簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書(shū)而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名扯壑盞ET期知2臣互。仝一蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明『IIIII／111IIIIIIIJILLLJIJ刪Y1732249本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書(shū)館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤(pán)版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年_月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名地盜一日期澀紐L立L導(dǎo)師簽名皇啦日期叫

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多重癥病毒性肝炎凋亡相關(guān)分子Fas,TNFR1miRNA腺病毒載體的構(gòu)建及其體外干預(yù)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的研究HBSAG陰性慢性乙型病毒性肝炎患者的臨床、病理特點(diǎn)，探討其在不明原因肝病中的發(fā)病情況及意義，與慢性肝炎、肝硬化的關(guān)系，HBV標(biāo)志物特點(diǎn)以及病情進(jìn)展、預(yù)后判斷、檢測(cè)和診斷方法等。方法對(duì)62例HBSAG陰性不明原因反復(fù)肝功能異常的慢性肝炎患者進(jìn)行HBV標(biāo)志物檢測(cè)，同時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)血清HBVDNA水平，并排除其它嗜肝病毒HAV、HEV、HCV、HDV、CMV、EBV等感染及其它原因肝損。進(jìn)一步以巢式PCR的方法檢測(cè)患者血清HBVDNA，并在B超引導(dǎo)下行肝組織活檢，免疫組化檢測(cè)肝組織中HBSAG、HBCAG，陽(yáng)性者診斷為HBSAG陰性慢性乙型病毒性肝炎。設(shè)肝功能正常乙肝表面抗原陰性的25例血清作對(duì)照。結(jié)果62例HBSAG陰性不明原因肝炎患者中血清HBVDNA陽(yáng)性11例，其中2例熒光定量PCR陽(yáng)性（262），9例巢式PCR陽(yáng)性（960），陽(yáng)性率1774％（1162），肝組織病理及免疫組化亦證實(shí)為慢性乙型病毒性肝炎。對(duì)照組2例陽(yáng)性（225，8％），兩組對(duì)比P＜005。HBSAG陰性慢性乙型病毒性肝炎患者的臨床表現(xiàn)無(wú)明顯特異性，主要為乏力、腿酸、肝區(qū)不適等。其中慢性肝炎輕度2例，中度3例，重度2例，重癥肝炎1例，肝硬化代償或失代償3例，病情進(jìn)展隱匿，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特殊的規(guī)律性。HBVDNA陽(yáng)性率在HBCAB陽(yáng)性或和HBEAB陽(yáng)性者中相對(duì)比較高；肝組織病理改變程度似較臨床診斷嚴(yán)重，臨床診斷與病理診斷有一定差異；病理表現(xiàn)以慢性肝細(xì)胞損傷為主，并有不同程度纖維化。結(jié)論HBSAG陰性慢性HBV感染是不明原因肝病的主要原因之一。HBV標(biāo)志物全陰性亦不能完全排除乙型病毒性肝炎；其臨床表現(xiàn)無(wú)特異性；與重型肝炎尤其肝硬化存在一定的關(guān)系；病情進(jìn)展缺少規(guī)律性，多表現(xiàn)隱匿，但存在慢性進(jìn)展傾向；病理組織學(xué)改變較臨床改變嚴(yán)重。

簡(jiǎn)介：廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文共表達(dá)人NK4、B71復(fù)制缺陷型重組腺病毒的制備及體外功能鑒定姓名石慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師陳德基20070525廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文共表達(dá)人NK4，B71復(fù)制缺陷型霞組腺病毒的制備及體外功能鑒定共表達(dá)人NK4、B7一L復(fù)制缺陷型重組腺病毒的制備及體外功能鑒定中文摘要研究背景原發(fā)性肝癌的基因治療是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)，但目前基因治療臨床療效遠(yuǎn)不如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。造成這一區(qū)別的主要原因在于腫瘤是一個(gè)多因素、多環(huán)節(jié)、多階段的復(fù)雜疾病，單一因素的糾正往往不能達(dá)到理想的抑制腫瘤效應(yīng)。旨在抑制腫瘤血管及增強(qiáng)機(jī)體腫瘤免疫的兩種單一療法的聯(lián)合是增強(qiáng)基因治療效果的新策略。B71作為共刺激因子對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤特異性CTL具有十分重要的作用。NK4是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子HGF的拮抗劑及強(qiáng)有力的腫瘤血管生成抑制劑。本研究擬將NK4基因及B71基因亞克隆至同一腺病毒載體，使之在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)激活產(chǎn)生更強(qiáng)的CTLS，從而發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)，并為下一步利用該載體進(jìn)行肝癌的復(fù)合基因治療奠定基礎(chǔ)。方法1、雙酶切PCDNA3／HNK4質(zhì)粒獲得NK4基因編碼區(qū)序列及設(shè)計(jì)雙引物PCR擴(kuò)增獲得B71基因編碼區(qū)序列及CMVPA片斷后，通過(guò)亞克隆技術(shù)構(gòu)建重組穿梭載體PADTRACK刪V／B7L倆VPA／NK4。雙酶切法及DNA測(cè)序鑒定重組載體的正確性。2、利用基因重組技術(shù)構(gòu)建含NK4及B71雙基因的重組腺病毒質(zhì)粒載體PADB7一1NK4。酶切法將PADB7INK4線(xiàn)性化，脂質(zhì)體介導(dǎo)下將其轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞HEK293細(xì)胞，獲得共表達(dá)人NK4及B71基因的重組包裝病毒。PCR雙引物法鑒定重組包裝病毒是否帶有NK4及B71基因編碼區(qū)序列。3、用病毒懸液感染人肝癌細(xì)胞株TLEPG2，RTPCR法檢鍘感染腫瘤細(xì)胞中NK4及B71M剛A表達(dá)。2

簡(jiǎn)介：青島大學(xué)碩士學(xué)位論文TRAIL慢病毒載體構(gòu)建及其在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)姓名欒坤業(yè)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)肝膽血管外科指導(dǎo)教師張炳遠(yuǎn)；孫偉東20120518CONSTRUCTIONOFLENTIVIRALVECTORCARRYINGTRAILGENEANDITSEXPRESSIONINHEPATOCARCINOMACELLSABSTRACTOBJECTIVETOCONSTRUCTLENTIVIRALEXPRESSIONVECTORCARRYINGTRAILGENEANDREALIZEITSSTABLEHIGHEXPRESSIONINHEPATOCELLULARCARCINOMACELLLINEHEPG2．TODETECTTHEPROLIFERATIONOFHEPG2ANDOBSERVETHEGROWTHOFTRAILHI曲LYEXPRESSEDINHEPG2INMICE．METHODS1．PCRANDDOUBLEDIGESTIONWERECARRIEDOUTTOCONSTRUCTRECOMBINANTLENTIVIRALVECTORPCDHCMVTRAILEFL一GFPT2APURO；2．THE293TCELLSWERECONTRANSFECTEDWITHTHERECOMBINANTLENTIVIRALVECTORANDLCNTIVIRUSPACKAGEPLASMIDTOPRODUCELENTIVIRALPARTICLESBYLIPOFECTAMINEMETHOD．NELENTIVIRUSWASPURIFIEDANDVIRUSTITERWASMEASURED；3．WESTERNBLOTTINGWASUSEDTODETECTTHEEXPRESSIONSOFTRAILPROTEIN；4．MTTASSAYWASUSEDTODETERMINECELLSPROLIFERATION；5．TODETECTTHEGROWTHOFHEPG2CELLSBYNUDEMICEEXPERIMENTINVIVO．RESULTSTHERECOMBINANTLENTIVIRALVECTORCARRYINGTRAILWASCONFIRMEDBYRESTRICTIONENDNUCLEASEANALYSISANDDNASEQUENCING．VIRUSTITERREACHEDTO1．02XLOIFWITL，ANDFOUNDTHATTHATTHERECOMBINANT1ENTIVIRALTRANSFECTEDEFFICIENTINVITROWHENMOI8．AFTERPUROMYCINSELECTIONANDMONOCLONY,THESTABLEHI．GHEXPRESSIONSOFTRAILPROTEINWERECONFIRMEDBYWESTERNBLOTTING．TODETECTEDTHECELLPROLIFERATIONACTIVITYBYM訂ASSAY,WEFOUNDTHATHEPG2WITHSTABLEHIGHEXPRESSIONSOFTRAILPROTEINWASSIGNIFICANTLYLOWERTHANINHEPG2ANDHEPG2一CONGROUPP0．05．THETUMORVOLUMEOFHEPG2TRAIL一1WASSIGNIFICANTDIFFERENCESCOMPAREDWITHOTHERGROUPSBYNUDEMICEEXPERIMENTINVIVOPO．01．CONCLUSIONLENTIVIRALVECTORCARRYINGTRAILGENEHASBEENSUCCESSFULLYCONSTRUCTEDANDREALIZESITSSTABLEHIGHEXPRESSIONINHEPG2CELLS．ITHASPROVEDTHATTRAILGENECANINHIBITTUMORCELLGROWTHBYLIVERCANCERCELLSANDNUDEMICEEXPRERIMENTS．

簡(jiǎn)介：目的觀(guān)察加味溫膽湯治療病毒性肝炎高膽紅素血癥HYPERBILIRUBINEMIA的臨床療效，并從臨床研究和理論兩個(gè)方面探討加味溫膽湯的治療機(jī)制。方法1全部資料均為2006年3月到2007年12月湖北省中醫(yī)院肝病科門(mén)診及住院患者。所有病例均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)2000年聯(lián)合修訂的病毒性肝炎防治方案及國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2002年頒布的中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則。入組80例，隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組各40例。兩組患者在年齡、性別、西醫(yī)診斷、病原學(xué)診斷等各方面無(wú)明顯差異，具有可比性P005。2對(duì)照組給予西藥常規(guī)治療甘利欣150MGD，門(mén)冬氨酸鉀鎂20MLD，維生素K120MGD，及對(duì)癥支持治療。治療組在對(duì)照組西藥及對(duì)癥支持治療的基礎(chǔ)上加用中藥加味溫膽湯法夏，竹茹，炒枳實(shí)，陳皮，生甘草各10G，茯苓15G，丹參20G，赤芍30G，加水煎至250ML日一劑，分兩次口服。兩組療程均為30天兩組患者在治療期間均不服用除上述藥物外其它藥物。3治療前后觀(guān)察一般體格檢查項(xiàng)目如T、P、R、BP、血常規(guī)、尿常規(guī)、糞常規(guī)及隱血、腎功能、心電圖及不良反應(yīng)，作出安全性評(píng)價(jià)；治療前后各記錄一次臨床癥狀，血清TBIL、ALT、ALB，根據(jù)相應(yīng)診療標(biāo)準(zhǔn)，作出療效評(píng)價(jià)。結(jié)果1總療效分析治療組40例，顯效21例，有效13例，無(wú)效6例，總有效率8500％；對(duì)照組40例，顯效11例，有效12例，無(wú)效17例，總有效率5750％。兩組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，治療組總有效率優(yōu)于對(duì)照組總有效率P005，治療后兩組患者臨床癥狀總積分較治療前均有顯著性差異P005；②兩組治療后TBIL、ALT、ALB較治療前比較有明顯差異P005。表明兩組均能明顯改善患者的肝功能，降低TBIL、ALT，升高ALB；治療組在降低患者的TBIL方面療效優(yōu)于對(duì)照組；但在降低ALT、升高ALB方面，兩組療效相似。4改善癥狀療效分析①兩組治療前各臨床癥狀積分比較無(wú)顯著性差異P005；②兩組治療后各臨床癥狀積分較治療前比較有顯著性差異P005。5安全性比較治療組與對(duì)照組治療后血常規(guī)、尿常規(guī)、糞常規(guī)、腎功能、心電圖檢測(cè)均無(wú)明顯異常變化。兩組治療過(guò)程中均未見(jiàn)不良反應(yīng)表明加味溫膽湯聯(lián)合西藥治療病毒性肝炎高膽紅素血癥安全、有效，無(wú)毒副作用。結(jié)論通過(guò)本課題臨床研究表明，加味溫膽湯聯(lián)合西藥治療病毒性肝炎高膽紅素血癥肝膽濕熱型的療效優(yōu)于單純運(yùn)用西藥治療本病。其機(jī)理可能與以下幾方面有關(guān)1保護(hù)肝細(xì)胞；2改善肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的結(jié)合和排泄障礙；3改善膽汁的排泄障礙。因此，我們要發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)，更好的進(jìn)行中西醫(yī)結(jié)合治療，提高病毒性肝炎高膽紅素血癥的治療效果，以促進(jìn)中醫(yī)藥學(xué)術(shù)水平的發(fā)展，更有效地解除廣大患者的痛苦。

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文從真理的累積到認(rèn)知價(jià)值的理想淺談科學(xué)發(fā)展模式理論及其價(jià)值標(biāo)準(zhǔn)的演變姓名李璇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)外國(guó)哲學(xué)指導(dǎo)教師劉杰20080920山東大學(xué)碩士學(xué)位論文理性、價(jià)值、可操作性三者之間進(jìn)行綜合的考量，而后再對(duì)科學(xué)的進(jìn)步特征做出論述，走向任何一個(gè)極端都是有問(wèn)題的。勞丹的科學(xué)發(fā)展模式理論及其對(duì)科學(xué)與價(jià)值的看法，正好位于這樣一個(gè)中間區(qū)域，如果排除對(duì)其正確性的單純判斷，我認(rèn)為勞丹的理論是極具肩發(fā)性的，當(dāng)然對(duì)于這樣一個(gè)中間區(qū)域的認(rèn)同，也是筆者所力圖表達(dá)的最終結(jié)論?！娟P(guān)鍵詞】科學(xué)；科學(xué)發(fā)展模式；累積主義；否證豐義；合理性；歷史豐義；相對(duì)豐義；價(jià)值；終極價(jià)值。2

簡(jiǎn)介：傳統(tǒng)中醫(yī)藥是一個(gè)偉大的寶庫(kù)，是中華民族傳統(tǒng)文化瑰寶之一。幾千年來(lái)為中華民族的繁衍生息繁榮富強(qiáng)作出了不可磨滅的貢獻(xiàn)。有人認(rèn)為中醫(yī)藥只能用于一些簡(jiǎn)單常見(jiàn)病，不可用于突發(fā)病、危難病癥。但是事實(shí)證明中醫(yī)藥不僅可以治療疑難病癥，還可用于突發(fā)病，比如癌癥，傳染病非典就是一個(gè)很好的例子?，F(xiàn)在，以中醫(yī)藥聯(lián)合西方醫(yī)藥在治療某些疾病方面，取得了較為滿(mǎn)意的治療效果。同時(shí)，中醫(yī)藥對(duì)流感病毒的預(yù)防與治療、腫瘤的治療等方面，已經(jīng)取得了很大進(jìn)步與提高。目前，中醫(yī)藥學(xué)與西方醫(yī)學(xué)不斷融合借鑒，從而互相補(bǔ)充，共同發(fā)展。在中醫(yī)藥的現(xiàn)代研究中，充分采用現(xiàn)代科學(xué)研究方法，并充分吸收現(xiàn)代科學(xué)研究成果，是實(shí)驗(yàn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化的有效途徑之一。民族醫(yī)藥是傳統(tǒng)中醫(yī)藥中的一朵奇葩。它有許多世代相傳的單方與復(fù)方，且療效顯著?？墒?，它們沒(méi)有記載于書(shū)，只是靠民間醫(yī)生傳遞那些知識(shí)。在以經(jīng)濟(jì)建設(shè)為中心的現(xiàn)代生活與西方醫(yī)學(xué)的沖擊下，如果不保護(hù)這片文化凈土，它們將很快消失，因此對(duì)民族醫(yī)學(xué)的整理與開(kāi)發(fā)是十分急迫的?；谏鲜鲇^(guān)點(diǎn)，本課題研究國(guó)家名中醫(yī)長(zhǎng)期應(yīng)用的民間經(jīng)驗(yàn)方，即在具有地方特色與民族特色的苗藥米槁的果實(shí)大果木姜子的基礎(chǔ)上，按照中醫(yī)方劑配伍原則，配以傳統(tǒng)中草藥紫草而成。本文在前期研究基礎(chǔ)上，以軟膠囊為劑型，對(duì)其提取工藝、制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、初步穩(wěn)定進(jìn)行系統(tǒng)研究，并擬定了紫槁軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在此基礎(chǔ)上研究了紫槁軟膠囊含藥血清抗甲型流感病毒京科－68及對(duì)人鱗狀喉癌細(xì)胞（HEP2）的作用。方法采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法篩選最佳的提取工藝及其條件；采用壓制法制備軟膠囊，研究其制備工藝條件；用氣相色譜法（GC）對(duì)大果木姜子、紫槁軟膠囊中的桉葉素進(jìn)行質(zhì)量控制，用高效液相法（HPLC）對(duì)紫草油提物及紫槁軟膠囊中左旋紫草素進(jìn)行控制，建立紫槁軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；按中華人民共和國(guó)藥典2005年版二部附錄XIXC“藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則”有關(guān)要求和國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)試行中相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。采用中藥血清藥理學(xué)方法結(jié)合組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究其含藥血清的抗病毒抗腫瘤作用。結(jié)果用水蒸氣蒸餾法提取大果木姜子油的最佳條件為大果木姜子初粉加8倍量的水，浸泡15H，提取8H；采用較為成熟的工藝制備軟膠囊；用薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相對(duì)軟膠囊中的有效成分18桉葉素和紫草素進(jìn)行定性定量控制，并初步探索制定出紫槁軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案；紫槁軟膠囊在常溫留樣試驗(yàn)和溫度為40±2℃、相對(duì)濕度為75±5％的加速試驗(yàn)的條件下，質(zhì)量穩(wěn)定。中、高劑量組含藥血清與空白組相比，對(duì)甲型流感病毒京科－68在MDCK細(xì)胞中的生物合成及抗吸附MDCK細(xì)胞有顯著作用；對(duì)人喉癌細(xì)胞（HEP2）生長(zhǎng)有明現(xiàn)的抑制作用。結(jié)論優(yōu)選得到的提取工藝穩(wěn)定可行；制備工藝穩(wěn)定，符合軟膠囊的質(zhì)量要求，可用于紫槁軟膠囊的制備；質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可以控制紫槁軟膠囊的質(zhì)量；穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，紫槁軟膠囊的有效期可暫定為15年。藥理實(shí)驗(yàn)表明紫槁軟膠囊具有明顯的抗甲型流感病毒京科－68生物合成與抑制人鱗狀喉癌（HEP2）細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。本研究將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的血清藥理PHARMACOLOGY方法及組織細(xì)胞培養(yǎng)TISSUECULTURE技術(shù)應(yīng)用于新藥藥效POTENCY研究中，提高力新藥開(kāi)發(fā)的成功率SUCCESSRATES，為中藥復(fù)方藥理研究方法提供了新探討。但紫槁軟膠囊抗病毒抑制腫瘤的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒（HBV）感染會(huì)導(dǎo)致慢性乙型肝炎CHB的發(fā)生，同時(shí)也是引起肝硬化、肝細(xì)胞癌的重要相關(guān)因素。據(jù)流行病學(xué)資料顯示，全世界有20多億人為HBV病毒感染者，其中約有4億人為慢性感染者。估計(jì)，每年超過(guò)50萬(wàn)人死于HBV感染所導(dǎo)致的肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌。中國(guó)是HBV感染的高發(fā)地區(qū)，約有10％的人口為HBV攜帶者，HBV感染帶來(lái)的健康和經(jīng)濟(jì)問(wèn)題已成為憂(yōu)國(guó)憂(yōu)民的難題。20世紀(jì)90年代以來(lái)，重組干擾素及核苷類(lèi)似物藥物的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用，使CHB的治療取得了一定進(jìn)展，但是這些藥物存在不能完全清除病毒、易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用大及藥價(jià)昂貴等一系列問(wèn)題。因此，迫切需要尋求高效、安全、廉價(jià)的抗HBV藥物。近年來(lái)，中醫(yī)藥在治療HBV方面顯示出很大潛力。現(xiàn)已證明，一些中藥單體如青蒿素、苦參堿和苦參堿脂質(zhì)體、木香烯內(nèi)酯、珍珠草提取物鞣花酸及虎杖提取物白藜蘆醇等在體外試驗(yàn)中對(duì)乙肝病毒均有不同程度的抑制作用。黃芪為豆科多年生草本植物膜莢黃芪和蒙古黃芪的干燥根，含有多糖、黃酮、皂甙、氨基酸和十幾種微量元素等多種成份。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，黃芪中含有多種抗病毒成份。黃芪甲甙是黃芪皂甙類(lèi)有效單體成份，有抗炎、抗高血壓、糖尿病和抗病毒等廣泛的藥理作用。但其抗HBV作用的實(shí)驗(yàn)研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬通過(guò)觀(guān)察黃芪甲甙對(duì)體外HBV的作用，以期為黃芪甲甙的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究奠定基礎(chǔ)，也為我國(guó)抗HBV新藥研制提供一些思路。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)一HEPG2215細(xì)胞株的檢測(cè)，HBSAG和HBEAG檢測(cè)目的觀(guān)察HEPG2215細(xì)胞上清液中HBSAG和HBEAG的分泌。方法培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)ELISA試劑盒中陽(yáng)性對(duì)照劑為陽(yáng)性對(duì)照，含血清培養(yǎng)液為陰性對(duì)照，第10天、20天、30天的HEPG2215細(xì)胞培養(yǎng)上清液為實(shí)驗(yàn)組。使用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法）法檢測(cè)培養(yǎng)上清中的HBSAG或HBEAG，顯色反應(yīng)完成后選用450NM波長(zhǎng)在自動(dòng)酶標(biāo)儀上讀取各孔A值。結(jié)果HEPG2215細(xì)胞能穩(wěn)定地分泌HBSAG和HBEAG，且與時(shí)間成正相關(guān)。結(jié)論在本次實(shí)驗(yàn)，HEPG2215細(xì)胞分泌穩(wěn)定，是良好的體外模型。實(shí)驗(yàn)二黃芪甲甙體外抗乙型肝炎病毒的作用1、藥物對(duì)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)?zāi)康挠^(guān)察黃芪甲甙對(duì)HEPG2215細(xì)胞的毒性作用。方法用不同濃度黃芪甲甙培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)，設(shè)濃度為10MGL、50MGL和10MGL拉米夫定為陽(yáng)性對(duì)照組和僅加細(xì)胞培養(yǎng)液的陰性對(duì)照組。在第9天，用345二甲基噻唑225二苯基四氮唑溴鹽（MTT）比色法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。結(jié)果濃度為100MGL和50MGL的黃芪甲甙對(duì)HEPG2215細(xì)胞的抑制率分別為506％和351％TC50（半數(shù)毒性劑量）為974MGL。拉米夫定在10MGL～10MGL濃度對(duì)細(xì)胞的抑制率為105％～69％。結(jié)論黃芪甲甙對(duì)細(xì)胞的毒性作用非常小。拉米夫定在本實(shí)驗(yàn)濃度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)未見(jiàn)明顯毒性作用。2、HBSAG和HBEAG的測(cè)定目的探討黃芪甲甙對(duì)培養(yǎng)上清中HBSAG和HBEAG分泌的抑制作用。方法使用ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中的HBSAG或HBEAG。顯色反應(yīng)完成后選用450NM波長(zhǎng)在自動(dòng)酶標(biāo)儀上讀取各孔A值，計(jì)算抗原抑制率。結(jié)果不同濃度黃芪甲甙和拉米夫定對(duì)HBSAG和HBEAG分泌均有一定抑制作用，且隨劑量的增加，治療時(shí)間的延長(zhǎng)抑制作用也隨之增加。黃芪甲甙給藥6日，其HBSAG和HBEAG的50％抑制濃度（IC50）分別為535MGL和594MGL；給藥9日，其HBSAG和HBEAG的IC50分別為221MGL和262MGL。在第9日，黃芪甲甙的HBSAG和HBEAG治療指數(shù)（TI）分別為44和37。拉米夫定給藥6日，其HBSAG和HBEAG的抑制率分別為253％～35％和396％～36％；給藥9日，其HBSAG和HBEAG的抑制率分別為352％～27％和43％～42％。結(jié)論黃芪甲甙和拉米夫定對(duì)培養(yǎng)上清中HBSAG和HBEAG的分泌均有一定的抑制作用，且與劑量時(shí)間成正相關(guān)。3、HBVDNA的檢測(cè)目的探討黃芪甲甙對(duì)培養(yǎng)上清中HBVDNA分泌的作用。方法采用熒光定量PCR法分析黃芪甲甙對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBVDNA含量的影響。結(jié)果黃芪甲甙和拉米夫定均有一定程度的抗HBVDNA的作用。黃芪甲甙給藥6日，其HBVDNA的IC50為399MGL；給藥9日其HBVDNA的IC50為132MGL，TI為74。拉米夫定給藥6日，其HBVDNA的抑制率為364％～34％；給藥9日其HBVDNA的抑制率為495％～58％。結(jié)論黃芪甲甙和拉米夫定體外對(duì)HBVDNA均有一定的抑制作用。

簡(jiǎn)介：目的體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞RBMSCS，ADVEGFPCT1（重組心肌營(yíng)養(yǎng)素1腺病毒）轉(zhuǎn)染RBMSCS，觀(guān)察CT1對(duì)RBMSCS向神經(jīng)方向分化的作用及對(duì)其存活的影響。方法1培養(yǎng)及鑒定RBMSCS全骨髓貼壁篩選法分離培養(yǎng)RBMSCS，流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記性蛋白。2ADVEGFPCT1轉(zhuǎn)染RBMSCS將ADVEGFPCT1分別以感染復(fù)數(shù)MOI為100、200、300、400PFU細(xì)胞轉(zhuǎn)染RBMSCS，于轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H、96H在熒光顯微鏡下觀(guān)察轉(zhuǎn)染率，流式細(xì)胞術(shù)鑒定其最佳MOI及最佳時(shí)間點(diǎn)（熒光顯微鏡下觀(guān)察所得）轉(zhuǎn)染率。同時(shí)于轉(zhuǎn)染后24H、48H、3D、10D應(yīng)用REALTIMEPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后RBMSCS表達(dá)CT1MRNA的情況、應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染后RBMSCS表達(dá)CT1目的蛋白的情況，確定CT1蛋白表達(dá)最強(qiáng)的時(shí)間點(diǎn)。3觀(guān)察CT1對(duì)RBMSCS向神經(jīng)方向分化的作用將RBMSCS分為以下4組對(duì)照組、ADVEGFP（重組腺病毒增強(qiáng)型綠色熒光蛋白）轉(zhuǎn)染組（ADVEGFP轉(zhuǎn)染RBMSCS，MOI為200PFU細(xì)胞）、ADVEGFPCT1轉(zhuǎn)染組ADVEGFPCT1轉(zhuǎn)染RBMSCS，MOI為200PFU細(xì)胞及誘導(dǎo)劑組。除對(duì)照組外，其他各組均予神經(jīng)分化誘導(dǎo)，于誘導(dǎo)后5H、3D、7D觀(guān)察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)各組NESTIN、NEUN、GFAP的表達(dá)。4觀(guān)察CT1對(duì)RBMSCS神經(jīng)分化過(guò)程中細(xì)胞存活的影響于誘導(dǎo)后5H、24H、48HDAPI染色法觀(guān)察凋亡細(xì)胞核形態(tài)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的早期凋亡率于誘導(dǎo)后5H、3D、7D臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞存活率。結(jié)果1RBMSCS的培養(yǎng)及鑒定。RBMSCS原代細(xì)胞7天左右可以傳代，第三代P3得到純化，流式細(xì)胞術(shù)鑒定CD29、CD90、CD45的陽(yáng)性率分別是9927％、9343％、146％。2ADVEGFPCT1的轉(zhuǎn)染率。其轉(zhuǎn)染率隨MOI及時(shí)間的改變而變化，MOI為200PFU細(xì)胞、轉(zhuǎn)染后48H達(dá)高峰轉(zhuǎn)染率為8705％±095％ADVEGFPCT1轉(zhuǎn)染RBMSCS后CT1MRNA的表達(dá)轉(zhuǎn)染后24HCT1MRNA的相對(duì)表達(dá)量42342±1161均高于其他時(shí)間點(diǎn)48H、3D、10D，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，48H、3D、10D之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005ADVEGFPCT1轉(zhuǎn)染RBMSCS后CT1目的蛋白的表達(dá)轉(zhuǎn)染后48H，CT1熒光強(qiáng)度達(dá)到最強(qiáng)1144±144，與24H相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，與3D、10D相比熒光強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。3CT1對(duì)RBMSCS向神經(jīng)方向分化的作用。誘導(dǎo)處理后，除對(duì)照組外，其他各組均顯示類(lèi)神經(jīng)細(xì)胞樣形態(tài)改變，其中CT1組此變化最明顯誘導(dǎo)后5HNESTIN的陽(yáng)性率最高，其中CT1組的陽(yáng)性率均高于其他各組（8631％±427％），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005誘導(dǎo)后5HCT1組NEUN、GFAP即有少量表達(dá)，隨后NEUN、GFAP陽(yáng)性率逐漸升高，至第7D時(shí)陽(yáng)性率最高，其中，CT1組各時(shí)間點(diǎn)NEUN、GFAP陽(yáng)性率均高于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。4CT1對(duì)RBMSCS神經(jīng)分化過(guò)程中細(xì)胞存活的影響。CT1組及對(duì)照組，細(xì)胞核大部分為淡藍(lán)色圓形或橢圓形，而空病毒組及誘導(dǎo)劑組出現(xiàn)較多凋亡細(xì)胞核誘導(dǎo)后各時(shí)間點(diǎn)，CT1組及對(duì)照組早期凋亡率較空病毒組及誘導(dǎo)劑組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005誘導(dǎo)后不同時(shí)間點(diǎn)，CT1組及對(duì)照組存活率均高于空病毒組及誘導(dǎo)劑組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。結(jié)論1全骨髓貼壁篩選法可以獲得純化的RBMSCS2ADVEGFPCT1可以有效地轉(zhuǎn)染RBMSCS，CT1可在RBMSCS中高效長(zhǎng)期表達(dá)3CT1可以促進(jìn)RBMSCS向神經(jīng)方向分化4CT1修飾的RBMSCS，聯(lián)合神經(jīng)誘導(dǎo)劑，為RBMSCS向神經(jīng)方向分化提供可行的誘導(dǎo)方法5CT1可以維持RBMSCS神經(jīng)分化過(guò)程中細(xì)胞的存活。

簡(jiǎn)介：2011屆研究季基于20

簡(jiǎn)介：腫瘤的發(fā)生往往與基因突變有關(guān)，因此，腫瘤的基因治療，尤其是靶向基因治療就有重要意義。腫瘤特異性增殖腺病毒即溶瘤腺病毒，是目前最具前景的靶向基因治療載體之一。單靶向溶瘤腺病毒的特異性還不夠強(qiáng)，故我們又構(gòu)建了雙靶向溶瘤腺病毒載體。腺病毒復(fù)制最重要的元件是其E1區(qū)，特別是E1A區(qū)，我們用癌癥特異性啟動(dòng)子HTERT代替E1A本身的啟動(dòng)子，變成ADHTERT。同時(shí)我們將E1ACR2區(qū)的24BP堿基刪除，則E1A△24蛋白質(zhì)不能與RB結(jié)合，抑制了細(xì)胞周期。上述構(gòu)建物簡(jiǎn)寫(xiě)為ADHTERTE1A△24即為雙靶向溶瘤腺病毒載體，此腺病毒只能靶向癌細(xì)胞。傳統(tǒng)的外源性啟動(dòng)子如HCWV等調(diào)控外源基因表達(dá)，由于其活性不受病毒生活史的調(diào)控，使其成為一種不安全因素。如用病毒內(nèi)源性啟動(dòng)子調(diào)控外源基因表達(dá)可以提高基因治療的安全性。本實(shí)驗(yàn)在構(gòu)建腺病毒載體時(shí)，剔除了腺病毒E3區(qū)的67K和GP19K基因，僅保留E3區(qū)內(nèi)源性啟動(dòng)子及其調(diào)控部分，以達(dá)到腺病毒內(nèi)源性啟動(dòng)子調(diào)控外源基因表達(dá)的目的。因此，我們構(gòu)建了小載體PCZ203，缺失E3區(qū)以方便插入外源基因。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步構(gòu)建了攜帶外源基因的小載體質(zhì)粒PCZ204GENE，通過(guò)其與含ADHTERTE1A△24的質(zhì)粒PCN103重組，獲得雙靶向并由內(nèi)源性啟動(dòng)子控制外源基因表達(dá)的ADHTERTE1A△24E3GENE的病毒，簡(jiǎn)稱(chēng)ADCN204GENE。其中ADCN204EGFP的構(gòu)建是本課題的第一部分內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ADCN204EGFP具有很強(qiáng)的腫瘤靶向性和較高的安全性。按照導(dǎo)師劉新垣院士所提出的靶向基因病毒治療策略，我們利用目前非常有應(yīng)用前景的治療基因TRAIL構(gòu)建了ADCN204TRAIL，深入研究其在體外和體內(nèi)對(duì)肝癌的療效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ADCN204TRAIL能特異地侵入腫瘤細(xì)胞并高效介導(dǎo)TRAIL的表達(dá)，對(duì)體外腫瘤細(xì)胞系有明顯的殺傷能力，更為重要的是其在體內(nèi)也顯著的抑制了腫瘤生長(zhǎng)，有的腫瘤甚至完全消失。這應(yīng)該是一項(xiàng)很有重要意義的成果。ADCN204GETLE的構(gòu)建方法非常復(fù)雜，國(guó)際上無(wú)人報(bào)道過(guò)。ADCN204TRAIL的抗腫瘤效果非常顯著，國(guó)際上也沒(méi)有這么好的結(jié)果。

簡(jiǎn)介：目的對(duì)青天葵及其組織培養(yǎng)物進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)試和紫外光譜分析，并比較其異同，為青天葵質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供生藥鑒別依據(jù)；對(duì)青天葵及其組織培養(yǎng)物和組織培養(yǎng)物各提取部位進(jìn)行體外抗乙型肝炎病毒藥效學(xué)研究；初步判斷組織培養(yǎng)物是否能作為青天葵資源加以利用。方法采用化學(xué)成分預(yù)試方法來(lái)檢識(shí)青天葵及其組織培養(yǎng)物所含化學(xué)成分類(lèi)型并比較其異同；采用紫外光譜線(xiàn)組法以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水為溶劑，測(cè)定青天葵及其組織培養(yǎng)物紫外吸收，比較兩者吸收特征；以2215細(xì)胞為模型，加入藥物培養(yǎng)8D，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)，結(jié)合MTT法確定最大無(wú)毒濃度；用酶聯(lián)免疫法ELISA法檢測(cè)青天葵水提液、青天葵組織培養(yǎng)物水提液和青天葵組織培養(yǎng)物各提取部位對(duì)2215細(xì)胞分泌的E抗原HBEAG和表面抗原HBSAG抑制作用。結(jié)果化學(xué)成分預(yù)試表明青天葵及其組織培養(yǎng)物均含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸等成分，所不同的是青天葵含有黃酮、酚、香豆素、內(nèi)酯、強(qiáng)心苷、植物甾醇和三萜類(lèi)成分，組織培養(yǎng)物含有皂苷類(lèi)成分，特征性強(qiáng)，可作為二者生藥鑒別方法。青天葵石油醚提取液在2230NM、2700NM、2870NM有吸收峰，乙酸乙酯提取液在2670NM、2700NM、3200NM有吸收峰，正丁醇提取液在2230NM、2550NM、2620NM有吸收峰，水提取液紫外無(wú)吸收。青天葵組織培養(yǎng)物石油醚提取液在2220NM、2720NM有吸收峰，乙酸乙酯提取液在2700NM、2760NM、2850NM有吸收峰，正丁醇提取液在2230NM、2620NM有吸收峰，水提取液在2580NM、3610NM、3940NM有吸收峰。二者石油醚提取液在2230±10NM和2700±20NM、乙酸乙酯提取液在2700NM、正丁醇提取液在2230NM和260NM有相同吸收峰，青天葵水提取液紫外無(wú)吸收，而組織培養(yǎng)物水提取液紫外有吸收。紫外光譜特征性強(qiáng)，也可作為二者生藥鑒別方法。青天葵水提液對(duì)HBEAG和HBSAG均具有抑制作用，對(duì)HBEAG抑制作用強(qiáng)于對(duì)HBSAG抑制作用；青天葵組織培養(yǎng)物水提液對(duì)HBEAG和HBSAG均具有抑制作用，對(duì)HBSAG抑制作用強(qiáng)于對(duì)HBEAG抑制作用；青天葵組織培養(yǎng)物乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位對(duì)HBEAG和HBSAG均具有抑制作用，對(duì)HBSAG抑制作用強(qiáng)于對(duì)HBEAG抑制作用。結(jié)論本研究首次采用化學(xué)成分預(yù)試和紫外光譜線(xiàn)組法對(duì)青天葵及其組織培養(yǎng)物進(jìn)行生藥鑒別研究，并以2215細(xì)胞為模型，對(duì)青天葵及其組織培養(yǎng)物及組織培養(yǎng)物各提取部位進(jìn)行體外抗乙型肝炎病毒藥效學(xué)研究，結(jié)果表明化學(xué)成分預(yù)試和紫外光譜線(xiàn)組法特征性強(qiáng)，均可作為青天葵生藥鑒別方法；青天葵水提液及其組織培養(yǎng)物水提液、組織培養(yǎng)物乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位均具有抑制2215細(xì)胞分泌HBEAG、HBSAG的作用；青天葵組織培養(yǎng)物有望作為青天葵資源加以開(kāi)發(fā)利用。

簡(jiǎn)介：目的研究不同濃度的MB10ΜMOLL，50PMOLL，100ΜMOLL，在光照度為40000LUX，分別熒光照射血漿0、20、40、60MIN，滅活血漿病毒DNA，通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)血漿病毒滅活的各個(gè)不同時(shí)間段乙肝病毒DNA濃度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，判斷滅活效果，選定最佳滅活條件，并觀(guān)察病毒滅活后對(duì)血漿成分的影響。研究50ΜMOLL的MB濃度，在光照度為40000LUX，分別照射紅細(xì)胞懸液0、20、40、60MIN，觀(guān)察MB法處理懸液的同時(shí)膜的損傷程度，間接了解對(duì)紅細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，探討亞甲藍(lán)光化學(xué)法在紅細(xì)胞制品病毒滅活方面的可行性。方法在己知HBVDNA陽(yáng)性血漿中加入MB，調(diào)整MB終濃度分別為10ΜMOLL、50ΜMOLL、100ΜMOLL，光照度為40000LUX，照射時(shí)間分別為0MIN、20MIN、40MIN、60MIN，在各點(diǎn)分別取樣抽提基因組DNA用于熒光定量分析，測(cè)定HBVDNA的濃度，推斷在不同時(shí)間和濃度下的滅活效果。在滅活效果最好的點(diǎn)取樣檢測(cè)血漿正常成分有無(wú)顯著變化，其中包括生化指標(biāo)，酶學(xué)指標(biāo)，凝血因子FⅧC活性，SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳觀(guān)察蛋白亞基的變化，蛋白免疫印跡觀(guān)察血漿的抗體蛋白活性變化。同樣方法，亞甲藍(lán)光化學(xué)法處理紅細(xì)胞懸液，光照度為40000LUX，MB濃度為50ΜMOLL，在光照0MIN、20MIN、40MIN、60MIN后的不同時(shí)間點(diǎn)提膜測(cè)定紅細(xì)胞膜NAKATP酶，膜ACHE活性，并觀(guān)察紅細(xì)胞形態(tài)的變化及膜的通透性改變。結(jié)果當(dāng)MB為100ΜMOLL，光照60MIN時(shí)，滅活乙肝病毒的效果最好，對(duì)于高拷貝數(shù)的病毒濃度，在本實(shí)驗(yàn)的條件下，尚無(wú)法完全滅活病毒，但可以使HBVDNA濃度明顯下降；從病毒滅活的表格看，滅活效果與時(shí)間和MB濃度呈正相關(guān)，作用60MIN時(shí)血漿中主要成分的生化指標(biāo)無(wú)顯著變化及凝血因子FⅧC活性無(wú)明顯改變，部分血漿酶活性有明顯下降P＜005。血漿蛋白的亞基數(shù)目和遷移速度未見(jiàn)明顯變化，血漿的抗體蛋白也具有正常的生物學(xué)活性。在用于紅細(xì)胞制品滅活方面，亞甲藍(lán)法還有缺陷，對(duì)紅細(xì)胞膜的損傷較明顯。隨著照射時(shí)間的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞的邊緣出現(xiàn)了不規(guī)則、粘連，附著物也逐漸增多。紅細(xì)胞的溶血度顯著增大P＜005，幾乎呈線(xiàn)性。在照射過(guò)程中，NAKATP酶無(wú)明顯下降。膜ACHE在40MIN后下降速率增大，與對(duì)照組比，下降了大約65％P＜005。在照射20MIN后滲透脆性也漸出現(xiàn)明顯升高P＜005。推測(cè)亞甲藍(lán)對(duì)膜損傷的主要機(jī)制可能是單線(xiàn)態(tài)氧和自由基的氧化作用。結(jié)論MB10YMOLL輔助熒光光照60MIN可使血漿中乙肝病毒量明顯降低，但無(wú)法完全滅活。在此實(shí)驗(yàn)條件下，血漿的大多數(shù)成分能保持較高活性。MB法對(duì)紅細(xì)胞膜有損傷作用，其損傷的機(jī)制可能是由于單線(xiàn)態(tài)氧和自由基對(duì)膜的過(guò)氧化作用。

簡(jiǎn)介：軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文1分類(lèi)號(hào)R7821密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類(lèi)號(hào)（UDC）NELL1NELL1NELL1NELL1慢病毒載體轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞對(duì)其成骨分化影響的實(shí)驗(yàn)研究OSTEOGENICOSTEOGENICOSTEOGENICOSTEOGENICDIFFERENTIATIONDIFFERENTIATIONDIFFERENTIATIONDIFFERENTIATIONOFOFOFOFHUMANHUMANHUMANHUMANPERIODONTALPERIODONTALPERIODONTALPERIODONTALLIGAMENTLIGAMENTLIGAMENTLIGAMENTSTEMSTEMSTEMSTEMCELLSCELLSCELLSCELLSEXPRESSINGEXPRESSINGEXPRESSINGEXPRESSINGLENTIVIRALLENTIVIRALLENTIVIRALLENTIVIRALNELL1NELL1NELL1NELL1作者姓名陳彩云學(xué)科專(zhuān)業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)（內(nèi)科學(xué)）指導(dǎo)教師牛忠英教授（主任醫(yī)師）答辯委員會(huì)主席侯本祥答辯日期2012年5月21日院校地址北京市海淀區(qū)復(fù)興路28號(hào)郵政編碼100853資金資助國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（30672319）軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文3目錄中英文縮略詞表中英文縮略詞表3中文摘要中文摘要5英文摘要英文摘要7前言前言9實(shí)驗(yàn)一、人牙周膜干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性的研究實(shí)驗(yàn)一、人牙周膜干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性的研究11【摘要】11【關(guān)鍵詞】111材料和方法122結(jié)果163討論18參考文獻(xiàn)21實(shí)驗(yàn)二、攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的慢病毒載體感染人牙周膜干細(xì)胞對(duì)其體外實(shí)驗(yàn)二、攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的慢病毒載體感染人牙周膜干細(xì)胞對(duì)其體外成骨分化影響的研究成骨分化影響的研究23【摘要】23【關(guān)鍵詞】231材料與方法242結(jié)果313討論32參考文獻(xiàn)36實(shí)驗(yàn)三、人實(shí)驗(yàn)三、人NELL1NELL1NELL1NELL1基因慢病毒載體的構(gòu)建基因慢病毒載體的構(gòu)建39【摘要】39【關(guān)鍵詞】391材料與方法402結(jié)果453討論46參考文獻(xiàn)51實(shí)驗(yàn)四、實(shí)驗(yàn)四、NELL1NELL1NELL1NELL1慢病毒載體轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞對(duì)其成骨分化影響的研究慢病毒載體轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞對(duì)其成骨分化影響的研究54【摘要】54【關(guān)鍵詞】541材料與方法55