簡(jiǎn)介：年齡和認(rèn)知方式對(duì)前瞻記憶的影響年齡和認(rèn)知方式對(duì)前瞻記憶的影響摘要前瞻記憶PROSPECTIVEMEMORY是指對(duì)預(yù)定事件或行為的記憶，如記住1小時(shí)后打電話。前瞻記憶是一種特殊的長(zhǎng)時(shí)記憶，它是相對(duì)于回溯記憶RETROSPECTIVEMEMORY而提出來(lái)的。回溯記憶是指對(duì)過(guò)去己發(fā)生的事件或行為的記憶，如昨天學(xué)習(xí)的課程內(nèi)容是什么前瞻記憶研究始于二十世紀(jì)七十年代，并在近年成為記憶心理學(xué)的研究熱點(diǎn)。本文在綜述部分對(duì)前瞻記憶的定義、特點(diǎn)、分類以及前瞻記憶和回溯記憶的區(qū)別與聯(lián)系、前瞻記憶的研究方法、前瞻記憶的機(jī)制的研究、影響前瞻記憶的因素等方面進(jìn)行了介紹。通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)、外資料發(fā)現(xiàn)有關(guān)兒童前瞻記憶的研究很少，而且實(shí)驗(yàn)研究的分布年代較廣，各任務(wù)變量相差很大，年齡因素對(duì)前瞻記憶的影響沒(méi)有一個(gè)一致的結(jié)果，我們?cè)诟蟮哪挲g范圍小學(xué)、初中、高中采用前瞻記憶研究的典型實(shí)驗(yàn)范式來(lái)研究不同類型的前瞻記憶的長(zhǎng)期發(fā)展軌跡。同時(shí)，個(gè)體差異是影響前瞻記憶的一個(gè)重要因素，場(chǎng)獨(dú)立一場(chǎng)依存的認(rèn)知方式作為一個(gè)重要的人格緯度，表示人們?cè)谛畔⒓庸み^(guò)程中依賴外部線索和內(nèi)部線索的傾向性。己有研究表明，場(chǎng)獨(dú)立型的個(gè)體具有較成熟的元認(rèn)知技能，特別是較強(qiáng)的注意監(jiān)控技能以及信息的提取和組織技能，場(chǎng)獨(dú)立型被試在元認(rèn)知方面的優(yōu)勢(shì)應(yīng)有利于他們完成前瞻記憶任務(wù)。因此，我們認(rèn)為場(chǎng)依存性認(rèn)知方式是影響前瞻記憶的一個(gè)因素。為探討年齡、認(rèn)知方式對(duì)前瞻記憶的影響，本研究以非反義詞對(duì)包括三對(duì)同義詞對(duì)、反義詞對(duì)為實(shí)驗(yàn)材料，小學(xué)三年級(jí)、初中一年級(jí)、高中一年級(jí)學(xué)生為被試，采用3年齡小學(xué)初中高中X2認(rèn)知方式場(chǎng)獨(dú)立型場(chǎng)依存型X2任務(wù)類型基于事件基于時(shí)間重復(fù)測(cè)量一個(gè)因素的三因素混合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，其中年齡、認(rèn)知方式為被試間因素，任務(wù)類型為被試內(nèi)因素研究結(jié)果表明當(dāng)進(jìn)行中任務(wù)為反義詞一非反義詞判斷任務(wù)時(shí)，1場(chǎng)獨(dú)立者的前瞻記憶成績(jī)顯著好于場(chǎng)依存者2基于事件的前瞻記憶成績(jī)明顯好于基于時(shí)間的前瞻記憶成績(jī)3各年齡段前瞻記憶成績(jī)沒(méi)有顯著差異4前瞻記憶的完成需要認(rèn)知資源，支持注意一搜索模型和多重加工機(jī)制。年齡和認(rèn)知方式對(duì)前瞻記憶的影響THEEFFECTOFCOGNITIVESTYLEAGEONPROSPECTIVEMEMYABSTRACTPROSPECTIVEMEMORYPROMISATYPEOFMEMORYINWHICHANINDIVIDUALMUSTREMEMBERTOPERFONNANEXTENDEDACTIVITYATSOMEDESIGNATEDPOINTINTHEFURTHERFOREXAMPLEREMEMBERINGTOCALLSOMEBODYTOMORROWMORNINGPROSPECTIVEMEMORYISONESPECIALTYPEOFLONGTIMEMEMORYITISDIFERENTFROMRETROSPECTIVEMEMORYRETROMWHICHCONCERNSTHEMEMORYTAKENPLACEINTHEPARTTIMEFOREXAMPLEREMEMBERINGWHATHADLEARNEDYESTERDAYATSCHOOLBEFORE19705PROSPECTIVEMEMORYWEREUNKNOWNBUTITISBOILINGWITHIDEASANDFINDINGSRECENTYEARSINTHEINTRODUCTIONTHEDEFINITIONFEATURESANDTYPEOFPROSPECTIVEMEMORYDIFERENCEBETWEENPROSPECTIVEMEMORYANDRETROSPECTIVEMEMORY、RESEARCHMETHODOFPROSPECTIVEMEMORYTHEFACTORSTHATINFLUENCEASUBJECTSPERFORMANCEINPROSPECTIVEMEMORYTASKSMECHANISMSANDAPPLICATIONOFPROSPECTIVEMEMORYTHEIMPORTANCEOFPROSPECTIVEMEMORYRESEARCHANDSOONAREINTRODUCEDACCORDINGTHEARTICLESBEFOREWEFINDTHATNOTONLYTHEREWEREAFEWSTUDIESONPROSPECTIVEMEMORYABOUTCHILDRENBUTALSOTHESERESEARCHWEREDIFERENTINDESIGNANDRESULTSOWEEMPLOYTHETYPICALEXPERIMENTALPARADIGMTORESEARCHTHEDEVELOPINGTRACKOFPROSPECTIVEMEMORYINADDITIONPERSONALITYISANIMPORTANTFACTORTHATINFLUENCESPROSPECTIVEMEMORYTHEFIELDDEPENDENCEINDEPENDENCEFDIISANIMPORTANTCOGNITIVESTYLEITREFLECTSTHEINDIVIDUALDIFERENCEINTERMSOFTHEAUTONOMYOFEXTERNALORINTERNALREFERENTFROMTHERECENTSTUDIESCONCERNEDWITHFDIRESEARCHERSARGUETHATFIELDDEPENDENCEFDINDIVIDUALSDEVELOPTHEMETACOGNITIVEWHICHISSKILLEDMOREEARLYANDMOREEFFICIENTLYTHANFIELDINDEPENDENCEFIINDIVIDUALS，ESPECIALLYTHEATENTIONMONITORCONGNITIONRESTRUCTUREETCTHESUPERIORITYOFFDINDIVIDUALSINMETACOGNITIVEWILLBENEFITTHEPERFORMANCEOFPROSPECTIVEMEMORYSOTHEFDIMIGHTBEAFACTORTHATINFLUENCETHEPROSPECTIVEMEMORYTHEPRESENTRESEARCHSTUDIEDTHEEFECTOFFDITYPEOFTASKANDAGEONPROSPECTIVEMEMORYTHEDESIGNOFTHEEXPERIMENTWASA2COGNITIVESTYLEFDFIX2TYPEOFPROMEVENTBASEDTIMEBASEDX3AGEPRIMARYSCHOOLJUNIORMIDDLEIII

簡(jiǎn)介：國(guó)家海洋局第三海洋研究所學(xué)校編碼學(xué)校編碼8530385303分類號(hào)分類號(hào)密級(jí)密級(jí)學(xué)號(hào)學(xué)號(hào)85303094028530309402UDCUDC碩士學(xué)位論文WSSV膜蛋白VP26與核衣殼蛋白VP51相互作用位點(diǎn)的鑒定及低溫保存WSSV病毒粒子方法的建立RESEARCHESONTHEINTERACTIONSITESBETWEENTHEENVELOPEPROTEINVP26NUCLEOCAPSIDPROTEINVP51OFWHITESPOTSYNDROMEVIRUSTHEMETHODOFPRESERVINGWSSVATLOWTEMPERATURE李侃指導(dǎo)教師姓名楊豐教授專業(yè)名稱微生物學(xué)論文提交日期2012年06月論文答辯時(shí)間2012年06月學(xué)位授予日期答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人2012年06月國(guó)家海洋局第三海洋研究所國(guó)家海洋局第三海洋研究所學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明本人同意國(guó)家海洋局第三海洋研究所根據(jù)中華人民共和國(guó)學(xué)位條例暫行實(shí)施辦法等規(guī)定保留和使用此學(xué)位論文，并向主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文（包括紙質(zhì)版和電子版），允許學(xué)位論文進(jìn)入本所圖書館及其數(shù)據(jù)庫(kù)被查閱、借閱。本人同意國(guó)家海洋局第三海洋研究所將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其它方式合理復(fù)制方式保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于（）1在年月日解密，解密后適用上述授權(quán)。（）2不保密，適用上述授權(quán)。（請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)括號(hào)內(nèi)打“√”或填上相應(yīng)內(nèi)容。保密學(xué)位論文應(yīng)是已經(jīng)國(guó)家海洋局第三海洋研究所保密委員會(huì)審定過(guò)的學(xué)位論文，未經(jīng)本所保密委員會(huì)審定的學(xué)位論文均為公開學(xué)位論文。此聲明欄不填寫的，默認(rèn)為公開學(xué)位論文，均適用上述授權(quán)。）論文作者簽名日期年月日指導(dǎo)老師簽名日期年月日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)學(xué)校代碼10542密級(jí)學(xué)號(hào)2001420080654ACOGNITIVESTUDYOFXIEYINPARODYIN叫■●J_●1▲1J●JNUMNESEU0MMERCLALAAVENLSEMENTSFROMTHEPERSOECTIVEOFAUTONOMY．．DEPENDENCYANALYSISFRAMEWORK自主一依存分析框架下漢語(yǔ)商業(yè)廣告中諧音仿擬的認(rèn)知研究指導(dǎo)教師姓名、職稱盜墓咽型塾撞學(xué)科專業(yè)墓適逢童塞堂湖南師范大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)辦公室二。一七年五月ABSTRACTX／EY／NPARODYHASCOMEINTOWIDESPREADUSEINNOWADAYSCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSTHANKSTOITSNOVEL，VIVIDANDECONOMICALWAYOFDELIVERINGPRODUCT’SSELLINGPOINTANDINCITINGTHEAUDIENCE’SPURCHASE．DESPITETHEFACTTHATLINGUISTICRESEARCHESONTHISPHENOMENONHAVEMADEFRUITFULPROGRESSFROMTHEPERSPECTIVEOFRHETORIC，PSYCHOLOGYANDPRAGMATICS，WHOSEFOCALPOINTSAREDEFINITION，CLASSIFICATIONANDEXPRESSIVEEFFECTS，THERESTILLNEEDSACOGNITIVEEXPLANATIONTOREVEALHOWITISGENERATEDBYTHEADVERTISERANDHOWITISINTERPRETEDBYTHEAUDIENCE．THISTHESISAIMSTOSTUDYXIEYINPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSFROMACOGNITIVEPERSPECTIVE．ITADOPTSPROFESSORXUSHENGHUAN’SAUTONOMYDEPENDENCYANALYSISFRAMEWORKASTHETHEORETICALFOUNDATION，MAINLYEMPLOYINGAQUALITATIVEANALYSIS，DEDUCTIONANDINDUCTIONTOPROBEINTOTHEGENERATIONANDINTERPRETATIONOFXZENPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTS．THISTHESISHASANSWEREDTHEFOLLOWINGTWOQUESTIONS1HOWISXIEYINPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSGENERATEDBYTHEADVERTISERS2HOWISXIEYINPARODYINCHINESECOMMERCIALADVERTISEMENTSINTERPRETEDBYTHEAUDIENCETHEFINDINGSOFTHISTHESISAREASFOLLOWS1THISPHENOMENONISNOTAMERERHETORICORNAMENTBUTTHERESULTOFCOGNITIVEPROCESSREFLECTINGTHE

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多異氟醚對(duì)老齡大鼠認(rèn)知功能及星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文慢性活動(dòng)性EPSTEINBARR病毒感染患兒的臨床診斷方法及免疫學(xué)機(jī)制的研究姓名邢燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)兒科指導(dǎo)教師魏珉宋紅梅20080630中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文AEBV血液學(xué)方面的診斷包括外周血白細(xì)胞升高且以淋巴細(xì)胞升高為主、異型淋巴細(xì)胞10％，而進(jìn)一步淋巴亞群分析往往提示這些增多的細(xì)胞為CD38DRCD8的T淋巴細(xì)胞。而CAEBV在血液學(xué)和淋巴亞群方面是否有可以協(xié)助CAEBV臨床診斷的、不同于AEBV和正常兒童的特點(diǎn)，至今還沒(méi)有這方面的報(bào)道。外周血單個(gè)核細(xì)胞PERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELLS，PBMC總DNA水平一樣的患兒不等于EBV在各種淋巴細(xì)胞的感染程度和引起的免疫細(xì)胞應(yīng)答一樣，有報(bào)道EBV感染T細(xì)胞為主型與CAEBV的高死亡率呈正相關(guān)性，需要早行骨髓移植等的更積極的治療方案。國(guó)內(nèi)常規(guī)的檢測(cè)外周血EBVODNA的方法不能區(qū)分EBV感染的淋巴細(xì)胞種類，進(jìn)而不能明確CAEBV患兒EBV更具體的感染情況，因此明確CAEBV的感染細(xì)胞類型，幫助A垣BV的臨床分型診斷，可能對(duì)更深入的研究其病毒學(xué)發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)個(gè)體化診治及判定預(yù)后有重要意義。關(guān)于CAEBV的發(fā)病機(jī)制方面，病毒抗原自身和宿主兩方面的因素導(dǎo)致EBV免疫逃逸的機(jī)制在CAEBV的發(fā)病過(guò)程中可能起了重要作用。宿主針對(duì)EBV的正常免疫應(yīng)答包括固有免疫和獲得性又稱適應(yīng)性免疫。國(guó)外研究顯示，宿主的適應(yīng)性細(xì)胞免疫應(yīng)答特別是EBV特異的CD4T細(xì)胞應(yīng)答和CD8T細(xì)胞應(yīng)答對(duì)EBV的清除和疾病的轉(zhuǎn)歸有著重要意義，而CAEBV患兒存在細(xì)胞免疫功能紊亂與其病情慢性活動(dòng)性相關(guān)。但目前的研究大多局限于針對(duì)CAEBV患兒CD4T細(xì)胞、CD8T細(xì)胞和NK細(xì)胞的變化進(jìn)行分析，尚沒(méi)有CAEBV的T細(xì)胞功能亞群、調(diào)節(jié)亞群、初始又稱純真記憶亞群和激活亞群的研究。CAEBV時(shí)宿主針對(duì)EBV特異的適應(yīng)性細(xì)胞免疫應(yīng)答方面，目前CAEBV的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，國(guó)外研究顯示，EBV特異的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞CYTOXICTLYMPHOCYTE，CTL數(shù)目的減少可能是EBV免疫逃逸的重要機(jī)制之一。然而，EBVCTL的數(shù)目并不完全代表宿主針對(duì)EBV特異的適應(yīng)性細(xì)胞免疫的功能，尤其是EBVCTL功能的真實(shí)狀況，目前CAEBV感染尚沒(méi)有針對(duì)EBV肽段庫(kù)方面的CD8的EBV特異CTL功能方面的研究。2

簡(jiǎn)介：防御素是人們?cè)谘芯坎溉閯?dòng)物、昆蟲等防御和抵抗病原微生物侵襲及感染過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)源性陽(yáng)離子多肽，因其具有廣譜抗菌作用以及不易產(chǎn)生耐藥的特點(diǎn)而被寄厚望成為新一代抗生素。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明，除了具有抗菌活性，防御素還具有顯著的抗病毒作用。此外，人們發(fā)現(xiàn)防御素作為天然免疫防線的重要成員，除可以直接殺傷、抑制病原微生物感染外，它還具有調(diào)節(jié)或激活免疫反應(yīng)的作用，使其間接的協(xié)助機(jī)體抵抗病原微生物感染。人Α防御素5HUMANDEFENSIN5，HD5主要由腸道PAH細(xì)胞和女性生殖道粘膜上皮細(xì)胞表達(dá)和分泌，另外在尿道上皮組織中也檢測(cè)到HD5的存在。正是由于這些區(qū)域經(jīng)常受到外來(lái)微生物的侵入，環(huán)境選擇導(dǎo)致的進(jìn)化壓力造就了HD5具有突出的抗病原微生物活性，因此更具開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。對(duì)于防御素的抗病毒作用，人們研究較多、較深入的是其抗包膜病毒如HIV、HSV等的作用，有關(guān)防御素對(duì)無(wú)包膜病毒的抗感染作用尚未引起人們的充分關(guān)注。人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIRUS，HPV作為通過(guò)性傳播感染的常見(jiàn)的病原體，是一種典型的無(wú)包膜DNA病毒，約75的人群在其一生中均會(huì)受到HPV感染；其主要侵害人生殖器、肛門以及口咽部位的上皮細(xì)胞。研究表明，高危型HPV的感染與一些肛門生殖器區(qū)腫瘤的發(fā)生之間有著一定關(guān)聯(lián)，其中HPV16、HPV18亞型的長(zhǎng)期感染已經(jīng)被證實(shí)為宮頸癌發(fā)生的一個(gè)主要誘因。而目市面上還前沒(méi)有針對(duì)HPV感染的特異性藥物，因此深入研究HD5的抗HPV作用，有望為防治HPV感染尋找新的治療途徑。由于HPV對(duì)宿主細(xì)胞有嚴(yán)格的特異性而且其增殖也依賴皮膚或黏膜細(xì)胞的分化，因此應(yīng)用常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù)不易進(jìn)行大量制備；另外，從病變組織中分離獲取足夠數(shù)量的病毒用于抗病毒藥物的藥效評(píng)價(jià)也十分困難。隨著HPV假病毒制備技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)能夠通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，較簡(jiǎn)單地使目的HPV病毒體在外培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行增殖、表達(dá)和組裝，并最終獲得足夠高滴度且包裹有熒光報(bào)告基因的HPV假病毒，從而便于病毒感染程度的直接觀察和定量分析。另外，由于防御素分子內(nèi)存在著3對(duì)二硫鍵，采用化學(xué)合成法對(duì)其制備存在著很大的技術(shù)難度，從而在一定程度上限制了其開發(fā)與推廣應(yīng)用。至于二硫鍵對(duì)防御素活性的影響，人們的認(rèn)識(shí)并不一致，有些研究認(rèn)為二硫鍵可以顯著影響防御素的抗微生物活性；但也有研究認(rèn)為防御素的抗微生物活性主要與其所帶正電荷的多少有關(guān)，而與二硫鍵的存在與否關(guān)系不大。近來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道，二硫鍵的缺失不會(huì)顯著影響人Β防御素3的抗菌活性，而去除了二硫鍵和半胱氨酸的防御素或其衍生多肽則比較容易通過(guò)化學(xué)合成法進(jìn)行生產(chǎn)和制備。HD5分子中的二硫鍵和半胱氨酸是否會(huì)影響其抗病毒活性，化學(xué)合成的HD5線性多肽是否還具有抗病毒作用，這些都還缺乏深入研究。揭示二硫鍵及半胱氨酸在HD5抗病毒活性中的作用，將會(huì)為其今后的研制與開發(fā)提供重要參考。本文利用HPV假病毒研究新技術(shù)首先制備了含綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTEIN，GFP報(bào)告基因的HPV16假病毒，并建立HPV16假病毒感染宮頸癌細(xì)胞模型，然后采用熒光觀察和流式細(xì)胞分析技術(shù)測(cè)定了幾種不同構(gòu)型HD5多肽的抗HPV16感染作用，同時(shí)還觀察了HD5多肽的趨化作用。具體研究方法包括通過(guò)將表達(dá)HPV16病毒衣殼蛋白的質(zhì)粒與GFP報(bào)告基因質(zhì)粒同時(shí)轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，制備包含GFP報(bào)告基因的HPV16假病毒并用多種方式進(jìn)行鑒定，然后通過(guò)流式細(xì)胞分析測(cè)定GFP表達(dá)率來(lái)計(jì)算病毒滴度；用制備的HPV16假病毒感染3種不同宮頸癌細(xì)胞株，選定最合適的細(xì)胞感染模型；合成HD5N天然構(gòu)型、HD5NFAM帶熒光標(biāo)記、HD5ACM半胱氨酸被ACM修飾，線性、HD5ABU半胱氨酸被ABU替換，線性等HD5多肽，首先采用激光共聚焦觀察HD5NFAM與細(xì)胞的作用情況，然后采用鏡下熒光觀察和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)在不同HD5多肽作用48小時(shí)后，被HPV16假病毒感染的細(xì)胞中GFP蛋白的表達(dá)水平，并計(jì)算出多肽對(duì)病毒的抑制率；最后，分別用不同構(gòu)型HD5多肽刺激CASKI細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清中趨化因子IL8的分泌情況，以觀察HD5多肽的間接趨化作用，同時(shí)，通過(guò)TRANSWELL趨化遷移實(shí)驗(yàn)研究不同構(gòu)型HD5多肽對(duì)中性粒細(xì)胞的直接趨化作用。本文取得了以下主要研究結(jié)果1表達(dá)HPV16病毒衣殼蛋白的質(zhì)粒與GFP報(bào)告質(zhì)粒均成功轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，經(jīng)鑒定最終制備出含GFP報(bào)告基因的HPV16假病毒，滴度達(dá)到23108TUML。2HPV16假病毒能夠感染體外培養(yǎng)的宮頸癌細(xì)胞，其中以C33A細(xì)胞感染率最高。3HD5N能夠劑量依賴性地抑制HPV16假病毒感染C33A細(xì)胞，在濃度為50ΜGML時(shí)，HD5N對(duì)HPV16假病毒感染的抑制率已接近100。4HD5NFAM與細(xì)胞作用2～3小時(shí)后，共聚焦顯微鏡觀察到HD5可以大量進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，并且可能主要集中于內(nèi)吞體、溶酶體中。5濃度為20ΜGML的HD5N、HD5ACM、HD5ABU對(duì)HPV16感染C33A細(xì)胞的抑制率分別為9648±567、6902±788和271±15300。與HD5N相比，HD5ACM的抗HPV作用顯著降低，而HD5ABU則基本失去抗HPV活性。6不同構(gòu)型HD5刺激CASKI細(xì)胞分泌趨化因子IL8的能力由高到低依次為HD5NHD5ACMHD5ABU；同樣，HD5N直接趨化外周血中性粒細(xì)胞遷移的能力也顯著高于HD5ACM和HD5ABU。本文主要結(jié)論1成功構(gòu)建了含GFP報(bào)告基因的HPV16假病毒感染宮頸癌細(xì)胞模型，建立了基于流式細(xì)胞分析的抗HPV病毒感染定量檢測(cè)方法，為準(zhǔn)確評(píng)價(jià)HD5的抗HPV病毒感染作用奠定了基礎(chǔ)。2HD5N具有顯著抑制HPV16病毒感染的作用，并證實(shí)HD5可以進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，提示HD5可能通過(guò)限制病毒顆粒在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、脫衣殼等過(guò)程來(lái)發(fā)揮抗病毒作用。3與HD5N相比，HD5ACM的抗HPV16作用明顯減弱，提示二硫鍵對(duì)HD5的抗病毒作用有著顯著影響；與HD5ACM相比，HD5ABU的抗HPV16作用進(jìn)一步減弱，提示HD5多肽抗病毒作用的發(fā)揮依賴于分子中半胱氨酸殘基的存在。4HD5ACM、HD5ABU的間接和直接趨化作用均較天然結(jié)構(gòu)的HD5明顯減弱，提示HD5的趨化作用可能受二級(jí)結(jié)構(gòu)影響，HD5介導(dǎo)的免疫趨化作用可能參與了其抗病毒效應(yīng)的發(fā)揮。

簡(jiǎn)介：輪狀病毒ROTAVIRUS，RV屬于呼腸孤病毒屬，是一種無(wú)包膜的二十面體形狀病毒。RV衣殼由三層同心包裹的結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)成，核心含有一個(gè)由11個(gè)雙鏈RNA片段構(gòu)成的基因組，后者編碼12個(gè)病毒蛋白，包括6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白VP14，6，7和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NSP16。輪狀病毒具有嚴(yán)格的細(xì)胞嗜性，只能有效感染胃腸道上皮及腎上皮細(xì)胞。人和動(dòng)物的嬰幼個(gè)體對(duì)輪狀病毒普遍易感。然而，隨著年齡的增大，他們對(duì)RV的易感性也顯著降低。產(chǎn)生這種變化的原因可能是在個(gè)體的生長(zhǎng)過(guò)程中，針對(duì)RV的某些宿主限制性細(xì)胞因子出現(xiàn)了表達(dá)。目前許多研究表明一些宿主蛋白例如APOBEC3G、LV1、REF1及EWI2WINT具有明顯的抑制病毒感染的作用，而這些宿主限制性因子的表達(dá)可增加宿主對(duì)病毒的抵抗能力，降低宿主的易感性。然而，在RV感染中，類似的具有抑制RV感染的宿主蛋白卻少有發(fā)現(xiàn)。如同在其它很多的病毒感染，在RV感染中，宿主蛋白的合成受到了廣泛的抑制。但是有研究發(fā)現(xiàn)，一些宿主蛋白如整合素Α2Β1、Β2及伴侶蛋白GRP78、GRP94在RV感染過(guò)程中表達(dá)上調(diào)，并在RV的復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮重要作用。這些結(jié)果表明RV能夠選擇性促進(jìn)某些宿主蛋白的表達(dá)以保證病毒感染的順利進(jìn)行。相反，宿主細(xì)胞是否同樣可以通過(guò)上調(diào)一些抗RV的宿主蛋白的表達(dá)以抑制RV的感染呢RV感染是導(dǎo)致全球范圍內(nèi)5歲以下嬰幼兒急性脫水腹瀉的主要原因。RV腹瀉發(fā)生的確切的分子機(jī)制到目前為止仍然沒(méi)有定論。最初RV腹瀉被認(rèn)為是由于小腸絨毛頂部腸上皮細(xì)胞被RV感染后生理功能受到破壞引起的。一些體外實(shí)驗(yàn)研究表明RV感染可以引起腸上皮細(xì)胞的凋亡和壞死。在對(duì)RV腹瀉動(dòng)物模型的研究中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)RV感染可以導(dǎo)致小腸粘膜發(fā)生病理改變及功能異常，其程度的輕重取決于。RV病毒株的毒力。然而，這種機(jī)制難以解釋為什么在RV腹瀉中常常發(fā)現(xiàn)腸道粘膜只有輕微的組織病理學(xué)改變且沒(méi)有腸上皮細(xì)胞的破壞的現(xiàn)象。其它一些研究發(fā)現(xiàn)，RV感染后腸上皮細(xì)胞刷狀緣相關(guān)的一些酶如蔗糖酶異麥芽糖酶SI、乳糖酶根皮苷水解酶，二肽基肽酶ⅣDPPⅣ、NAD葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體1SGLT1以及NAL丙氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)及活性的出現(xiàn)損害，由此推測(cè)RV感染導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞對(duì)葡萄糖和氨基酸的消化吸收能力減弱可能是RV感染引起腹瀉發(fā)生的一種可能的機(jī)制。但是這些研究都未能給出一個(gè)被廣泛接受的RV感染引起腹瀉發(fā)生的具體的分子機(jī)制。近年來(lái)，蛋白質(zhì)組技術(shù)被廣泛應(yīng)用于病毒感染的研究之中，這對(duì)揭示病毒感染的病理生理機(jī)制，深化我們對(duì)病毒宿主相互作用的認(rèn)識(shí)發(fā)揮了巨大作用。在本研究中，我們通過(guò)蛋白質(zhì)組技術(shù)來(lái)發(fā)現(xiàn)新的RV宿主限制性因子以及探究RV腹瀉的新機(jī)制。本研究分為兩部分，第一部分采用二維凝膠電泳2DE等技術(shù)發(fā)現(xiàn)新的RV宿主限制因子，觀察宿主細(xì)胞的天然免疫機(jī)制是如何應(yīng)對(duì)RV感染的；第二部分則運(yùn)用一種先進(jìn)的定量蛋白質(zhì)組技術(shù)SILAC來(lái)研究RV感染腸上皮細(xì)胞引發(fā)腹瀉的分子機(jī)制，觀察RV是如何破壞宿主的天然免疫屏障從而致病的。本研究將會(huì)加深對(duì)RV感染及RV與宿主細(xì)胞相互作用分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為RV腹瀉的預(yù)防和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一部分新的RV宿主限制性因子發(fā)現(xiàn)首先，我們確定了RV感染的合適時(shí)間和MOI以獲得最好的感染效果和細(xì)胞活力，這對(duì)隨后的二維凝膠電泳分析十分重要。為進(jìn)行二維凝膠電泳樣本的制備，我們將MA104培養(yǎng)在直徑10CM的組織培養(yǎng)皿中，當(dāng)細(xì)胞完全匯合時(shí)，用用純化的人輪狀病毒W(wǎng)A株感染MOI3，同時(shí)用等量的DMEM作為對(duì)照感染。細(xì)胞感染12后用冷09％NACL沖洗感染的細(xì)胞，蛋白裂解液提取細(xì)胞總蛋白。采用13CMREADYSTRIPIPG膠條非線性，PI310在IPGPH電泳系統(tǒng)上進(jìn)行蛋白質(zhì)的等電聚焦。等電聚焦結(jié)束后，將膠條置于預(yù)先制好的125％聚丙烯酰胺凝膠上垂直電泳以進(jìn)行多肽分離。電泳結(jié)束后，用膠體藍(lán)對(duì)凝膠進(jìn)行染色，并采用GS800掃描儀對(duì)染色后的凝膠進(jìn)行掃描，用PDQUEST61軟件進(jìn)行圖像分析。我們選擇RV感染后表達(dá)顯著上調(diào)50％以上的蛋白點(diǎn)，通過(guò)MALDITOFMS進(jìn)行蛋白序列鑒定。結(jié)果顯示在人RVWA株感染的MA104細(xì)胞中共發(fā)現(xiàn)24個(gè)蛋白點(diǎn)的表達(dá)顯著上調(diào)50％以上，質(zhì)譜成功鑒定了其中16個(gè)蛋白點(diǎn)。在成功鑒定的蛋白點(diǎn)中，11個(gè)為宿主蛋白10種，5個(gè)點(diǎn)為病毒蛋白4種。我們隨機(jī)選取了一些宿主蛋白如ACP1、ALDOA、CYPA和KRT20對(duì)它們的表達(dá)采用WESTERNBLOT和QRTPCR等方法進(jìn)一步驗(yàn)證。其次，為了明確CYPA在RV感染中的作用，我們先進(jìn)行了免疫熒光實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在RV感染MA104細(xì)胞后，CYPA與RV非結(jié)構(gòu)蛋白NSP5出現(xiàn)顯著共定位，提示CYPA被招募到RV病毒粒質(zhì)。繼而我們通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，RV結(jié)構(gòu)蛋白VP2與CYPA能夠相互共沉淀，表明這兩種蛋白質(zhì)可能存在直接或間接的相互作用。在此基礎(chǔ)上為了進(jìn)一步明確CYPA是否對(duì)RV感染有抑制或促進(jìn)作用，我們?cè)谒拗骷?xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)野生型CYPA及其脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶功能缺失突變體CYPAR55A，或干擾宿主細(xì)胞內(nèi)源性CYPA的表達(dá)，觀察這些處理對(duì)RV感染的影響。結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)野生型CYPA顯著降低RV復(fù)制，而過(guò)表達(dá)CYPAR55A會(huì)顯著促進(jìn)RV復(fù)制。降低內(nèi)源性CYPA表達(dá)同樣顯著促進(jìn)RV的復(fù)制。這些結(jié)果顯示CYPA可以通過(guò)其脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶活性抑制RV復(fù)制。同時(shí)，過(guò)表達(dá)CYPA及其酶功能缺失突變體CYPAR55A均能降低宿主對(duì)RV的易感性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CYPA還可以通過(guò)促進(jìn)宿主細(xì)胞IFNI反應(yīng)來(lái)抑制RV感染，這種功能不依賴于其脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶活性但是可能依賴于宿主細(xì)胞JNK信號(hào)路徑的激活。最后，由于新生BALBC小鼠對(duì)RV非常易感，RV感染容易產(chǎn)生腹瀉癥狀。隨著日齡的增大2周BALBC小鼠對(duì)RV易感性顯著降低。為了明確小腸上皮細(xì)胞CYPA的表達(dá)是否與BALBC小鼠對(duì)RV易感性的變化相關(guān)，我們比較了不同日齡段BALBC小鼠小腸上皮細(xì)胞中CYPA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在新生小鼠5日齡CYPA僅在小腸絨毛底部，主要是在腸隱窩處上皮細(xì)胞中有少量表達(dá)，而在RV容易感染到的小腸絨毛上部的上皮細(xì)胞中幾乎不見(jiàn)CYPA的表達(dá)。相反，在稍大的BALBC小鼠15日齡的小腸絨毛，不管是絨毛頂端還是基底部，其上皮細(xì)胞中CYPA均有豐富的表達(dá)。這些結(jié)果表明，新生BALBC小鼠小腸絨毛上段上皮細(xì)胞中CYPA表達(dá)缺失可能是導(dǎo)致其對(duì)RV易感的重要原因。第二部分RV感染腸上皮細(xì)胞引發(fā)腹瀉新機(jī)制的發(fā)現(xiàn)首先，我們用人輪狀病毒W(wǎng)A株感染人腸上皮細(xì)胞CACO2，同時(shí)在培養(yǎng)基中加入100ΜGML胰蛋白酶，以此模擬腸道消化性的環(huán)境，觀察腸腔內(nèi)消化性環(huán)境對(duì)RV感染腸上皮細(xì)胞后果的可能影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在消化性環(huán)境中RV的感染會(huì)導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞快速脫落。臺(tái)盼藍(lán)染色表明脫落的細(xì)胞活性良好，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示這些脫落的細(xì)胞在脫落時(shí)沒(méi)有出現(xiàn)明顯的凋亡或壞死。在非消化性環(huán)境下腸上皮細(xì)胞只會(huì)在RV感染的末期才出現(xiàn)明顯的脫落，此時(shí)脫落細(xì)胞幾乎全部凋亡及壞死。結(jié)果提示，體內(nèi)RV感染中，被感染的腸上皮細(xì)胞可能還沒(méi)有來(lái)的及凋亡或壞死或其它明顯功能損害就已經(jīng)從基底膜脫落，徹底失去功能。我們進(jìn)一步檢測(cè)了小腸內(nèi)不同段腸腔內(nèi)的胰蛋白酶的活性，結(jié)果顯示在BABLC小鼠幼仔的空腸中、下段和回腸的上段胰蛋白酶活性最高。此外，通過(guò)結(jié)晶紫對(duì)BABLC腸上皮細(xì)胞進(jìn)行活體染色發(fā)現(xiàn)，RV感染引起的腸上皮細(xì)胞脫落在上述腸段中最為明顯。我們的結(jié)果提示RV感染導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞在腸道消化性環(huán)境中快速脫落可能才是RV腹瀉產(chǎn)生的根本原因。其次，為了尋找消化性環(huán)境中RV感染引腸上皮細(xì)胞快速脫落的直接原因，我們采用了一種定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定同位素氨基酸標(biāo)記SILAC來(lái)分析RV感染后CACO2細(xì)胞蛋白表達(dá)譜的變化。結(jié)果顯示，RV感染顯著削弱了與細(xì)胞間的粘附相關(guān)蛋白以及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)，如ECAHERIN，PLAKOGLOBIN，DESMOPLAKIN，層粘連蛋白B2，纖維連接蛋白1，PLECTIN1，CINGULIN以及ZO1等。WESTERNBLOT及QRTPCR進(jìn)一步證實(shí)了這些蛋白質(zhì)在RV感染后顯著下降。免疫熒光實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了RV感染引起細(xì)胞間連接包括緊密連接，粘附連接以及橋粒連接的嚴(yán)重?fù)p壞。進(jìn)一步通過(guò)結(jié)晶紫染色發(fā)現(xiàn)，RV感染顯著破壞腸上皮細(xì)胞屏障功能，增大細(xì)胞間隙，導(dǎo)致胰蛋白酶向細(xì)胞底部嚴(yán)重滲漏，從而破壞細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)粘附，最終引起上皮細(xì)胞脫落。最后，為了明確RV感染導(dǎo)致細(xì)胞粘附功能破壞從而引起腸上皮細(xì)胞脫落的的相關(guān)信號(hào)機(jī)制，我們對(duì)RV感染中可能涉及到的激酶和磷酸酶與細(xì)胞脫落之間的關(guān)系進(jìn)行了研究。我們發(fā)現(xiàn)抑制酪氨酸蛋白激酶可以顯著抑制消化性環(huán)境中RV感染引起的腸上皮細(xì)胞的脫落，抑制蛋白酪氨酸磷酸酶則顯著促進(jìn)RV感染及感染的腸上皮細(xì)胞的脫落。抑制蛋白酶磷酸2APP2A同樣顯著促進(jìn)RV感染引起腸上皮細(xì)胞的脫落。此外，免疫印跡法顯示RV感染引起PP2A兩個(gè)主要結(jié)構(gòu)亞單位PPP2R1A和PPP2R1B表達(dá)減少。RV感染可以引起細(xì)胞胞漿內(nèi)CA2濃度升高，我們結(jié)果顯示，通過(guò)離子霉素和毒胡蘿卜素增大胞漿CA2濃度加速RV感染引起的細(xì)胞脫落。然而，使用BAMPTAM和U73122抑制胞漿內(nèi)CA2增加卻不能阻止消化性環(huán)境中RV感染引起的腸上皮細(xì)胞的快速脫落。這表明RV感染引起胞漿CA2的增加只是導(dǎo)致宿主細(xì)胞的脫落促進(jìn)因素而非決定因素。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)CYPA是一種新的抗RV感染的宿主限制性因子。CYPA通過(guò)本身的脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶活性抑制RV的復(fù)制，其在腸上皮細(xì)胞中的表達(dá)可能與宿主對(duì)RV的易感性密切相關(guān)。CYPA同時(shí)還可以通過(guò)介導(dǎo)宿主細(xì)胞IFNI反應(yīng)來(lái)抑制RV感染。CYPA的這種功能不依賴于其脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶活性，而可能依賴于宿主細(xì)胞中JNK信號(hào)通路的激活。另一方面，我們發(fā)現(xiàn)在消化性環(huán)境中RV感染會(huì)導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞快速脫落，這種現(xiàn)象可能才是RV腹瀉產(chǎn)生的真正原因。而造成細(xì)胞脫落的原因與RV感染引起腸上皮細(xì)胞粘附功能及屏障功能的破壞，胰蛋白酶滲透到細(xì)胞基底部破壞細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附密切相關(guān)。在這個(gè)過(guò)程中，RV感染引起的酪氨酸蛋白激酶的激活以及PP2A的抑制起到了關(guān)鍵作用，而RV感染引起的CA2的內(nèi)流是加重而非決定因素。

簡(jiǎn)介：輪狀病毒ROTAVIRUSRV是引起兒童重癥腹瀉的最常見(jiàn)病原之一。據(jù)估計(jì)，僅2004年輪狀病毒感染引起約527000死亡病例，主要發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。嚴(yán)重地威脅到兒童的健康，由于目前尚無(wú)治療輪狀病毒的特效藥，因此預(yù)防尤為重要。當(dāng)前全球范圍內(nèi)批準(zhǔn)上市的疫苗有三種單價(jià)人減毒活疫苗ROTARIX、五價(jià)牛人重配株疫苗ROTATEQ和單價(jià)羊株減毒活疫苗LLR。然而，因大多數(shù)輪狀病毒疫苗是不同重配疫苗株混合而成的多價(jià)疫苗，因此，其研制、生產(chǎn)和臨床評(píng)價(jià)中各型毒株的特異性體內(nèi)外定量和定性檢測(cè)是疫苗質(zhì)量控制的關(guān)鍵。本文運(yùn)用SPF兔和無(wú)菌兔來(lái)研究輪狀病毒疫苗免疫和感染情況，為新型輪狀病毒疫苗的臨床評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。第一部分輪狀病毒LLR減毒活疫苗對(duì)SPF兔和無(wú)菌兔的致病性和免疫原性研究第一部分實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)兔和無(wú)菌兔為動(dòng)物模型，通過(guò)免疫接種單價(jià)羊株輪狀病毒減毒活疫苗，研究檢測(cè)免疫前后有關(guān)指標(biāo)的變化用ELISA檢測(cè)血清中IGA和IGG的變化來(lái)評(píng)價(jià)接種疫苗后動(dòng)物的體液免疫；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血CD4CD8比值的變異來(lái)研究接種疫苗后動(dòng)物細(xì)胞免疫的變化；通過(guò)檢測(cè)動(dòng)物的便樣，觀察是否出現(xiàn)腹瀉癥狀和排出病毒和通過(guò)免疫組化觀察小腸中是否有輪狀病毒來(lái)闡明LLR是否在小腸繁殖感染小腸。結(jié)果表明LLR疫苗可以誘導(dǎo)SPF和無(wú)菌兔產(chǎn)生包括體液免疫和細(xì)胞免疫在內(nèi)的RV特異性免疫應(yīng)答；可在小腸復(fù)制但不致病。第二部分輪狀病毒VP6基因的表達(dá)第二部分實(shí)驗(yàn)研究了羊株輪狀病毒VP6基因在大腸桿菌中的表達(dá)。通過(guò)用TRIZOL法從羊株輪狀病毒減毒活疫苗中提取RNA病毒，RTPCR擴(kuò)增輪狀病毒第6節(jié)段基因全長(zhǎng)，與PMD18T載體連接、轉(zhuǎn)化、篩選陽(yáng)性克隆。將重組質(zhì)粒進(jìn)行PCR擴(kuò)增VP6基因，再與載體PET32A連接構(gòu)建PET32AVP6表達(dá)載體，測(cè)序結(jié)果正確，VP6基因在大腸桿菌BL21DE3中誘導(dǎo)表達(dá)，WESTERNBLOT鑒定證明了表達(dá)產(chǎn)物為RVVP6蛋白。獲得的VP6蛋白抗原用于制備檢測(cè)血清中輪狀病毒IGA的ELISA試劑盒，為將來(lái)有效地評(píng)價(jià)輪狀病毒疫苗的臨床效果打下基礎(chǔ)。

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簡(jiǎn)介：ALTERATIONOFCOGNITIVEFUNCTIONBRAINSTRUCTUREANDBRAINFUNCTIONBYGENETICVARIATIONINANGIOTENSINCONVERTINGENZYMEINAMNESTIC．TYPEMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTADISSERTATIONSUBMITTEDTOSOUTHEASTUNIVERSITYFORTHEACADEMICDEGREEOFDOCTOROFMEDICINEBYZHANGZHENGSHENGSUPERVISEDBYBUOERVLSEO19YPROFESSORZHANGZHIJUNCLINICALMEDICALCOLLEGESOUTHEASTUNIVERSITYAUGUST2011中文摘要血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的基因多態(tài)性對(duì)遺忘型輕度認(rèn)知損害患者認(rèn)知功能、腦結(jié)構(gòu)和功能的影響東南大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院博士研究生張正生導(dǎo)師張志琚教授中文摘要背景阿爾茨海默病ALZHEIMER’SDISEASE，AD是一種最常見(jiàn)的癡呆癥，影響數(shù)以百萬(wàn)計(jì)的老年人，給社會(huì)家庭帶來(lái)巨大的負(fù)擔(dān)。輕度認(rèn)知損害MILDCOGNITIVEIMPAIRMENT，MCI是指介于正常老化和AD之間的～種過(guò)渡階段的認(rèn)知障礙，MCI可分為遺忘型AMNESTICMCI，AMCI和非遺忘型，AMCI以記憶損害為主，其他認(rèn)知功能保持相對(duì)完整，為最常見(jiàn)的類型，發(fā)展為AD的比例高，每年達(dá)10％一15％。近年來(lái)，諸多研究發(fā)現(xiàn)，血管因素參與AD發(fā)病機(jī)制，導(dǎo)致認(rèn)知功能減退，是AD非常重要的危險(xiǎn)因素。調(diào)節(jié)機(jī)體的血壓且在中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛分布的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ANGIOTENSINCONVERTINGENZYME，ACE在AD和MCI病因中占重要位置。ACE的主要酶解產(chǎn)物一血管緊張素IIANGIOTENSINII，ANGII是一種強(qiáng)烈的促血管收縮物質(zhì)，具有中樞升壓效應(yīng)，且能加速對(duì)有血管保護(hù)作用的緩激肽的滅活，使腦血管阻力增高，腦血流減少，使大腦處于長(zhǎng)期慢性缺血、缺氧的低灌注狀態(tài)，參與AD的血管源性病因，故認(rèn)為體內(nèi)ACE的高水平可能是MCI的危險(xiǎn)因素。除ACE本身的血管特性外，腦內(nèi)的腎素血管緊張素系統(tǒng)對(duì)記憶功能具有直接影響。ANGII及其代謝產(chǎn)物血管緊張素Ⅳ，ANGLV能興奮海馬和杏仁核內(nèi)的神經(jīng)元細(xì)胞從而增強(qiáng)記憶力。因此，ACE基因已成為AD和MCI的候選基因。ACE基因存在插入片段INSERTION，I和缺失片段DELETION，D多態(tài)性，因此構(gòu)成2種等位基因I和D，以及3種基因型缺失純合子型DD、雜合子型DI、插入純合子型II。不同的基因型對(duì)ACE活力水平的影響程度不同，D等位基因攜帶者其ACE的水平明顯增高DD基因型與II基因型相比，ACE水平升高近50％。盡管ACE在AD生物學(xué)作用己被眾多研究證實(shí)，但其I／D基因多態(tài)性在AD中的作用仍有較大爭(zhēng)議。一些研究認(rèn)為I等位基因?yàn)锳D的致病基因，但也有研究結(jié)果顯示，

簡(jiǎn)介：研究背景我國(guó)是乙型肝炎的高流行區(qū)，慢性乙型肝炎病毒簡(jiǎn)稱HBV感染者約12億，大部分人群是通過(guò)母嬰傳播感染的，發(fā)展成乙型肝炎病毒攜帶者、慢性肝炎、肝硬化、肝癌成為新的傳染源。母嬰傳播在乙型肝炎流行中有十分重要的地位。預(yù)防新生兒HBV感染能明顯減少嚴(yán)重肝病的發(fā)生率，從而大大減輕社會(huì)和家庭的負(fù)擔(dān)。乙肝疫苗迄今為止預(yù)防乙肝最有效和最經(jīng)濟(jì)的方法，但對(duì)于乙肝病毒表面抗原簡(jiǎn)稱HBSAG攜帶者母親的高危新生兒，圍產(chǎn)期接種單用乙肝疫苗嬰兒免疫失敗率20％。在許多國(guó)家及地區(qū)，針對(duì)HBSAG攜帶者母親所生新生兒的圍產(chǎn)期HBV傳播預(yù)防，乙肝免疫球蛋白被廣泛用于和乙肝疫苗一起進(jìn)行聯(lián)合免疫以阻斷乙肝病毒攜帶者母親的新生兒圍產(chǎn)期傳播。目的、意義目前國(guó)內(nèi)對(duì)乙肝免疫球蛋白應(yīng)用仍缺乏指導(dǎo)性方案，各地報(bào)道應(yīng)用乙肝免疫球蛋白效果尚存爭(zhēng)議。本文通過(guò)系統(tǒng)評(píng)價(jià)，比較國(guó)內(nèi)不同免疫策略乙型肝炎母嬰傳播預(yù)防作用的效果，為制定更加合理、有效免疫策略提供一些線索。研究方法本研究利用META分析的方法。主要步驟1確定研究對(duì)象；2文獻(xiàn)檢索；3文獻(xiàn)篩選；4文獻(xiàn)信息的提??；5統(tǒng)計(jì)分析，效應(yīng)值合并與計(jì)算，異質(zhì)性Q檢驗(yàn)，偏倚評(píng)估，敏感性分析等。本研究采用REV42軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。研究結(jié)果共有29篇獨(dú)立研究符合本次納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)。主要結(jié)果有①產(chǎn)前應(yīng)用乙肝免疫球蛋白組與不應(yīng)用組的胎兒在宮內(nèi)感染乙肝病毒的相對(duì)危險(xiǎn)比，合并RR和相應(yīng)的95％CI為310233～414，P值小于000001，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。亞組分析后得到合并RR值及其95％CI分別為母親HBSAG和HBEAG雙陽(yáng)性者是336238～474，單HBSAG陽(yáng)性者是311165～586，P值均小于000001，兩組結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②產(chǎn)后新生兒出生后單純接種乙肝疫苗組與乙肝疫苗聯(lián)合乙肝免疫球蛋白組的新生兒產(chǎn)時(shí)感染乙肝病毒相對(duì)危險(xiǎn)比，合并RR值和相應(yīng)的95％CI為198152～258，P值小于000001，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。亞組分析后得到合并RR值及其95％CI分別為乙肝疫苗5ΜG劑量是241168～346，乙肝疫苗10ΜG劑量是178116～273，兩組P值均小于000001，結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；母親HBSAG和HBEAG雙陽(yáng)性者是266174～405，單HBSAG陽(yáng)性者是229153～343，兩組P值均小于00001，結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③產(chǎn)后新生兒出生后單純接種乙肝疫苗5ΜG劑量組與10ΜG劑量組新生兒產(chǎn)時(shí)感染乙肝病毒相對(duì)危險(xiǎn)比，合并RR值和相應(yīng)的95％CI為，固定效應(yīng)模型是437274～774，P值小于0001，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；隨機(jī)效應(yīng)模型是254O80～809，P值011，結(jié)果兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)論通過(guò)本次研究，獲得了主要結(jié)論有①孕婦乙肝病毒攜帶者孕28周，32周、36周注射劑量為200IU的乙肝免疫球蛋白可以降低胎兒在宮內(nèi)的感染風(fēng)險(xiǎn)。②孕后期不應(yīng)用乙肝免疫球蛋白導(dǎo)致宮內(nèi)感染，母親乙肝病毒HBSAG和HBEAG雙陽(yáng)性者比母親單乙肝病毒肪SAG陽(yáng)性者危險(xiǎn)更大。③乙肝病毒攜帶者孕婦的新生兒，采用乙肝疫苗聯(lián)用乙肝免疫球蛋白聯(lián)合免疫，能較好預(yù)防乙肝病毒的圍產(chǎn)期感染。④無(wú)經(jīng)濟(jì)條件者，采用全程接種10ΜG劑量的乙肝疫苗，也能較好預(yù)防新生兒圍產(chǎn)期的感染。

簡(jiǎn)介：流感是人類重要的傳染病，全球每年約有20％的兒童和5％的成年人感染，給個(gè)人和社會(huì)帶來(lái)非常大的負(fù)擔(dān)。目前在人群中流行的主要有H1N1、H3N2亞型和乙型流感病毒，而H3N2亞型流感病毒自1968年引起世界流感大流行以來(lái)一直是人群中流行的一個(gè)主要亞型。接種流感疫苗是當(dāng)前預(yù)防流感的主要措施，而目前的流感疫苗主要以流感病毒的膜蛋白血凝素HA，神經(jīng)氨酸酶NA作為研究對(duì)象，而HA和NA均易發(fā)生變異，從而使流感疫苗的應(yīng)用效果受到一定限制。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTE，CTL介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫在機(jī)體抗病毒免疫中起著非常重要的作用，其中CTL表位通過(guò)結(jié)合感染細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體MAJHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEX，MHC類分子，激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫水平，有助于病毒的清除與疾病的恢復(fù)，是構(gòu)成防止病毒感染的第二道防線，是目前抗病毒免疫治療的重要研究目標(biāo)。而流感的NP蛋白和M蛋白由于序列高度保守，因此其抗原肽能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)同型A型或B型和異型病毒株的交叉免疫反應(yīng)，是CTL反應(yīng)的主要靶抗原，探索基于流感病毒NP和M蛋白的CTL表位對(duì)于開發(fā)新型疫苗有重要的意義。傳統(tǒng)的多肽表位篩選和鑒定方法淋巴細(xì)胞功能試驗(yàn)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)編碼流感病毒的保守區(qū)段的00T細(xì)胞和B細(xì)胞表位，以及主要MHC分子結(jié)合肽，用質(zhì)粒DNA作為載體或者直接合成表位抗原肽，在細(xì)胞因子或其他免疫佐劑的輔助下進(jìn)行免疫，產(chǎn)生強(qiáng)的廣譜的細(xì)胞免疫和體液免疫，由此產(chǎn)生能對(duì)同型病毒的同型保護(hù)和對(duì)異型病毒的交叉保護(hù)作用，有望解決流感病毒的頻繁變異對(duì)于疫苗研制所造成的困難?！灸康摹?綜合運(yùn)用多種生物信息學(xué)軟件，發(fā)現(xiàn)流感病毒H3N2內(nèi)部保守蛋白NP蛋白和M蛋白的CTL表位，并提高CTL表位預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確率，建立一種新的表位篩選模式。2通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證前期預(yù)測(cè)的候選表位，發(fā)現(xiàn)新的H3N2內(nèi)部保守蛋白NP蛋白和M蛋白的CTL表位，為開發(fā)流感表位疫苗奠定基礎(chǔ)?！痉椒ā?通過(guò)T細(xì)胞表位預(yù)測(cè)、蛋白酶切位點(diǎn)預(yù)測(cè)、TAP預(yù)測(cè)、分子動(dòng)力模擬對(duì)候選表位肽進(jìn)行篩選，確定所要合成的流感病毒NP、M蛋白表位肽；2用芴甲氧羰基固相法合成前期預(yù)測(cè)的多肽，并進(jìn)行親和力、穩(wěn)定性鑒定；3采用IFNΓELISPOT方法檢測(cè)表位肽的CTL增殖活性，用51CR釋放實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞毒性分析各實(shí)驗(yàn)肽的CTL殺傷效應(yīng)。【結(jié)果】1生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)結(jié)果表明，NP258266、NP4856、NP189197、M5866、M311等5個(gè)表位與HLAA0201的結(jié)合情況比較理想，選擇進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)；2T2結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示候選肽NP258266、NP4856、M5866的親和力較高，F(xiàn)1值分別是206、173、199，而NP189197、M311親和力較低，F(xiàn)1值分別是072、023。穩(wěn)定性結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示表位肽NP258266、NP4856、M5866的半衰期分別為196H、214H、211H，均大于1H，表明穩(wěn)定性較好，選擇進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)3IFNΓELISPOT檢測(cè)結(jié)果表明，NP258266、NP4856、M5866每1105個(gè)誘導(dǎo)的PBMC產(chǎn)生IFNΓ點(diǎn)數(shù)分別為7463、6121、6653，說(shuō)明我們所合成的幾個(gè)表位肽具有較好的免疫原性，51CR釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NP258266、NP4856、M5866的特異性殺傷率分別為657％、604％、503％【結(jié)論】1采用T細(xì)胞表位預(yù)測(cè)、蛋白酶切位點(diǎn)預(yù)測(cè)、TAP預(yù)測(cè)、分子動(dòng)力模擬構(gòu)成的表位篩選模式對(duì)流感病毒H3N2亞型NP蛋白、M蛋白的HLAA0201限制性CTL表位進(jìn)行預(yù)測(cè)從預(yù)測(cè)結(jié)果中選取NP258266、NP4856、NP189197、M5866、M311等四個(gè)表位進(jìn)行合成。2T2結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示候選肽NP258266、NP4856、M5866的F1值均大于15，親和力較高；穩(wěn)定性結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示表位肽NP258266、NP4856、M5866的半衰期分別均大于1H，表明穩(wěn)定性較好。3酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法ELISPOT法檢測(cè)和51CR殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)候選肽體外刺激HLAA0201陽(yáng)性的健康人PBMC所產(chǎn)生的效應(yīng)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和殺傷活性的結(jié)果顯示NP258266、NP4856、M5866刺激PBMC可以產(chǎn)生較高的T細(xì)胞能特異性的殺傷靶細(xì)胞，并分泌較高水平的IFNΓ。4經(jīng)JENPEP表位數(shù)據(jù)庫(kù)查詢，本實(shí)驗(yàn)所所發(fā)現(xiàn)的表位NP258266、NP4856、M5866為新的流感病毒表位。

簡(jiǎn)介：目的EB病毒（EBV）是一種人類皰疹病毒，其感染非常普遍，是兒童較常見(jiàn)的傳染性單核細(xì)胞增多癥的病因，也與很多其它疾病相關(guān)，迄今尚無(wú)安全、有效的疫苗和治療藥物。人工合成富含非甲基化胞嘧啶（C）鳥嘌呤（G）二核苷酸基序的CPG寡脫氧核苷酸（CPGODN）作為TH1型免疫調(diào)節(jié)劑已用于抗多種病毒和細(xì)菌感染的研究，但尚未見(jiàn)抗EB病毒感染的報(bào)道，本研究初步探討了CPGODN在體外對(duì)該病毒的抑制作用及其可能機(jī)制。方法1、總結(jié)重癥傳染性單核細(xì)胞增多癥（IM）患兒臨床資料；分析重癥IM患兒EBVDNA拷貝數(shù)與血液系統(tǒng)、肝功能和心肌受損程度及其預(yù)后的關(guān)系。2、觀察CPGODN抑制EBV復(fù)制的量效關(guān)系分離健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），設(shè)立空白對(duì)照組，EBV對(duì)照組，CPGODN預(yù)處理組，用25MGL，5MGL，10MGL，20MGL，的CPGODN預(yù)處理48H，感染EBV，24H后用熒光定量PCR（FQPCR）檢測(cè)EBV拷貝數(shù)；3、觀察CPGODN抑制EBV復(fù)制的時(shí)效關(guān)系設(shè)組同上，用10MGL的CPGODN分別預(yù)處理PBMC6H，12H，24H，48H，感染EBV，24H后用FQPCR檢測(cè)EBV拷貝數(shù)；4、觀察CPG誘導(dǎo)Γ干擾素（IFNΓ）產(chǎn)生的量效時(shí)效關(guān)系酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)上述實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)上清液中Γ干擾素（IFNΓ）的水平；5、中和CPG誘導(dǎo)IFNΓ設(shè)組同2，用25MGL，5MGL，10MGL，20MGL的CPGODN預(yù)處理48H后，加入抗IFNΓ單抗（5MGL），再感染EBV，24H后用FQPCR檢測(cè)EBV拷貝數(shù)；6、TLR9和CD21MRNA表達(dá)水平的檢測(cè)設(shè)立空白對(duì)照組，EBV對(duì)照組，CPGODN對(duì)照組，CPGODN預(yù)處理組，采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RTPCR）法檢測(cè)各組PBMC中TLR9和CD21MRNA的表達(dá)水平。結(jié)果1、本組重癥傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒共22例，男12例，女10例；男女比例為121，本組患兒均有多臟器受累，隨著EBVDNA拷貝數(shù)的升高，重癥傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒的紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板均呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)（P〈005）；患兒肝功能ALT、AST、LDH呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)（P〈005）；患兒心肌酶譜HBDH、AST、LDH呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)（P〈005）；2、不同濃度CPGODN預(yù)處理組的EBV拷貝數(shù)均低于未處理組（P005）7、CPGODN預(yù)處理組TLR9MRNA水平明顯高于未處理組（P005）。結(jié)論1、IM主要是由EBV感染引起的急性或亞急性免疫異常性疾病，是兒童常見(jiàn)的病毒性傳染病。重癥IM病情的輕重、多器官受損程度和預(yù)后與EBV拷貝數(shù)有關(guān)。重癥IM除了一般IM所具有的癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查特點(diǎn)外，還可累及多臟器，產(chǎn)生各種并發(fā)癥，因此恢復(fù)緩慢，可達(dá)數(shù)月之久，病程遷延甚至死亡；2、CPGODN在體外對(duì)EBV的復(fù)制具有抑制作用，且這種抑制作用是有劑量依賴性的，在CPGODN的濃度為10MGL時(shí)抑制效果最好，提示CPGODN只有在適當(dāng)劑量才能發(fā)揮抑制病原體的作用；3、CPGODN預(yù)處理48H抗EBV效果最好，隨著CPGODN預(yù)處理時(shí)間的延長(zhǎng)，EBV拷貝數(shù)呈逐漸降低的趨勢(shì)，表明CPGODN抗EBV的作用有時(shí)間依賴性；4、CPGODN可上調(diào)PBMC中TLR9的表達(dá)，但對(duì)PBMC上EBV的受體CD21的表達(dá)無(wú)明顯作用，提示CPGODN對(duì)EBV的抑制是通過(guò)活化TLR9繼而誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生而間接起作用的，而不是通過(guò)直接阻斷EBV在PBMC上的受體CD21起作用的。5、CPGODN誘導(dǎo)細(xì)胞因子IFNΓ同樣具有劑量依賴性和時(shí)間依賴性，其中10MGLCPGODN組和CPGODN預(yù)處理48H組LFNΓ量最高，并且使用抗IFNΓ單抗中和CPGODN預(yù)處理誘導(dǎo)的IFNΓ后，對(duì)EBV的抑制作用明顯下降，提示CPGODN對(duì)EBV的抑制很大程度上是通過(guò)誘導(dǎo)IFNΓ間接起作用的。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文輕度認(rèn)知障礙海馬容積和神經(jīng)生化改變研究姓名許志祥申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師趙永波20090301上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文3上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日

簡(jiǎn)介：固有免疫是機(jī)體抗病毒的第一道防線在機(jī)體被病毒感染后通過(guò)模式識(shí)別相關(guān)受體PATTERNRECOGNITIONRECEPTSPRRS識(shí)別病毒的不同成分從而啟動(dòng)固有免疫系統(tǒng)在感染發(fā)生的幾分鐘內(nèi)受體識(shí)別這些病原體后激活固有免疫系統(tǒng)產(chǎn)生前炎癥因子抗菌肽和Ⅰ型干擾素。Ⅰ型干擾素會(huì)以自分泌和旁分泌的形式與受體結(jié)合并激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。信號(hào)通路激活后干擾素誘導(dǎo)基因ISG的表達(dá)上調(diào)。干擾素誘導(dǎo)基因ISG是固有免疫抗病毒和抗腫瘤作用的主要效應(yīng)分子。干擾素是固有抗病毒的免疫的核心效應(yīng)分子。重組Α干擾素已經(jīng)被應(yīng)用到臨床的抗病毒治療。乙型肝炎病毒HBV是一種雙鏈環(huán)狀DNA病毒它的復(fù)制需經(jīng)過(guò)一個(gè)逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程并可整合到宿主細(xì)胞基因組中引起非細(xì)胞病變性感染。在全球范圍內(nèi)有4億感染者對(duì)人類健康造成極大的危害Α干擾素INTERFERONALPHAIFNΑ是目前少數(shù)臨床治療乙型肝炎有效的藥物之一但對(duì)其抗病毒機(jī)制尚未完全明了。為闡明這一作用機(jī)制復(fù)旦大學(xué)熊偉等應(yīng)用人CDNA微點(diǎn)陣芯片檢測(cè)了人肝腫瘤細(xì)胞HEPG2細(xì)胞和來(lái)源于HEPG2細(xì)胞并整合有HBV基因組的HEPG2215細(xì)胞經(jīng)IFNΑ處理6小時(shí)前后基因表達(dá)譜的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與HEPG2細(xì)胞相比在HBV持續(xù)復(fù)制的HEPG2215細(xì)胞中IFNΑ誘導(dǎo)的髓樣細(xì)胞分化蛋白MYD88的基因表達(dá)顯著降低提示HBV復(fù)制可能抑制MYD88基因的表達(dá)。進(jìn)一步應(yīng)用核苷類似藥物拉米夫定LAMIVUDINE和阿德福韋酯ADEFOVIR抑制HEPG2215細(xì)胞中HBV復(fù)制再用IFNΑ處理細(xì)胞發(fā)現(xiàn)HEPG2215細(xì)胞中MYD88基因的表達(dá)顯著增加由此確認(rèn)HBV可抑制IFNΑ誘導(dǎo)的MYD88基因的表達(dá)這也提示MYD88蛋白可能在IFNΑ誘導(dǎo)的抗HBV效應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。目前已知MYD88蛋白是TOLL樣受體除了TLR3之外其他TLRS均由MYD88蛋白介導(dǎo)信號(hào)傳遞、白介素1受體、白介素18受體介導(dǎo)的信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子由它參與構(gòu)成的信號(hào)級(jí)聯(lián)最終引起核因子KAPPABNUCLEARFACTKAPPABNFKB依賴性信號(hào)通路的活化。目的熊偉等的研究也表明在HEPG2和HUH7中過(guò)表達(dá)MYD88蛋白可降低HBV的復(fù)制水平。并表明過(guò)表達(dá)MYDS8蛋白可以激活NFKB并且MYD88蛋白對(duì)HBV的抑制作用依賴于NFKB的激活。但是MYD88如何激活NFKB以及NFKB激活之后通過(guò)什么方式來(lái)抑制HBV的復(fù)制和蛋白表達(dá)至今還不明了。本課題從MYD88蛋白下游的細(xì)胞因子的產(chǎn)生方面來(lái)探討MYD88蛋白抑制HBV復(fù)制的分子機(jī)制。方法因?yàn)檫@一現(xiàn)象首先在HEPG2215細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)所以在我首先在HEPG2215細(xì)胞中確定MYD88的作用為了解決HEPG2215細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的問(wèn)題我們以連接了MYD88全場(chǎng)序列腺病毒為載體感染HEPG2215細(xì)胞以無(wú)關(guān)的綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTIENGFP作為對(duì)照并用免疫熒光的方法保證了感染的效率48小時(shí)后收細(xì)胞用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA分別檢測(cè)上清中的HBSAG和HBEAG的含量再抽提RNA逆轉(zhuǎn)錄以實(shí)時(shí)熒光定量PCRREALTIMEPCR檢測(cè)HBVRNA水平并用NTHERNBLOTTING確認(rèn)結(jié)果抽提乙肝病毒核心顆粒的DNAHBVCEPARTICLEDNA用REALTIMEPCR檢測(cè)DNA水平并用SOUTHERNBLOTTING確認(rèn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與GFP相比感染了帶有MYD88序列腺病毒的HEPG2215細(xì)胞的上清中的HBSAG和HBEAG的含量以及細(xì)胞內(nèi)RNA的含量以及CEPARTICLEDNA的含量全面下降。結(jié)果MYD88的過(guò)表達(dá)可以激活NFKB依賴的信號(hào)通路而NFKB的活化又可以啟動(dòng)一序列細(xì)胞因子包括白介素和干擾素的轉(zhuǎn)錄由此我們觀察了常見(jiàn)的受NFKB活性調(diào)控的細(xì)胞因子是否受到MYD88的調(diào)節(jié)。由此我們轉(zhuǎn)染了MYD88之后觀察一些細(xì)胞因子的MRNA水平以及上清中分泌的細(xì)胞因子的量結(jié)果發(fā)現(xiàn)和其他細(xì)胞因子相比IL8的表達(dá)水平很高由此我們推測(cè)MYD88抑制HBV的復(fù)制可能與其誘導(dǎo)IL8的分泌相關(guān)。為確認(rèn)這一結(jié)論我們進(jìn)一步測(cè)試這些分泌到上清中的細(xì)胞因子是否在發(fā)揮抗病毒作用我們做了上清轉(zhuǎn)換試驗(yàn)即將轉(zhuǎn)染了空載和MYD88的細(xì)胞培養(yǎng)2448H后上清轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)染了HBV的細(xì)胞上再培養(yǎng)一段時(shí)間然后再檢測(cè)HBV的復(fù)制指標(biāo)結(jié)果表明和轉(zhuǎn)染了MYD88的細(xì)胞上清孵育并不能抑制細(xì)胞內(nèi)HBV的復(fù)制。結(jié)論MYD88上調(diào)的細(xì)胞因子并不能抑制HBV的復(fù)制但這些細(xì)胞因子的具體作用還有待研究。