簡介：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論又人源CFIM復(fù)合物識別PREMRNA的分子機(jī)制及酵母PUB1蛋白結(jié)構(gòu)的生物學(xué)研究作者姓名李恒學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)和分子生物學(xué)導(dǎo)師姓名滕脈坤教授牛立文教授完成時(shí)間二。一O年四月二十日UNIVERSITYOFSCIENCEANDTECHNOLOGYOFCHINAADISSERTATIONFORDOCTOR’SDEGREESTRUCTURAIBASISOFPREMRNARECOGNITIONBYCFIMANDTHESTRUCTUREOFYEASTPUB1AUTHOR’SNAMEHENGLISPECIALITYBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYSUPERVISORPROFMAIKUNTENGPROFLIWENNIUFINISHEDTIMEAPRIL20加，2010

簡介：IILILLLLLLLLLLLLILIIIIILLLIIIIIIKLLIIQLLIIIY3261082單位代碼10602學(xué)號2叭501L100分類號G63391密級公開囫屋西吁謹(jǐn)靠謦＼／GUAN6XLNORMALU～LVERSN’V碩士專業(yè)學(xué)位論文微視頻資源在高中生物學(xué)課堂教學(xué)中的應(yīng)用研究以人教版高中生物學(xué)分子與細(xì)胞模塊為例APPLICATIONRESEARCHONMICROVIDEESOURCESSTUDIESFORBIOLOGYCLASSROOMTEACHINGINSENIORHIGHSCHOOLTHKETHEMODULEPMOLECULARANDCELL”THECOMPULSORYBIOLOGYTEXTBOOKFOREXAMPLE學(xué)院專業(yè)研究方向年級研究生指導(dǎo)教師完成日期生命科學(xué)學(xué)院學(xué)科教學(xué)生物生物課程與教學(xué)論2015級楊艷英周善義教授2017年4月微視頻資源在高中生物學(xué)課堂教學(xué)中的應(yīng)用研究以人教版高中生物學(xué)分子與細(xì)胞模塊為例研究生楊艷英年級2015級導(dǎo)師周善義教授學(xué)科專業(yè)學(xué)科教學(xué)生物研究方向生物課程與教學(xué)論摘要隨著信息化的不斷發(fā)展，現(xiàn)代設(shè)備彌補(bǔ)了傳統(tǒng)的教學(xué)工具的不足，促進(jìn)了教學(xué)形式的更新，最終使得教學(xué)資源多樣化的發(fā)展。利用信息化的教學(xué)資源來激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和提高課堂教學(xué)的效率受到教育界的重視。微視頻是最近出現(xiàn)的新興概念，如何在課堂教學(xué)中充分利用微視頻資源成為未來教育研究熱門的話題。本研究以微學(xué)習(xí)理論、建構(gòu)主義為理論和多元智能理論為指導(dǎo)，采用文獻(xiàn)研究法、問卷調(diào)查法和教育實(shí)驗(yàn)法等研究方法，結(jié)合高中生物學(xué)教學(xué)實(shí)踐，以富川高級中學(xué)高一年級生物學(xué)教學(xué)為基礎(chǔ)，通過對課堂教學(xué)的實(shí)驗(yàn)來探索微視頻資源在高中生物學(xué)課堂教學(xué)中的應(yīng)用效果，驗(yàn)證微視頻資源在提高高中生物學(xué)教學(xué)現(xiàn)狀的積極效用。本文的核心內(nèi)容是研究如何應(yīng)用微視頻資源來提高高中生物學(xué)課堂教學(xué)效果，具體的研究內(nèi)容如下1、對微視頻資源進(jìn)行概念界定，為微視頻資源提高高中生物學(xué)教學(xué)效果尋找理論依據(jù)。2、對微視頻資源的來源、微視頻的制作進(jìn)行了系統(tǒng)的總結(jié)。3、對微視頻資源在高中生物學(xué)課堂教學(xué)中的具體應(yīng)用模式給出建議。4、以分子與細(xì)胞一書為例，在分析教學(xué)內(nèi)容的基礎(chǔ)上，探討了微視頻資源應(yīng)用于高中生物學(xué)課堂教學(xué)的可能性及應(yīng)用效果。5、教學(xué)實(shí)踐對象富川高級中學(xué)的高一年級12班和13班，12班采用微視頻資源教學(xué)，作為實(shí)驗(yàn)班，13班不采用微視頻教學(xué)，作為對照班。設(shè)計(jì)了一節(jié)課的調(diào)查問卷、考試試題和一個(gè)學(xué)期的調(diào)查問卷、考試試題來驗(yàn)證應(yīng)用微視頻資源輔助高中生物學(xué)課堂教學(xué)對學(xué)生的影響。研究表明，微視頻資源在高中生物學(xué)課堂教學(xué)中的應(yīng)用，能激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣、提高學(xué)生課堂學(xué)習(xí)效率、增強(qiáng)學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性；提高學(xué)生的學(xué)習(xí)成績，促進(jìn)學(xué)生對生物學(xué)科知識的理解和應(yīng)用。本文對微視頻在高中生物學(xué)課堂教學(xué)中應(yīng)用的研究，希望能提高一線教育工作者對微視頻資源重要性的認(rèn)識，增強(qiáng)教師獲取微視頻資源信息和利用現(xiàn)代教育設(shè)備技術(shù)的能力，對提高生物學(xué)課堂教學(xué)效果具有可參考的價(jià)值。關(guān)鍵詞微視頻；高中生物學(xué)；課堂教學(xué)；教學(xué)效果

簡介：指導(dǎo)教師簽名壘弘壘生能研究答辯委員會主席奎絲丞數(shù)援逝江太堂醫(yī)堂院委員1韭感主教援浙江太堂醫(yī)堂院委員2睦全震巫究雖國塞瀣注屋箍三漁注硒究逝委員3筐斂鑫熬援逝塹太堂生金型堂堂院委員4登建盛熬援逝江太堂生金型堂堂院學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書及取得的人已經(jīng)發(fā)的學(xué)位或已在論文【1日本學(xué)位論文作者完全了解逝鎏盤堂有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝望盤堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名萎蚤嫉導(dǎo)師簽名簽字日期加、＼年B月【2日簽字只期叫／R年名月

簡介：分類號編號中國科學(xué)院研究生院博士學(xué)位論文云然叢僉壬絲金物塑弓I起線粒佳融金的絲堂生物堂研究樂雯指導(dǎo)教師隆筐巫塞雖主國科堂陵動物巫塞壓申請學(xué)位級別簋學(xué)科專業(yè)名稱細(xì)胞生物堂論文提交日期壘Q生墨月論文答辯日期星Q生墨旦答辯委員會主席樂雯天然小分子化合物S3引起線粒體融合的化學(xué)生物學(xué)研究能直接與去泛素化酶DEUBIQUITINASE相互作用。因此我們檢測了S3處理前后線粒體蛋白的泛素化水平變化，發(fā)現(xiàn)S3可以增加線粒體蛋白的泛素化水平。并且，在用S3對細(xì)胞進(jìn)行處理后，MFNL和MFN2的泛素化水平都有顯著增加，但表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化，說明這種泛素化與蛋白的降解并無關(guān)聯(lián)，而很有可能是一種新的蛋白功能調(diào)節(jié)機(jī)制。有文獻(xiàn)報(bào)道，USP30是一個(gè)定位于線粒體外膜的去泛素化酶。我們進(jìn)一步研究表明，USP30確實(shí)參與了S3介導(dǎo)的線粒體融合。我們發(fā)現(xiàn)S3可以通過與USP30的活性位點(diǎn)結(jié)合從而抑制USP30的去泛素化酶活性。在細(xì)胞中高表達(dá)USP30，可以部分抑制S3引起的線粒體融合，而活性位點(diǎn)突變的USP30則沒有這種功能。在用S3處理細(xì)胞后，出現(xiàn)了很多與線粒體有共定位或依附于線粒體的泛素聚集點(diǎn)，這提示線粒體上蛋白的泛素化水平有所增加。應(yīng)用免疫共沉淀的方法，我們發(fā)現(xiàn)USP30與MFNL及MFN2之間有相互作用。并且，在高表達(dá)USP30的情況下，MFN2的泛素化水平有明顯減少。這提示，S3可能是通過抑制USP30來調(diào)節(jié)MFNL和MFN2的泛素化水平的，而MFNL和MFN2的泛素化水平可能是MFNL和MFN2的融合活性的一個(gè)重要調(diào)控機(jī)制。但MFNL和MFN2具體是通過哪種泛素化修飾來調(diào)控線粒體融合活性的，還需要進(jìn)一步的研究。綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的可以促進(jìn)線粒體融合的小分子化合物S3。在MFNL或MFN2敲除的細(xì)胞中，S3引起的線粒體形態(tài)變化可以恢復(fù)線粒體的正常功能。S3可以抑制線粒體定位的去泛素化酶USP30的活性，從而改變MFNL和MFN2的泛素化修飾水平，這可能是S3促進(jìn)線粒體融合的機(jī)制。關(guān)鍵詞線粒體融合，小分子化合物，線粒體融合素1／2MFNL／2，去泛素化，USP30

簡介：㈣Ⅲ|||IL川IIIIIMY3298360分類號彈中唯JF鬣火垮碩士學(xué)位論文密級編號主土壘鱉堂塾堂土壘全塾壘整宣堡客以分子與細(xì)胞模塊為例學(xué)位申請人姓名塞羞疊申請學(xué)位學(xué)生類別全魚壹L塑圭申請學(xué)位學(xué)科專業(yè)鱟疊查噬生蟄2指導(dǎo)教師姓名蟄墊壘送⑧慧篙‰S碩士學(xué)位論文高中生物學(xué)教學(xué)中生命觀念培育研究以分子與細(xì)胞模塊為例論文作者朱為娜指導(dǎo)教師楊旭教授學(xué)科專業(yè)學(xué)科教學(xué)生物研究方向?qū)W科教學(xué)生物華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2017年5月

簡介：論文題目人教版高中生物分子與細(xì)胞生物學(xué)原理的教學(xué)探究聊城大學(xué)分類號G427單位代碼10447密級無學(xué)號1520150101專業(yè)碩士學(xué)位論文人教版高中生物分子與細(xì)胞生物學(xué)原理的教學(xué)人教版高中生物分子與細(xì)胞生物學(xué)原理的教學(xué)探究探究INVESTIGATIONTOTHETEACHINGOFBIOLOGYPRINCIPLEINTHE“MOLECULARCELLULAR”O(jiān)FHIGHSCHOOLBIOLOGY（PEPEDITION）作者姓名白璐白璐專業(yè)名稱學(xué)科教學(xué)（生物）學(xué)科教學(xué)（生物）指導(dǎo)教師姓名賈少波賈少波學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院論文提交日期20172017年06月

簡介：點(diǎn)擊查看更多15467.黃渤海中華哲水蚤現(xiàn)場食物的分子生物學(xué)分析方法及應(yīng)用精彩內(nèi)容。

簡介：原創(chuàng)性聲明本人聲明所遞交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的學(xué)術(shù)研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他任何人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括未獲得注如沒有其他需要特別聲明的，本欄可空或者其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。同我一起工作的同學(xué)對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名垂，1繆簽字日期沙叢I年鄉(xiāng)月／婦I學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解廣西醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)廣西醫(yī)科大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名參L瑤導(dǎo)師簽字芳P／。，簽字日期加LY年占月J加簽字日期秒曠年鄉(xiāng)月／功膠愿丞凝膠透昱筮置形成的盆壬生物坐扭劍2Q12級亟堂位J盆文目錄一、摘要中文1摘要英文5二、前言10一、日U舌JU參考文獻(xiàn)12三、第一部分膠原水凝膠誘導(dǎo)大鼠骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨形成過程中的相關(guān)信號通路151、材料152、方法163、結(jié)果284、討侖405、參考文獻(xiàn)44四、第二部分膠原水凝膠在體內(nèi)成軟骨誘導(dǎo)的相關(guān)信號通路471、材料472、方法473、結(jié)果564、討侖645、參考文獻(xiàn)69五、附錄主要中英文縮略詞表72六、綜述731、生物材料復(fù)合干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)作用的研究742、參考文獻(xiàn)82七、致謝90八、攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文91

簡介：中圖分類號UDC學(xué)校代碼10055密級公開高蕊犬淫博士學(xué)位論文球毛殼菌次生代謝的分子生物學(xué)研究MOLECULARBASISOFTHESECONDARYMETABOLISMINCHAETOMIUM答辯委員會主席陳錦英GLOBOSUM指導(dǎo)教師朱旭東教授南開大學(xué)研究生院二O一三年五月南開大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明7㈣本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本學(xué)位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、己公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名胡田2013年5月26日非公開學(xué)位論文標(biāo)注說明本頁表中填寫內(nèi)容須打印根據(jù)南開大學(xué)有關(guān)規(guī)定，非公開學(xué)位論文須經(jīng)指導(dǎo)教師同意、作者本人申請和相關(guān)部門批準(zhǔn)方能標(biāo)注。未經(jīng)批準(zhǔn)的均為公開學(xué)位論文，公開學(xué)位論文本說明為空白。論文題目申請密級口限制≤2年口秘密≤10年口機(jī)密≤20年保密期限20年月目至20年月日審批表編號批準(zhǔn)T3期20年月日南開大學(xué)學(xué)位評定委員會辦公室蓋章有效注限制★2年可少于2年秘密★10年可少于10年機(jī)密★20年可少于20年

簡介：我們采用以PCR為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)技術(shù)以及基因芯片技術(shù)建立了水中常見致病菌的檢測與鑒定系統(tǒng)第一套方法是以PCR為基礎(chǔ)的分子生物學(xué)檢測技術(shù)采用逐步縮小范圍的PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)對水中常見致病菌的檢測與鑒定第二套方法是基因芯片檢測與鑒定技術(shù)我們利用在細(xì)菌學(xué)分類上具有重要意義的16SRRNA基因作為檢測的靶分子并在期間設(shè)計(jì)檢測探針建立一套水中致病菌的基因芯片快速檢測技術(shù)4小時(shí)這兩套技術(shù)不僅具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值而且還可以優(yōu)勢互補(bǔ)第一套方法實(shí)用性強(qiáng)可以檢測到細(xì)菌的不同血清型但操作較復(fù)雜、耗時(shí)較長使用試劑多第二套技術(shù)檢測容量大一次實(shí)驗(yàn)可以檢測幾乎所有的致病菌且操作簡例、快速使用試劑很少但需要專門的儀器設(shè)備實(shí)際應(yīng)用時(shí)可依據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件和需要選擇其中的任何一種

簡介：一種高效促進(jìn)血小板生成的全新型融合蛋白SCFTPO的分子設(shè)計(jì)及其生物學(xué)活性研究博士后劉楠導(dǎo)師奚永志教授中文摘要血小板減少癥不僅是惡性血液病如白血病、淋巴瘤及多發(fā)性骨髓瘤等誘導(dǎo)緩解、鞏固和加強(qiáng)化療階段的主要并發(fā)癥，也是實(shí)體瘤及其它影響造血細(xì)胞疾病患者放化療過程常見的嚴(yán)重并發(fā)癥。血小板減少癥的出現(xiàn)不僅增加了患者出血、感染引起的相關(guān)死亡風(fēng)險(xiǎn)，也由此限制了使用細(xì)胞毒性化療藥物的最大殺傷劑量。對肺癌、乳腺癌及卵巢癌等實(shí)體瘤有特效的新化療藥GEMCITABINE治療過程中出現(xiàn)的血小板減少癥限制了該藥物的臨床有效應(yīng)用。同時(shí)，血小板減少癥也是骨髓增生異常綜合征MDS、特發(fā)性血小板減少性紫癜ITP、愛滋病AIDS及慢性肝病等疾病治療過程中常見并發(fā)癥，這類疾病出現(xiàn)的慢性血小板減少癥起因?yàn)檠“迳扇毕莼驕p少、免疫或非免疫性血小板破壞增強(qiáng)，另外進(jìn)行肝移植、心血管手術(shù)等患者也常伴發(fā)血小板減少癥，最終引起患者死亡率增加。有關(guān)血小板減少癥的治療始終是世界性醫(yī)學(xué)難題。目前臨床上治療嚴(yán)重血小板減少癥的唯一方法是血小板輸注。盡管輸注血小板可以暫時(shí)緩解化放療所致血小板減少引起的嚴(yán)重出血等并發(fā)癥，但多次反復(fù)輸注血小板增加了疾病傳播機(jī)會、發(fā)熱、同源免疫反應(yīng)及移植物抗宿主病等不良反應(yīng)，也增加了患者住院費(fèi)用及輸注帶來的不適感。而且，社會上有限的供血來源也制約著血小板輸注。再者，臨床上為達(dá)到較為徹底地殺滅殘留白血病或其它腫瘤細(xì)胞而越來越多使用的多藥物、高劑量聯(lián)合化療方案和造血干細(xì)胞移植以及強(qiáng)支持治療也增加了對血小板成分輸血的需求。因此，為緩解血小板輸注的供需矛盾并降低血小板輸注的治療費(fèi)用，以及減少血小板輸注引起的不必要的諸多不利因素，努力尋找一種有效促進(jìn)血小板生成劑，從而徹底改變臨床上化放療引起的嚴(yán)重血小板減少癥，已顯得十分迫切和必要。TPO和SCF的克隆成功為解決這一醫(yī)學(xué)難題帶來了希望。細(xì)胞因子是由造血系統(tǒng)產(chǎn)生的一種高活性的蛋白質(zhì)或多肽，通過與其細(xì)胞表面相應(yīng)的受體結(jié)合，調(diào)節(jié)相應(yīng)靶細(xì)胞的增殖、分化及其靶細(xì)胞介導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)過程從而參與機(jī)體造血調(diào)控、免疫應(yīng)答等生理及病理過程。利用細(xì)胞因子的這一特性，憑借基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)將兩種細(xì)胞因子構(gòu)建成融合細(xì)胞因子，使之即具有單個(gè)細(xì)胞因子的生物活性，也可通過生物活性的互補(bǔ)及協(xié)調(diào)效應(yīng)發(fā)揮出較單一細(xì)胞因子更佳的生物學(xué)活性，而同時(shí)又可避免兩種細(xì)胞因子單獨(dú)發(fā)揮作用時(shí)因高劑量使用出現(xiàn)的毒副作用，從而為細(xì)胞因子的理論研究和臨床應(yīng)用提供新的方法。迄今為止，國內(nèi)外學(xué)者經(jīng)過不懈的努力構(gòu)建了許多的細(xì)胞因子融合蛋白，比較成功細(xì)胞因子如MEN1103GMCSFEPO，PIX321GMCSFIL3和IL3EPO已進(jìn)入了ⅠⅡ期臨床實(shí)驗(yàn)，表現(xiàn)出較好的生物學(xué)功能和良好的臨床應(yīng)用前景。可以斷言，細(xì)胞因子融合蛋白是當(dāng)今免疫學(xué)研究領(lǐng)域的一個(gè)熱門問題。人類TPO基因定位于3號染色體長臂2區(qū)6帶或7帶3Q26，27，含5個(gè)編碼的外顯子，編碼產(chǎn)物為335個(gè)氨基酸，包括前面21個(gè)氨基酸的信號肽序列，分子量為70KD。TPO結(jié)構(gòu)包括兩個(gè)特征性結(jié)構(gòu)氨基端受體結(jié)合區(qū)和羧基端TPO糖基化區(qū)，其中154氨基酸長度的氨基端與人EPO氨基端有23％的序列同源性，與IFN較少同源，該區(qū)是TPO的功能區(qū)，主要起結(jié)合受體、信號傳導(dǎo)和支持細(xì)胞增殖作用；羧基端區(qū)153332約占70KDTPO的一半，與其他已知的蛋白無同源性，但富含絲，蘇和脯氨酸，主要增強(qiáng)TPO的穩(wěn)定性。TPO在CYS7CYS151和CYS29CYS85有兩個(gè)與其生物學(xué)功能有密切關(guān)系的二硫鍵。TPO是巨核細(xì)胞成熟的主要調(diào)節(jié)子，能誘導(dǎo)巨核系祖細(xì)胞的增殖；TPO也能支持造血干細(xì)胞的存活，與IL3，SCF和GMCSF協(xié)同誘導(dǎo)造血干細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞循環(huán)并增加原始和分化造血祖細(xì)胞數(shù)量。干細(xì)胞因子SCF，又稱CKIT配體，是一個(gè)作用于較原始和成熟祖細(xì)胞的造血生長因子，其基因定位于12號染色體，含有8個(gè)外顯子，基因長50KB。由于外顯子6處的剪切，SCF可有兩種形式SCF248和SCF220膜結(jié)合型。SCF248在ALA165位有一個(gè)特殊的蛋白裂解位點(diǎn)，產(chǎn)生由胞外區(qū)165氨基酸組成的可溶型SCF；SCF220缺乏此裂解位點(diǎn)，由157氨基酸胞外區(qū)，27氨基酸跨膜區(qū)和36氨基酸胞漿區(qū)組成。兩種形式的SCF都具有生物學(xué)活性，都能促進(jìn)祖細(xì)胞的存活，與其它造血細(xì)胞因子如GMCSF，EPO，GCSF和IL3協(xié)同作用支持多系克隆BFUE，CFUGM和CFUGEMM等的生長。SCF在體內(nèi)外擴(kuò)增干細(xì)胞、干細(xì)胞動員、再生障礙貧血等方面有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究通過基因工程方法設(shè)計(jì)并構(gòu)建了攜帶SCFTPO融合基因的原核表達(dá)載體，收集并純化該融合蛋白。在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了該融合蛋白有較好的造血促進(jìn)作用。首先，根據(jù)已發(fā)表的資料設(shè)計(jì)兩對引物，以從胎肝細(xì)胞中提取總RNA為模板進(jìn)行RTPCR，擴(kuò)增所需的SCF和TPO氨基端功能區(qū)片段。采用融合基因策略，將SCF和TPO基因融合并連接于原核表達(dá)載體PET32A的SALINOTI位點(diǎn)中，通過05MIPTG誘導(dǎo)引發(fā)下游的SCFTPO融合基因的高表達(dá)。融合基因主要以包涵體形式表達(dá)，表達(dá)量高達(dá)全菌蛋白的30％以上。分別采用抗SCF和抗TPO的多克隆抗體對上述表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行WESTERNBLOT鑒定，發(fā)現(xiàn)在60KD處分別有明顯的陽性條帶，表明我們已成功地獲得了SCFTPO融合蛋白。隨后，我們建立了高效快捷行之有效的分離大量重組SCFPO融合蛋白的下游純化路線，即金屬螯合層析法。由于所選用的原核表達(dá)載體PET32A在表達(dá)目的蛋白N端帶有6個(gè)組氨酸，這將十分有利于通過NINTA金屬螯合層析法快速高效地純化表達(dá)產(chǎn)物。由此方法純化的SCFPO融合蛋白的純度可達(dá)90％以上，而且總回收率高。最后我們開展了對SCFPO融合蛋白體外生物學(xué)功能的研究。采用分析軟件，對我們設(shè)計(jì)的SCFPO融合蛋白的柔性、抗原性、親水性和二級結(jié)構(gòu)等分子生物學(xué)特性進(jìn)行了計(jì)算機(jī)模擬預(yù)測。證明該融合蛋白保留了SCF和TPO原有氨基端的生物學(xué)特性，所設(shè)計(jì)的接頭具有高柔性、低抗原性和低表位性。選用對人GMCSF依賴的MO7E細(xì)胞株鑒定了純化復(fù)性后SCFTPO融合蛋白對MO7E細(xì)胞株的促增殖作用。MTT法檢測的結(jié)果表明SCFTPO融合蛋白能明顯刺激MO7E細(xì)胞的增殖。該融合蛋白在一定培養(yǎng)條件下對小鼠骨髓CFUMK集落細(xì)胞具有維持生長作用，這種作用可以持續(xù)3周。綜上所述，通過本研究我們成功地構(gòu)建了SCFTPO融合基因的高效原核表達(dá)體系，通過純化得到了純度高達(dá)90％的目的蛋白，應(yīng)用兩步透析法獲得了復(fù)性良好的SCFTPO融合蛋白，在體外實(shí)驗(yàn)中初步證實(shí)SCFTPO融合蛋白同時(shí)具有SCF和TPO的生物活性，與標(biāo)準(zhǔn)品相似。SCFTPO融合蛋白能夠促進(jìn)造血細(xì)胞增殖，為進(jìn)一步進(jìn)行，制備人SCFTPO融合蛋白以便深入研究該SCFTPO融合蛋白的體內(nèi)造血活性奠定了基礎(chǔ)。

簡介：點(diǎn)擊查看更多新生小鼠輪狀病毒腹瀉病理學(xué)及分子生物學(xué)致病機(jī)制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多遺傳性血管性水腫臨床及分子生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：在外科臨床嚴(yán)重創(chuàng)傷修復(fù)和手術(shù)治療中常需要血管移植物，自體血管取材受限，但是小于5MM直徑的人工血管或在血流速度較慢的大口徑應(yīng)用的人工血管早期即易形成血栓。組織工程血管（TEBVS）是研究的方向之一，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCS）是重要的種子細(xì)胞來源。目前TEBVS研究的瓶頸是種子細(xì)胞在體內(nèi)流體切應(yīng)力作用下粘附和功能不理想，容易出現(xiàn)細(xì)胞凋亡、脫落，使移植失敗，但是目前尚沒有流體切應(yīng)力對TEBVS種子細(xì)胞BMSCS活性功能影響的研究報(bào)道。因此研究流體切應(yīng)力對TEBVS種子細(xì)胞BMSCS生物學(xué)功能的影響及其分子機(jī)制，對TEBVS構(gòu)建具有重要的意義。目的1研究出切應(yīng)力對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、凋亡及活性的影響。2明確在流體切應(yīng)力對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能活性影響的關(guān)鍵蛋白質(zhì)和相關(guān)基因，找到改進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能的基因靶點(diǎn)。3研究出流體切應(yīng)力對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能活性影響的分子機(jī)制，為改進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為TEBVS種子細(xì)胞的功能奠定基礎(chǔ)。方法1采用傳統(tǒng)的梯度離心法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（HBMSCS），經(jīng)流式細(xì)胞儀進(jìn)行表面特征CD分子鑒定，并將其誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，并采用骨鈣素免疫組化染色和油紅O染色進(jìn)行鑒定。2對第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分別給予3、10和30DYNECM2的流體切應(yīng)力2H，6H，24H，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)法測定細(xì)胞增殖曲線，應(yīng)用流式細(xì)胞儀觀察增殖及凋亡，檢測CASPASE3活性和HBMSCS釋放的LDH活性。3對給予3DYNECM2切應(yīng)力6H的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的蛋白質(zhì)采用二維凝膠電泳，以靜態(tài)培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為對照，將發(fā)生差異的蛋白質(zhì)予以質(zhì)譜分析，同時(shí)用免疫熒光染色和WESTERNBLOTTING的方法進(jìn)一步驗(yàn)證。4將3DYNECM2切應(yīng)力作用6H后的HBMSCS為實(shí)驗(yàn)組，以靜態(tài)培養(yǎng)的HBMSCS為對照組，通過黏附基因芯片采用OLIGOGEARRAY基因芯片實(shí)驗(yàn)方法和通過凋亡基因芯片采用OLIGOGEARRAY基因芯片實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行對照研究，并應(yīng)用RTPCR驗(yàn)證基因芯片結(jié)果，以尋找切應(yīng)力下HBMSCS變化的關(guān)鍵基因。5對HBMSCS施加不同流體切應(yīng)力，觀察細(xì)胞增殖、凋亡和活性功能同時(shí)，針對切應(yīng)力下HBMSCS凋亡信號傳導(dǎo)通路中關(guān)鍵基因應(yīng)用外源性抑制劑重組基因CIAP1干預(yù)和CIAP1拮抗劑DIABLO反向干預(yù)，研究切應(yīng)力下影響HBMSCS活性功能的機(jī)制。結(jié)果1所獲得的細(xì)胞符合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特征，HBMSCS的表面抗原分子CD29和CD105陽性，CD45、CD34和CD14均為陰性。骨鈣素免疫組化染色和油紅O染色均呈陽性，可證明能夠定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。23DYNECM2切應(yīng)力下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞2H和6H時(shí)，細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化，G2S期的細(xì)胞百分比顯著增高，HBMSCS發(fā)生凋亡壞死顯著。而3DYNECM2切應(yīng)力和10DYNECM2切應(yīng)力作用24H時(shí)，可見平板流動腔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量減少，30DYNECM2切應(yīng)力作用下，細(xì)胞發(fā)生顯著脫落，作用時(shí)間越長細(xì)胞脫落越顯著，HBMSCS在各組切應(yīng)力作用6H時(shí)即發(fā)生顯著的凋亡、壞死。各切應(yīng)力作用2H時(shí)和3DYNECM2切應(yīng)力作用6H時(shí)HBMSCS中CASPASE3活性活性和LDH活性均未發(fā)生顯著變化；在10DYNECM2切應(yīng)力及30DYNECM2切應(yīng)力作用6H時(shí)，HBMSCS的CASPASE3活性和LDH活性顯著增加。3蛋白組學(xué)研究成功鑒定出切應(yīng)力作用于HBMSCS后差異蛋白質(zhì)點(diǎn)32個(gè)，其中蛋白質(zhì)表達(dá)顯著上調(diào)有10種，蛋白質(zhì)表達(dá)顯著下調(diào)有3種。其中經(jīng)免疫熒光染色和WESTERNBLOTTING顯示GAPDH和ANNEXINA2表達(dá)確實(shí)顯著上調(diào)。4通過對3DYNECM2切應(yīng)力作用6H后的HBMSCS基因芯片研究結(jié)果顯示，有6種在切應(yīng)力作用下顯著變化的黏附基因，其中4種基因表達(dá)上調(diào)超過2倍，分別為ECM1、ICAM1、CSPG7、TIMP2；2種基因表達(dá)下調(diào)超過2倍，分別為LAMA4和VCAM1。同時(shí)有5種在切應(yīng)力作用下顯著變化的凋亡基因，其中有2種表達(dá)顯著上調(diào)超過2倍的凋亡基因分別為APAF1和BOK。對基因芯片發(fā)現(xiàn)的6種顯著變化的粘附基因和5種顯著變化的凋亡基因進(jìn)行了RTPCR檢測，顯示基因ECM1、ICAM1、CSPG7、TIMP2顯著增高（P＜0001和P＜001），而基因LAMA4和VCAM1顯著降低（P＜0001），基因APAF1和BOK顯著增高（P＜0001和P＜001），從而驗(yàn)證了基因芯片的準(zhǔn)確性。3DYNECM2切應(yīng)力作用2H后，HBMSCSCIAP1水平升高（P＜005），但30DYNECM2切應(yīng)力作用后HBMSCSCIAP1水平均降低（P＜005）。5應(yīng)用CASPASE抑制劑外源性重組CIAP1干預(yù)CASPASE3的活性和LDH活性均降低，HBMSCS的凋亡減少，細(xì)胞增殖增加。加入CIAP1抑制劑DIABLO反向干預(yù)后，CASPASE3活性和LDH活性增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡顯著增加。結(jié)論1首先研究發(fā)現(xiàn)低切應(yīng)力（3DYNECM2）作用較短時(shí)間（≤6H）時(shí)可促進(jìn)HBMSCS增殖，HBMSCS未發(fā)生顯著凋亡，同時(shí)內(nèi)源性CIAP1上調(diào)；但在3DYNECM2作用12H和10DYNECM2以及30DYNECM2流體切應(yīng)力下6H時(shí)HBMSCS增殖受到抑制，細(xì)胞發(fā)生顯著凋亡壞死，活性功能明顯減低。切應(yīng)力越大細(xì)胞凋亡壞死越顯著。為HBMSCS種子細(xì)胞在體外應(yīng)用切應(yīng)力預(yù)適應(yīng)、改善種子細(xì)胞的活性功能打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。2蛋白質(zhì)組學(xué)研究和基因芯片的篩選，首先發(fā)現(xiàn)3DYNECM2的切應(yīng)力作用6H后HBMSCS細(xì)胞ANNEXINA2和GAPDH表達(dá)顯著上調(diào)，有6種粘附相關(guān)基因及5種凋亡相關(guān)基因發(fā)生顯著變化，其中凋亡相關(guān)基因APAF1和BOK在切應(yīng)力作用下顯著增強(qiáng)，顯示HBMSCS在切應(yīng)力作用下凋亡與APAF1、BOK和CASPASE凋亡基因的啟動相關(guān)。為進(jìn)一步改進(jìn)種子細(xì)胞功能提供了基因靶點(diǎn)。3應(yīng)用CASPASE9抑制劑干預(yù)可降低CASPASE3的活性和LDH活性，減少HBMSCS的凋亡，細(xì)胞增殖增加；加入CIAP1拮抗劑反向干預(yù)后CASPASE3活性和LDH活性增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡顯著增加。從而首先實(shí)驗(yàn)證實(shí)HBMSCS在切應(yīng)力作用下是通過激活了凋亡信號通路機(jī)制導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，出現(xiàn)HBMSCS活性功能下降。4首先應(yīng)用外源性重組CIAP1干預(yù)可以實(shí)現(xiàn)抑制CASPASE3的活性和LDH活性，減少HBMSCS在切應(yīng)力作用下的凋亡，使細(xì)胞增殖和活性增加。提示在基因水平對HBMSCS凋亡信號通路靶點(diǎn)（CASPASE）進(jìn)行干預(yù)，可作為延遲種子細(xì)胞HBMSCS凋亡和改進(jìn)種子細(xì)胞功能的一種手段，為TEBVS的研究提供一個(gè)有重要意義的新思路。

簡介：癌癥的致命性不僅歸咎于原發(fā)性腫瘤，而更因?yàn)檗D(zhuǎn)移的發(fā)生。目前針對晚期患者的治療并不十分有效，至多能略微延長存活期。為了顯著降低癌癥的死亡率，有必要研發(fā)新的、同時(shí)針對原發(fā)和轉(zhuǎn)移腫瘤抗癌療法。旨在建立這樣一種抗癌機(jī)制，本項(xiàng)目推薦將OLA1OBGLIKEATPASE，一個(gè)我們近年來發(fā)現(xiàn)并致力研究的細(xì)胞應(yīng)激蛋白，作為新的藥物靶點(diǎn)。OLA1是普遍表達(dá)于細(xì)胞漿中的屬于OBG家族的ATP水解酶ATPASE。OBG族類的ATPASE在進(jìn)化中高度保守，見于從細(xì)菌到人的所有生物中，它們的具體生物學(xué)功用卻鮮為人知。在現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料中除了本研究小組發(fā)表的論文外，只有個(gè)別的針對人類OLA1的研究。我們于2009年首先闡明OLA1是一個(gè)與氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)的內(nèi)源性負(fù)性調(diào)控因子。用RNA干擾技術(shù)降低OLA1的表達(dá)KNOCKDOWN，細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)會由于一些轉(zhuǎn)錄后的機(jī)理被加強(qiáng)。隨后我們又發(fā)現(xiàn)，如果腫瘤細(xì)胞的OLA1被KNOCKDOWN，它們的體外遷移和侵入性能即會被顯著削弱。由此我們設(shè)想，是否可以應(yīng)用下調(diào)OLA1所產(chǎn)生的有利效應(yīng)，研討針對OLA1設(shè)計(jì)抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療的可行性。因?yàn)榛蛱蕹齂NOCKOUT小鼠是現(xiàn)今研究基因體內(nèi)功能最為可靠的動物模型。并且在藥物靶鑒定TARGETVALIDATION的領(lǐng)域中，分析KNOCKOUT小鼠的表型是為模擬該藥物靶被完全抑制后全身反應(yīng)包括正性的期望療效和負(fù)性的毒性作用的首選程序，我們在本項(xiàng)目中引進(jìn)了KNOCKOUT小鼠模型，并對其開展了表型研究。這是本項(xiàng)目的設(shè)計(jì)思路之一。本項(xiàng)目的另外一個(gè)重要目的是要進(jìn)一步闡明OLA1作用的分子生物學(xué)機(jī)理。雖然我們的前期研究指向OLA1對細(xì)胞氧化還原平衡REDOXEQUILIBRIUM的影響，但是沒有找到它作用的代謝通道PATHWAY。我們意外地發(fā)現(xiàn)，OLA1可能是一種特殊的蛋白質(zhì)翻譯后修飾機(jī)制PTM的調(diào)節(jié)因子，它負(fù)性地調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)S谷胱甘肽修飾SGLUTATHIONYLATION。SGLUTATHIONYLATION是蛋白質(zhì)中半胱氨酸上的巰基SH與胞漿中氧化型谷胱甘肽GSH通過巰基硫醚交換形成的混合型二硫鍵PSSG，可逆性地發(fā)生于高氧脅迫OXIDATIVESTRESS狀態(tài)并存在于非脅迫的基線狀態(tài)。SGLUTATHIONYLATION與另一種著名的PMT，蛋白質(zhì)磷酸化PROTEINPHOSPHYLATION在原理上很相象，有人推斷，SGLUTATHIONYLATION是與蛋白質(zhì)磷酸化平行，并交互影響的一種重要的蛋白質(zhì)活性調(diào)控和信號傳導(dǎo)機(jī)制。但是由于缺乏對該通道上游調(diào)控因子的定位分析，該領(lǐng)域只限制于小規(guī)模的研究，未得到應(yīng)有的重視。我們認(rèn)為，如果OLA1對SGLUTATHIONYLATION的調(diào)節(jié)功能能被肯定，其結(jié)果將不僅有助于演繹OLA1的應(yīng)用價(jià)值，比如作為抗腫瘤的藥物靶，而且將促進(jìn)有關(guān)PTM基本生物學(xué)現(xiàn)象的基礎(chǔ)研究。因此，沿著這一研究方向，進(jìn)行了細(xì)致的分子生物學(xué)論證。本研究主要內(nèi)容包括⑴體內(nèi)OLA1KNOCKOUT研究為了深入闡明OLA1的體內(nèi)生物學(xué)功能，我們建立了一株KNOCKOUT小鼠，其中的OLA1基因因被逆病毒載體的插入而滅活。發(fā)現(xiàn)～85％的純合子小鼠在圍產(chǎn)期階段死亡。但是幸存的小鼠可以到成年，沒有表現(xiàn)顯著的健康問題，但是個(gè)體比野生型和雜合型小鼠持續(xù)小2030％。胚胎研究發(fā)現(xiàn)，這一生長遲緩現(xiàn)象最早發(fā)生于胚胎發(fā)育的第105天，圍產(chǎn)期死亡的原因是肺部發(fā)育不全。我們采取了小鼠胚胎纖維母細(xì)胞MEF進(jìn)行體外原代培養(yǎng)，也發(fā)現(xiàn)MEF有生長減緩和細(xì)胞周期阻滯。這些結(jié)果表明OLA1是維持體內(nèi)細(xì)胞產(chǎn)前產(chǎn)后正常生長的重要基因。但是OLA1的整體缺失，并不造成發(fā)育缺陷和幸存成年鼠的健康問題。⑵OLA1作為抗腫瘤藥物靶的體外研究我們既往的研究發(fā)現(xiàn)，OLA1的KNOCKDOWN會造成體外培養(yǎng)的人乳癌細(xì)胞MDAMB231的遷移和侵入滯緩。在本研究中，我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，OLA1KNOCKDOWN導(dǎo)致乳癌細(xì)胞對ANOIKIS貼附失缺性調(diào)亡的敏感性顯著增高。最后，應(yīng)用穩(wěn)定性RNA干擾技術(shù)，我們證實(shí)OLA1KNOCKDOWN會造成MDAMB231穩(wěn)定細(xì)胞株的生長速度減緩，與上述體內(nèi)的KNOCKOUT結(jié)果對應(yīng)一致。綜合我們既往的和現(xiàn)在的發(fā)現(xiàn)，對OLA1的靶向滅活至少會獲得如下4項(xiàng)對抑制腫瘤惡性表型有利的效果1↓腫瘤細(xì)胞生長，2↓遷移，3↓侵入，以及4↑ANOIKIS。因此我們推薦OLA1可作為抗腫瘤或抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物靶，進(jìn)入下一階段的體內(nèi)TARGETVALIDATION的研究。⑶OLA1作為SGLUTATHIONYLATION調(diào)節(jié)因子的分子機(jī)理研究應(yīng)用針對PSSG的特殊WESTERNBLOT和SLOTBLOT技術(shù)，發(fā)現(xiàn)，在OLA1KNOCKDOWN的多種體外培養(yǎng)人類細(xì)胞中，細(xì)胞骨架蛋白ACTIN和諸多其他蛋白具有顯著增高的基線水平PSSG。OLA1水平與整體GLOBEPSSG的負(fù)相關(guān)性也顯現(xiàn)于經(jīng)受氧化劑刺激雙氧水和巰基氧化劑DIAE的細(xì)胞中。這一規(guī)律也在原代培養(yǎng)的剛從體內(nèi)制備的OLA1MEF中被證實(shí)。我們推斷，OLA1對SGLUTATHIONYLATION調(diào)節(jié)功能是通過其調(diào)控直接參與SGLUTATHIONYLATION加成的酶類比如GSTΠ谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶的穩(wěn)定性。OLA1與GSTΠ的結(jié)合反應(yīng)也已被初步證實(shí)。根據(jù)這些結(jié)果，我們提出OLA1其實(shí)是先前尚未發(fā)現(xiàn)的SGLUTATHIONYLATION上游調(diào)控因子之一。本研究的結(jié)論與創(chuàng)新①本研究發(fā)現(xiàn)OLA1，一個(gè)首先由我們發(fā)現(xiàn)的新的氧化應(yīng)激反應(yīng)因子，是哺乳動物體內(nèi)一個(gè)重要的與維持生長有關(guān)的基因。②OLA1參與調(diào)節(jié)重要的基本生物學(xué)過程，包括SGLUTATHIONYLATION，一個(gè)重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾和信號傳導(dǎo)通道。這些發(fā)現(xiàn)有助于今后建立靶向OLA1的獨(dú)特的抗腫瘤抗轉(zhuǎn)移新藥，并增進(jìn)人們對一些基本生物學(xué)現(xiàn)象，比如PTM的知識。③OLA1是一個(gè)有繼續(xù)研發(fā)價(jià)值的抗腫瘤或抗腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物靶。