETV恩替卡韋TELBIVUDINELDT干擾素1990年美國(guó)FDA正式批準(zhǔn)干擾素Α2B（商品名甘樂(lè)能）治療慢性乙型肝炎1991年美國(guó)FDA正式批準(zhǔn)干擾素Α2B（商品名甘樂(lè)能）治療慢性丙型肝炎1998年FDA批準(zhǔn)干擾素Α2B（商品名甘樂(lè)能）聯(lián)合利巴韋林治療慢性丙型肝炎，成為慢性丙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)治療方案拉米夫定【別名】賀普丁拉米夫定【外文名】LAMIVUDINE，HEPTODIN賀維力阿德福韋酯HEPSERA葛蘭素史克公司出品的最新抗乙肝病毒新藥（賀維力片劑）制造商葛蘭素史性狀本品為類(lèi)白色片恩替卡韋是一種有效的、選擇性抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的脫氧鳥(niǎo)嘌呤核苷類(lèi)似物由BRISTOLMYERSSQUIBB公司研究開(kāi)發(fā)用于治療乙型肝炎。體外試驗(yàn)表明恩替卡韋比其他核苷類(lèi)似物更有效。動(dòng)物模型和人體臨床研究結(jié)果顯示恩替卡韋具有極強(qiáng)的抑制乙型肝炎病毒復(fù)制降低血清病毒DNA水平的作用對(duì)耐拉米夫定的突變病毒株仍然有效且未見(jiàn)明顯的不良反應(yīng)和線(xiàn)粒體毒性。2005年3月31日，美國(guó)FDA批準(zhǔn)百時(shí)美施貴寶（BRISTOLMYERSSQUIBB）公司了恩替卡韋（ENTECAVIR）現(xiàn)有乙肝抗病毒藥物中，核苷類(lèi)藥物初治患者4年的耐藥發(fā)生率分別為拉米夫定71，阿德福韋18，恩替卡韋1。NENGLJMED3591486OCTOBER22008NENGLJMED3591486OCTOBER22008NENGLJMED3591486OCTOBER22008SEROLOGICALSIGNSOFEMERGENCEOFADRUGRESISTANTMUTANTALANKAYFABIENZOULIMVIRUSRESEARCH1272007164–176HBVPOLYMERASEDRUGRESISTANTMUTANTSALANKAYFABIENZOULIMVIRUSRESEARCH1272007164–176HBV治療性疫苗目前有三大類(lèi)1、乙肝病毒前S與S片段多肽治療性疫苗；2、細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞表位多肽治療性疫苗；3、DNA疫苗。復(fù)習(xí)題簡(jiǎn)述HBV基因組特征簡(jiǎn)述HBV復(fù)制過(guò)程以及可能的阻斷病毒復(fù)制的位點(diǎn)簡(jiǎn)述HBV治療藥物種類(lèi)和應(yīng)用中存在問(wèn)題

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