簡介：研究目的動態(tài)觀察慢性乙型肝炎患者急性發(fā)作后血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST、乙型肝炎病毒DNA、血清免疫球蛋白GIGG和外周血CD3、CD4、CD8T淋巴細(xì)胞百分比含量等指標(biāo)，探討慢性乙型肝炎急性發(fā)作后宿主肝功能損傷、血清HBVDNA清除和免疫功能動態(tài)變化三者之間的關(guān)系，為進(jìn)一步闡明慢性乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制和免疫治療提供理論基礎(chǔ)。方法35例慢性乙型肝炎患者，根據(jù)HBCIGM定性結(jié)果隨機(jī)分為兩組25例HBCIGM陽性者為實驗組；10例HBCIGM陰性者為對照組，分別以賴氏法檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、比色法檢測天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ASPARTATEAMINOTRANSFERASEAST、核酸擴(kuò)增PCR熒光定量檢測乙型肝炎病毒HBVDNA、激光散射比濁法測定血清免疫球蛋白GIGG和熒光素雙標(biāo)記流式細(xì)胞技術(shù)FCM檢測外周血CD3、CD4、CD8T淋巴細(xì)胞百分比含量。統(tǒng)計學(xué)分析用兩組均數(shù)比較的T檢驗；兩組血清HBVDNA原始檢測值和變量變換后均不符合正態(tài)分布，兩組間比較用秩和檢驗。同時動態(tài)觀察了10例HBCIGM陽性患者的血清ALT、AST、HBVDNA、IGG和外周血CD3、CD4、CD8T淋巴細(xì)胞百分比含量等指標(biāo)，313080±1260天后復(fù)查，并將結(jié)果分別與其第一次檢測結(jié)果和前述10例HBCIGM陰性患者的相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行對比分析。HBCIGM陽性患者前后兩次參數(shù)間統(tǒng)計學(xué)分析用配對T檢驗兩組血清HBVDNA拷貝數(shù)取對數(shù)后符合正態(tài)分布，采用配對T檢驗。HBCIGM陽性患者第二次檢查結(jié)果和HBCIGM陰性患者檢查結(jié)果間參數(shù)比較的統(tǒng)計學(xué)分析用兩組均數(shù)比較的T檢驗；兩組血清HBVDNA原始檢測值和變量變換后不符合正態(tài)分布，兩組間比較用秩和檢驗。

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簡介：點擊查看更多國人對知識工作者的認(rèn)知及人際互動特征研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多小學(xué)生認(rèn)知能力的動態(tài)測驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：3分類號UDC牟中唯J『鬣火等碩士學(xué)位論文密級編號焦壘圭掛煎蘭堡壘室羞壅叢盤豎壘魚篁魚基于壓力交互模型理論學(xué)位申請人姓名盞懷龍申請學(xué)位學(xué)生類別全日劌碩士申請學(xué)位學(xué)科專業(yè)應(yīng)圃心理指導(dǎo)教師姓名墨紅主教授⑥碩士學(xué)位論文MASTER’STHESISINFORMATIONALSUPPORTANDCOGNITIVEAPPRAISALOFTHEWORKFAMILYINTERFACEBASEDONTHETRANSACTIONALMODELOFSTRESSACTIONORESSTHESISREQUIREMENTSFORTHEDEGREEMEINAPPLIEDPSYCHOLOGYBYCAOHUAILONGPOSTGRADUATEPROGRAMSCHOOLOFPSYCHOLOGYCENTRALCHINANORMALUNIVERSITYSUPERVISORMAHONGYUACADEMICTITLEPROFESSORAPPROVEDMAY2014

簡介：點擊查看更多HBsAg陰性血清中乙型肝炎病毒標(biāo)志物與HBV DNA的關(guān)系研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：1輪狀病毒致乳鼠感染后輪狀病毒致乳鼠感染后輪狀病毒致乳鼠感染后輪狀病毒致乳鼠感染后IFNIFNIFNIFNΓΓΓΓIL17IL17IL17IL17水平及腸水平及腸水平及腸水平及腸道外損傷的研究道外損傷的研究道外損傷的研究道外損傷的研究STUDYSTUDYSTUDYSTUDYONONONONIFNIFNIFNIFNΓΓΓΓIL17IL17IL17IL17LEVELSLEVELSLEVELSLEVELSEXTRAINTESTINALEXTRAINTESTINALEXTRAINTESTINALEXTRAINTESTINALINJURYINJURYINJURYINJURYAFTERAFTERAFTERAFTERROTAVIRUSROTAVIRUSROTAVIRUSROTAVIRUSINFECTIONINFECTIONINFECTIONINFECTIONININININSUCKLINGSUCKLINGSUCKLINGSUCKLINGMICEMICEMICEMICE論文類別學(xué)術(shù)研究型論文類別學(xué)術(shù)研究型論文類別學(xué)術(shù)研究型論文類別學(xué)術(shù)研究型作者姓名王彥波王彥波指導(dǎo)教師姓名指導(dǎo)教師姓名陳蘭舉陳蘭舉教授教授申請學(xué)位級別申請學(xué)位級別碩士碩士學(xué)位授予單位學(xué)位授予單位蚌埠醫(yī)學(xué)院蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)科專業(yè)兒科學(xué)兒科學(xué)研究方向新生兒急救新生兒急救論文答辯時間論文答辯時間20132013年5月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期20132013年6月2013201320132013年5555月分類號R72密級學(xué)校代碼10367UDC61892編號學(xué)號20106231072答辯委員會主席答辯委員會主席答辯委員會主席答辯委員會主席論論論論文文文文評評評評閱閱閱閱人人人人3學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明本人所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進(jìn)行實驗研究工作所取得的成果，本論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或已經(jīng)獲取得的研究成果。在本論文撰寫中所引用其他研究者的研究內(nèi)容和成果時已在論文中給予特別標(biāo)注和明確說明。對本論文的實驗研究以及論文撰寫過程中給予幫助和建議等貢獻(xiàn)的其他人士，也已作了致謝說明。本人完全理解本聲明的法律責(zé)任，以及所涉及的結(jié)果將由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期年月日關(guān)于學(xué)位論文著作權(quán)的共享聲明根據(jù)中華人民共和國著作權(quán)法和高等院校知識產(chǎn)權(quán)管理條例，本學(xué)位論文，題目輪狀病毒致乳鼠感染后輪狀病毒致乳鼠感染后IFNIFNIFNIFNΓIL17IL17IL17IL17水平及腸道外損傷的研究水平及腸道外損傷的研究，是研究生在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的職務(wù)作品，得到蚌埠醫(yī)學(xué)院相關(guān)部門科室的物質(zhì)技術(shù)和經(jīng)費支持，因此，本學(xué)位論文的著作權(quán)由研究生，導(dǎo)師和蚌埠醫(yī)學(xué)院三方共同享有，均享有署名權(quán)和使用權(quán)等權(quán)益；本學(xué)位論文成果歸屬蚌埠醫(yī)學(xué)院。根據(jù)國家學(xué)位授予條例，學(xué)校對本學(xué)位論文有使用權(quán)，包括保存本學(xué)位論文；因教學(xué)和科研的目的，保留在圖書館被查閱或借閱；學(xué)?？筛鶕?jù)國家規(guī)定將本學(xué)位論文送交國家有部門保留和使用。學(xué)校在公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容時，應(yīng)保障研究生和導(dǎo)師的署名權(quán)等權(quán)益。研究生和導(dǎo)師在公開發(fā)表本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容時必須保障學(xué)校的署名權(quán)等權(quán)益，即在發(fā)表論文時蚌埠醫(yī)學(xué)院及相關(guān)部門科室應(yīng)署名為作者單位。聲明人完全理解本聲明的法律責(zé)任。研究生簽名導(dǎo)師簽名日期年月日

簡介：背景流感可引起季節(jié)性流行和大流行，嚴(yán)重危害人民健康。目前抗流感病毒西藥因毒副作用較大或耐藥性的增加，限制了其應(yīng)用。祖國傳統(tǒng)中醫(yī)藥在預(yù)防與治療流感的臨床和基礎(chǔ)理論方面的研究，受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，尋找新的抗流感中藥及探索其作用機(jī)制，有助于將中藥推向世界和造福人類。目的探討連翹提取物（連翹苷、連翹醇提液、連翹水煎劑）對甲型流感病毒核蛋白基因體外干預(yù)的影響，為連翹抗流感病毒提供科學(xué)的理論依據(jù)。方法1實驗分組HELA細(xì)胞組（HELA細(xì)胞）、空質(zhì)粒組（空質(zhì)粒和HELA細(xì)胞）、脂質(zhì)體組（HELA細(xì)胞和脂質(zhì)體）、重組質(zhì)粒組（重組質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)染HELA細(xì)胞）、連翹苷組（連翹苷加入重組質(zhì)粒組中）、連翹水煎劑組（連翹水煎劑加入重組質(zhì)粒組中）、連翹醇提液組（連翹醇提液加入重組質(zhì)粒組中）七組。2細(xì)胞病變法確定連翹提取物最大無毒界限及實驗用濃度。3脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞，并以其作為實驗用靶細(xì)胞。4膠體金免疫層析試紙法檢測各實驗組細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞內(nèi)核蛋白的表達(dá)。5提取膠體金檢測陰性組及重組質(zhì)粒組細(xì)胞總RNA，合成EDNA。6熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測重組質(zhì)粒組及膠體金檢測陰性組的核蛋白基因拷貝數(shù)，用統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果1重組質(zhì)粒組細(xì)胞培養(yǎng)上清及細(xì)胞內(nèi)膠體金法檢測均為陽性連翹醇提液組、連翹水煎劑組兩組細(xì)胞培養(yǎng)上清為弱陽性，醇提液組更弱些連翹苷組、連翹醇提液組、連翹水煎劑組三組細(xì)胞內(nèi)為弱陽性，連翹苷組最弱，連翹醇提液組次之細(xì)胞對照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組和連翹苷組四組細(xì)胞培養(yǎng)上清及細(xì)胞對照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組三組細(xì)胞內(nèi)均為陰性。2連翹苷組胞內(nèi)核蛋白基因表達(dá)量為（207±02）105COPIESΜL1，重組質(zhì)粒組胞內(nèi)核蛋白基因表達(dá)量為612±13105COPIESΜL1，連翹苷組胞內(nèi)核蛋白基因表達(dá)量低于重組質(zhì)粒組胞內(nèi)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義T9836，P＜005。結(jié)論1連翹苷可以下調(diào)瞬時轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞的甲型流感病毒核蛋白基因量，并能較強(qiáng)的抑制其核蛋白的表達(dá)。2連翹水煎劑及連翹醇提液也能抑制瞬時轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞的甲型流感病毒核蛋白的表達(dá)，但均較連翹苷弱，連翹水煎劑最弱。

簡介：本文通過對目前國內(nèi)幼兒動畫在播放平臺、播放作品、創(chuàng)作者和受眾等多個層面進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)目前我國幼兒動畫作品存在著受眾定位模糊、作品內(nèi)容單一，創(chuàng)作者缺乏幼兒心理認(rèn)知、作品內(nèi)容與受眾斷層等嚴(yán)重問題。通過進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，根本原因在于我國當(dāng)前的幼兒動畫理論研究無法為動畫創(chuàng)作進(jìn)行有效指導(dǎo)，而解決這些問題的最有效手段是在動畫項目的劇本策劃與創(chuàng)作階段，充分研究受眾群體的心理特點，有針對性的展開策劃與創(chuàng)作工作。所以本文通過對幼兒心理認(rèn)知和動畫劇本創(chuàng)作的關(guān)聯(lián)性研究，通過對國內(nèi)外3至6歲幼兒在心理認(rèn)識特征方面的的研究成果，與動畫劇本策劃集創(chuàng)作充分結(jié)合?？偨Y(jié)出在動畫劇本策劃在世界設(shè)定、角色設(shè)定、劇情設(shè)計等方面均能與幼兒的心理認(rèn)知、性格分類、情緒認(rèn)知、思維理解等方面相契合的針對性策劃，繼而進(jìn)行幼兒動畫劇本的創(chuàng)作。最終將研究結(jié)果實踐應(yīng)用于幼兒動畫項目小雞彩虹的劇本策劃與創(chuàng)作中。使該作品在動畫內(nèi)容上，對幼兒的社會性培養(yǎng)、情緒情感培養(yǎng)、生活習(xí)慣培養(yǎng)、個性培養(yǎng)等方面起到輔助和促進(jìn)的作用。

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簡介：病毒性心肌炎VIRALMYOCARDITIS，VMC是由嗜心性病毒感染心肌所致的心肌及其間質(zhì)的局灶性或彌漫性炎癥。是臨床和病理實踐中最常見的一類心肌炎。是臨床常見的心血管系統(tǒng)疾病之一，近年來在成人和青少年中的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。鑒于心肌炎的病因及發(fā)病機(jī)制尚不完全明了，迄今缺乏特效的治療方法許多患者心肌病毒持續(xù)感染，免疫功能持續(xù)紊亂，病情遷延，常遺留頑固性心律失常、慢性心功能不全甚至進(jìn)展為擴(kuò)張性心肌病，治療上更為棘手。病毒性心肌炎的臨床癥狀常不明顯，往往不能引起人們充分的重視，感染波及到心臟傳導(dǎo)組織時，可引起病人的突然死亡，其中兒童患病毒性心肌炎預(yù)后較差，尤其是嬰兒的病死率高達(dá)50％。因此，探索VMC的防治策略具有十分重要的理論價值和實踐意義。TOLL樣受體TOLLLIKERECEPT，TLR是天然免疫針對病原微生物的一類感受器，在天然免疫中發(fā)揮著重要作用，并成為聯(lián)系適應(yīng)性免疫的紐帶。以往對TLR4的研究大多集中在TLR4對細(xì)菌感染的作用。隨著研究的深入，近些年來TLR4在抗病毒免疫中的作用也日益受到關(guān)注。柯薩奇病毒COXSACKIEVIRUS，CV是VMC最常見的病原體。眾多研究表明急性病毒感染可直接損害心肌細(xì)胞，是VMC發(fā)病的重要機(jī)制，因此本實驗研究TLR4、NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在病毒性心肌炎中的表達(dá)及意義，希望通過以上研究為病毒性心肌炎發(fā)生發(fā)病機(jī)制提供某方面的參考，為臨床治療提供某些新的途徑，為心肌炎猝死的病理學(xué)診斷、死因分析提供簡便、實用、可行的監(jiān)測手段和依據(jù)。研究目的從病毒性心肌炎病毒被識別的機(jī)制入手，研究TLR4、NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及其下游CASPASE3及MSTL在病毒性心肌炎發(fā)病機(jī)制的作用。運(yùn)用免疫組化技術(shù)及圖像分析技術(shù)觀察TLR4、NFΚB、CASPASE3及MSTL的表達(dá)分布情況及分析其相關(guān)性。并通過TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測心肌細(xì)胞凋亡的情況，并用RTPCR技術(shù)檢測TLR4的表達(dá)。材料和方法1研究對象篩選并收集中山大學(xué)法醫(yī)鑒定中心2004年2007年的尸體解剖案例中符合要求的30例心臟標(biāo)本作為實驗組。男17例，女13例，年齡在1865歲。實驗組根據(jù)DALLAS標(biāo)準(zhǔn)分為明確性心肌炎組15例和界限性心肌炎組15例。收集廣州市殯儀館2007年由于交通事故死亡后立即解剖的15例正常心臟標(biāo)本作為對照組，其中男7例，女8例。實驗組明確性心肌炎15例界限性心肌炎15例對照組正常心肌組15例。2研究方法21形態(tài)學(xué)觀察對所收集的標(biāo)本均進(jìn)行HE染色并采用免疫組織化學(xué)染色I(xiàn)MMUNOHISTOCHEMISTRY，IHC檢測心肌組織中TLR4、NFΚB、CASPASE3和MSTL的表達(dá)和分布。22TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測對三組樣本進(jìn)行TUNEL細(xì)胞凋亡檢測，檢測心肌細(xì)胞凋亡的情況，并分析各組CASPASE3、MST1與凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性。23RTPCR技術(shù)應(yīng)用RTPCR技術(shù)檢測三組樣本的TLR4受體的表達(dá)情況。3統(tǒng)計學(xué)分析采用統(tǒng)計學(xué)軟件包SPSS130進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差X±S表示，多組均數(shù)比較采用方差分析，P005，NFΚB與CASPASE3的表達(dá)量無相關(guān)關(guān)系R0278，P005，CASPASE3與MST1的表達(dá)量無正相關(guān)關(guān)系R0189，P005。4TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測結(jié)果明確性心肌炎與界限性心肌炎組的凋亡指數(shù)均升高，兩者沒有統(tǒng)計學(xué)差別P005。與正常心肌組相比，明確性心肌炎組與界限性心肌炎組凋亡指數(shù)均升高，均有統(tǒng)計學(xué)意義P005。明確性心肌炎、界限性心肌炎中凋亡指數(shù)AI與CASPASE3的表達(dá)量呈顯著正相關(guān)關(guān)系，MST1與CASPASE3的表達(dá)量呈顯著正相關(guān)關(guān)系，而MST1與AI無顯著相關(guān)關(guān)系。而正常心肌組凋亡指數(shù)AI與CASPASE3、MST1與CASPASE3的表達(dá)、MST1與AI均無顯著相關(guān)關(guān)系。5用RTRCR技術(shù)檢測TLR4的表達(dá)，擴(kuò)增產(chǎn)物為239BP。結(jié)論1TLR4、NFΚB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能在病毒性心肌炎疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。2CASPASE3、MST1在引起病毒性心肌炎心肌細(xì)胞的凋亡過程中發(fā)揮重要作用。同時，CASPASE3作為TLR4、NFΚB的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的下游進(jìn)一步證實該信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在病毒性心肌炎的存在。3抑制TLR4和NFΚB的活化可能成為治療病毒性心肌炎的一個潛在的、有價值的靶點，為病毒性心肌炎提供新的治療途徑；同時也為法醫(yī)學(xué)鑒定提供科學(xué)依據(jù)。

簡介：目的口蹄疫FMD是由口蹄疫病毒FMDV引起的牛、羊、豬等偶蹄動物的種急性、高度接觸性、發(fā)熱性傳染病。FMDV也可感染人類，并表現(xiàn)出與動物類似的臨床癥狀。因此，被世界衛(wèi)生組織WHO把口蹄疫定為人獸共患傳染病。雖然該病已經(jīng)存在了四百多年，但尚不清楚機(jī)體對FMDV的免疫應(yīng)答機(jī)制。樹突狀細(xì)胞DC不僅是動物機(jī)體的哨位細(xì)胞SENTINELCELL，而且還是機(jī)體適應(yīng)性免疫應(yīng)答的啟動者，特別是DC還能夠交叉提呈非復(fù)制性抗原例如滅活的病毒等，故被稱為機(jī)體最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，但目前尚不清楚DC是否參與加工、提呈FMDV抗原。由于國家嚴(yán)格規(guī)定從事口蹄疫活病毒研究必須在生物安全三級實驗室以上的環(huán)境條件下進(jìn)行，因此，本研究以滅活FMDV疫苗為抗原材料，通過觀察口服滅活FMDV疫苗后咽部引流淋巴結(jié)內(nèi)樹突狀細(xì)胞的分布變化，明確DC是否作為FMDV的抗原提呈細(xì)胞參與免疫應(yīng)答，并進(jìn)一步研究DC提呈FMDV抗原的機(jī)制。近年來，F(xiàn)MDV感染模型已經(jīng)在BALBC小鼠成功復(fù)制，因此，如果試驗結(jié)果證實了DC是滅活FMDV的抗原提呈細(xì)胞，將以BALBC小鼠為試驗對象，通過體內(nèi)外試驗，進(jìn)一步探討小鼠樹突狀細(xì)胞向CD4T細(xì)胞和CD8T細(xì)胞提呈滅活FMDV抗原的機(jī)制。適應(yīng)性免疫包括細(xì)胞免疫和體液免疫兩部分。眾所周知，如果沒有細(xì)胞免疫應(yīng)答的適當(dāng)啟動，特別是由CD4T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，體液免疫應(yīng)答就不可能得到建立，而且由CD8T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫也是機(jī)體抵御病毒感染最有效的機(jī)制之一，所以，本研究選用CD4T細(xì)胞和CD8T細(xì)胞作為接受DC提呈抗原的靶細(xì)胞。同時，CD4T細(xì)胞和CD8T細(xì)胞的活化也可作為反映MHCII類分子和MHCI類分子途徑提呈抗原的指標(biāo)。方法FMDV主要經(jīng)消化道、呼吸道和受損傷的皮膚等途徑感染動物，并可在咽部大量繁殖，無論是自然感染動物，還是疫苗接種動物。因此，咽部可能在機(jī)體抗FMDV感染免疫中發(fā)揮特殊重要作用。根據(jù)黏膜免疫學(xué)理論，咽部引流淋巴結(jié)就是咽部黏膜免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)區(qū)，而咽部黏膜就是效應(yīng)區(qū)。1DC與FMDV關(guān)系的確定為探明咽部DC是否參與滅活FMDV抗原的加工與提呈，研究者模擬自然感染途徑給BALBC小鼠口服接種滅活FMDV疫苗，然后，在接種疫苗后不同時間點摘取咽部引流淋巴結(jié)用墨汁追蹤法證實小鼠咽部引流淋巴結(jié)為頸淺淋巴結(jié)，按常規(guī)進(jìn)行固定、脫水、透明和包埋，制備68ΜM厚石蠟組織切片，用兔抗牛S100多克隆抗體對淋巴結(jié)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，觀察頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DC的分布，根據(jù)DC在頸淺淋巴結(jié)內(nèi)的數(shù)量變化與分布變化判斷其是否參與FMDV抗原的提呈。2口服滅活FMDV疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答將36只8周齡BALBC小鼠隨機(jī)分為6組，每組6只。1組、2組、3組、4組、5組小鼠口服滅活A(yù)SIAIO型雙價滅活疫苗100ΜL只，并分別于接種疫苗后24H、48H、72H、96H、120H在無菌條件下收集外周血，制備血清。第6組小鼠口服滅菌PBSPH72緩沖液100ΜL只作為對照。以血清IFNΓ水平為指標(biāo)反映機(jī)體的TH1應(yīng)答和CD8T細(xì)胞應(yīng)答，用ELISA法檢測小鼠對滅活FMDV疫苗的細(xì)胞免疫應(yīng)答。3BALBC小鼠單核細(xì)胞源樹突狀細(xì)胞MODC的制備按常規(guī)方法進(jìn)行，并用免疫細(xì)胞化學(xué)法和流式細(xì)胞術(shù)對其進(jìn)行鑒定。4MODC對滅活FMDV抗原的泛素化作用將滅活FMDV疫苗負(fù)載于MODC，并在RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，然后在不同時間點將MODC裂解，以裂解液為材料進(jìn)行SDSPAGE，轉(zhuǎn)膜后用WESTERNBLOTTING法檢測MODC內(nèi)的泛素化蛋白以及泛素化作用出現(xiàn)的時間。5負(fù)載滅活FMDV的MODC對淋巴結(jié)T細(xì)胞免疫應(yīng)答的啟動作用將負(fù)載了滅活FMDV的MODC與淋巴結(jié)CD4T細(xì)胞和CD8T細(xì)胞在RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行共培養(yǎng)。用抗CD4抗體或抗CD8抗體分別阻斷CD4T細(xì)胞或CD8T細(xì)胞的活化，分別在第9H、12H、24H、36H、48H收集上清液，用ELISA檢測IFNΓ含量。6MODC提呈滅活FMDV抗原的機(jī)制分別用溶酶體抑制劑和蛋白酶體抑制劑處理MODC，2H后將滅活FMDV負(fù)載于MODC，隨即與CD4T細(xì)胞或CD8T細(xì)胞共培養(yǎng)，分別在第9H、12H、24H、48H收集上清液，用ELISA檢測其IFNΓ的含量。結(jié)果1DC與FMDV關(guān)系的確定小鼠頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DC的數(shù)量在口服FMDV滅活疫苗24H后開始增多，散在分布于皮質(zhì)區(qū)內(nèi)。48H后小鼠頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DC的數(shù)量明顯增多，并且主要分布于副皮質(zhì)區(qū)。在72H后，咽部DC向頸淺淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)的遷移達(dá)到頂峰，依然聚集在副皮質(zhì)區(qū)。至96H，頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DC的數(shù)量急劇下降，在皮質(zhì)區(qū)和副皮質(zhì)區(qū)內(nèi)只有少量DC呈現(xiàn)散在分布狀，此即樹突狀細(xì)胞疲勞。然而，120H后，頸淺淋巴結(jié)內(nèi)DC的數(shù)量再次增多，且主要分布于皮質(zhì)區(qū)。而PBS對照組未見類似改變。這說明DC就是FMDV的抗原提呈細(xì)胞。2口服滅活FMDV疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答接種疫苗24H后，小鼠血清內(nèi)的IFNΓ量開始升高101568±04689，但與PBS對照組相100512±00684比差異不顯著P005，而48H后，接種疫苗組小鼠血清內(nèi)的IFNΓ量明顯升高107161±02199，與PBS對照組100748±00571相比，差異極顯著P005。這表明口服滅活FMDV疫苗所誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答與DC向引流淋巴結(jié)內(nèi)的遷移模式相一致。3BALBC小鼠MODC的制備免疫細(xì)胞化學(xué)試驗和流式細(xì)胞術(shù)檢測均顯示，本試驗所制備的MODC純度大于99％。4MODC對滅活FMDV抗原的泛素化作用所有負(fù)載滅活FMDVMODC中均發(fā)生了FMDV抗原的泛素化現(xiàn)象，而未負(fù)載滅活FMDV的MODC中泛素化蛋白質(zhì)檢測則呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。在負(fù)載滅活FMDV疫苗05H后，MODC內(nèi)就出現(xiàn)了泛素化FMDV蛋白，分子量大約為75KD；3H后，泛素化蛋白含量稍有增加，但從不同時間點來看，泛素化蛋白含量變化趨勢不明顯。5MODC提呈滅活FMDV抗原的機(jī)制在滅活FMDV負(fù)載MODC與CD4T細(xì)胞共培養(yǎng)9H即有大量IFNΓ產(chǎn)生，而與FMDV負(fù)載MODC共培養(yǎng)的CD8T細(xì)胞在受到抗原刺激后24H才大量釋放IFNΓ。用溶酶體抑制劑或蛋白酶體抑制劑分別處理MODC，2H后再分別與CD4T細(xì)胞或CD8T細(xì)胞共培養(yǎng)，按前述方法檢測上清液中IFNΓ的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種抑制劑均在共培養(yǎng)后9H顯著抑制CD4T細(xì)胞產(chǎn)生IFNΓ。值得注意的是，溶酶體抑制劑顯著抑制滅活FMDV負(fù)載DC刺激CD8T細(xì)胞產(chǎn)生IFNΓ的能力，而蛋白酶體抑制劑卻促進(jìn)CD8T細(xì)胞產(chǎn)生IFNΓ，但是，同時用兩種抑制劑處理DC，CD8T細(xì)胞產(chǎn)生IFNΓ的能力又顯著下降。這些復(fù)雜現(xiàn)象提示MODC主要以交叉提呈抗原的方式激活淋巴結(jié)T細(xì)胞，并以產(chǎn)生IFNΓ為特征。但是，CD8T細(xì)胞產(chǎn)生IFNΓ的時間明顯晚于CD4T細(xì)胞，并且IFNΓ釋放也呈現(xiàn)多樣性。結(jié)論1咽部DC是滅活FMDV的抗原提呈細(xì)胞，但在DC捕獲滅活FMDV抗原后的遷移過程中表現(xiàn)出“疲勞”特征DENDRITICCELLEXHAUSTION。2小鼠口服接種滅活FMDV疫苗可以誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，并以產(chǎn)生IFNΓ為特征。3滅活FMDV抗原被DC捕獲后發(fā)生了兩種不同的泛素化現(xiàn)象，即多鏈泛素化和單鏈泛素化。但泛素化FMDV蛋白質(zhì)抗原主要被FK2抗體標(biāo)記，而FK1抗體標(biāo)記的較少。由于FK1只特異性地結(jié)合多鏈泛素化蛋白質(zhì)，F(xiàn)K2則同時結(jié)合單鏈泛素化蛋白質(zhì)和多鏈泛素化蛋白質(zhì)，并且二者都不與游離的泛素結(jié)合。所以，滅活FMDV蛋白質(zhì)抗原主要在DC內(nèi)被多鏈泛素化。4泛素化的FMDV蛋白質(zhì)抗原既可被蛋白酶體降解，也可在溶酶體內(nèi)被加工處理，所產(chǎn)生的抗原肽主要以交叉提呈的方式提呈給CD4T細(xì)胞或CD8T細(xì)胞。CD4T細(xì)胞只能識別裝載著抗原表位的MHCII類分子，所以，溶酶體抑制劑造成的IFNΓ含量顯著下降清楚地表明，DC能夠以溶酶體MHCII類分子途徑按常規(guī)提呈FMDV抗原。而蛋白酶體抑制劑對CD4T細(xì)胞分泌IFNΓ的強(qiáng)大抑制作用則提示，DC內(nèi)還可能存在以蛋白酶體MHCII類分子途徑交叉提呈FMDV抗原的機(jī)制。并且CD4T細(xì)胞被抗原肽激活后主要分化為TH1細(xì)胞亞類，分泌高水平的IFNΓ。從上述結(jié)果不難看出，F(xiàn)MDV負(fù)載的DC則主要以“內(nèi)吞小體溶酶體MHCI類分子途徑”交叉提呈抗原肽給CD8T細(xì)胞，從而啟動CTL應(yīng)答。與DC遷移疲勞現(xiàn)象一致，CD8T細(xì)胞產(chǎn)生IFNΓ的能力在被活化后48H顯著下降，也呈現(xiàn)出向抑制的應(yīng)答疲勞狀態(tài)。

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簡介：腸道病毒71型EV71屬于小RNA病毒科（PICNAVIRDAE），腸道病毒屬（ENTEROVIRUS，EV）。EV71是導(dǎo)致手足口病HFMD最為常見的病原體之一，通常引起患者手、足、口腔等部位皮膚粘膜的皮疹、皰疹，可自愈。個別可累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，主要表現(xiàn)為無菌性腦膜炎、腦干腦炎、脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹等，以嬰幼兒和5歲以下兒童感染為主，致殘及病死率較高1。近年來EV71病毒感染在亞太國家和地區(qū)的流行呈上升趨勢。然而，目前仍沒有特效的藥物或疫苗用于EV71感染的防治，EV71的致病機(jī)制也不明了。動物模型是進(jìn)行病毒致病機(jī)制、感染特點的研究和病毒疫苗及藥物療效評價的重要手段，但目前尚未找到可用于EV71研究的動物模型。本研究針對目前我國EV71動物模型方面研究的匱乏與病毒分子機(jī)制研究的需要，運(yùn)用分離自山東臨沂手足口病患兒的EV71分離株SDLY107與SDLY11株進(jìn)行實驗，以期建立一個不同毒力表型分離株的EV71動物感染模型，旨在探討EV71不同毒力表型分離株引起不同臨床表現(xiàn)的原因。本次研究采用EV71山東分離株SDLY107死亡患兒分離株、SDLY11（儀表現(xiàn)皮疹和發(fā)熱的輕癥患兒分離株）分別對1日齡，2周齡ICR乳鼠經(jīng)腹腔注射感染，同時對感染小鼠進(jìn)行了臨床表現(xiàn)、病原學(xué)、病毒分子生物學(xué)和病理學(xué)等方面的研究，從而建立起EV71不同毒力表型分離株小鼠感染模型，對今后開展EV71毒力相關(guān)致病機(jī)制的研究具有重要意義。目的1比較EV71輕重癥分離株感染不同日齡ICR小鼠后的感染特點，為進(jìn)一步研究EV71感染后引起不同癥狀的原因提供依據(jù)。2用本實驗室建立的SYBRGREENⅠ實時熒光定量RTPCR測定EV71RNA病毒拷貝數(shù)的方法，檢測EV71輕、重癥分離株分別感染1日齡和2周齡小鼠后肌肉組織EV71RNA拷貝數(shù)，評價輕、重癥分離株在小鼠體內(nèi)復(fù)制情況的差異。3ELISA試驗法逐日測定1日齡和2周齡小鼠血清中EV71抗體滴度，評價輕、重癥分離株病毒分別感染后宿主的抗體生成情況，從而判斷病毒在宿主體內(nèi)的中和情況，為進(jìn)一步研究SDLY107與SDLY11感染小鼠后產(chǎn)生不同毒力的原因提供依據(jù)。方法1采用EV71山東分離株SDLY107死亡患兒分離株、SDLY11（僅表現(xiàn)皮疹和發(fā)熱的輕癥患兒分離株）分別對1日齡，2周齡ICR乳鼠經(jīng)腹腔注射感染（CCID50均為104）。2將動物按日齡及處理方式分組，分別為1日齡SDLY107株實驗A組、1日齡SDLY107株實驗B組、1日齡SDLY11株實驗C組、1日齡SDLY11株實驗D組、1日齡對照組E組、2周齡SDLY107株實驗F組、2周齡SDLY107株實驗G組、2周齡SDLY11株實驗H組、2周齡SDLY11株實驗Ⅰ組2周齡對照組J組，每組5～10只，通過腹腔注射途徑感染，其中對照組用生理鹽水感染。3病毒接種后觀察小鼠臨床表現(xiàn)并于3D、4D、5D、6D、7D采集1日齡SDLY107株實驗A組、1日齡SDLY11株實驗C組、2周齡SDLY107株實驗F組、2周齡SDLY11株實驗H組肺、腦、腸、肌肉組織。4將1日齡SDLY107株實驗B組、1日齡SDLY11株實驗D組、2周齡SDLY107株實驗G組、2周齡SDLY11株實驗Ⅰ組、1日齡對照組E組及2周齡對照組F組小鼠連續(xù)兩周每天取一只摘眼球取血，用間接ELISA試驗法檢測小鼠血清抗體滴度，并取其肌肉組織進(jìn)行病毒拷貝數(shù)的測定。5建立SYBRGREENⅠ熒光染料實時定量RTPCR測定EV71病毒載量的方法。使用含有目的序列RNA標(biāo)準(zhǔn)品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時對該方法的特異性、靈敏度、重復(fù)性進(jìn)行評估，并對小鼠體內(nèi)各組織中的病毒拷貝數(shù)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。結(jié)果1ICR1日齡乳鼠和2周齡乳鼠分別經(jīng)腹腔注射感染SDLY107、SDLY11分離株后，SDLY107分離株感染的乳鼠表現(xiàn)出明顯的癥狀，包括豎毛、弓背、消瘦、肢體麻痹，SDLY11分離株感染的乳鼠癥狀明顯較輕，對照組（生理鹽水）乳鼠無明顯變化。各組織病理檢查發(fā)現(xiàn)，SDLY107與SDLY11感染的乳鼠各臟器均表現(xiàn)出病理變化，SDLY107病理變化更明顯，對照組未觀察到病理變化。2建立了SYBRGREENⅠ熒光染料實時定量RTPCR法測定EV71病毒RNA拷貝數(shù)的方法。該方法敏感性高、穩(wěn)定性好，可用于EV71病毒RNA的定量測定。實時熒光定量RTPCR檢測結(jié)果表明，SDLY107在各組織中的病毒載量均高于SDLY11，肌肉組織中病毒載量最高。感染SDLY107的1日齡乳鼠肌肉組織病毒拷貝數(shù)于5D達(dá)到最高值，為602104COPIESΜL。感染SDLY11的1日齡乳鼠肌肉組織病毒拷貝數(shù)于7D達(dá)到最高值，為327104COPIESΜL。3ELISA結(jié)果顯示，隨著感染天數(shù)的增加，小鼠血清抗體的A值檢出增加，其中1日齡小鼠的血清抗體A值最高出現(xiàn)在7D，2周齡小鼠的血清抗體A值最高出現(xiàn)在8D。2周齡小鼠的血清產(chǎn)生抗體水平明顯高于1日齡小鼠。相同日齡小鼠感染SDLY107和SDLY11，血清抗體A值具有相同的趨勢。結(jié)論1不同毒力表型的分離株在ICR乳鼠感染中表現(xiàn)出不同致病能力。2不同毒力表型的分離株在ICR乳鼠體內(nèi)表現(xiàn)出不同的復(fù)制能力。這種復(fù)制能力的不同可能與感染后引起不同臨床表型有關(guān)，而復(fù)制能力的改變可能取決于病毒自身與復(fù)制有關(guān)的區(qū)域關(guān)鍵氨基酸突變，也與宿主自身產(chǎn)生抗體對病毒的消除作用有關(guān)。3本研究建立的SYBRGREENⅠ熒光染料實時定量RTPCR法測定EV71病毒RNA拷貝數(shù)的方法。該方法敏感性高、穩(wěn)定性好，可用于EV71病毒RNA的定量測定，為評價動物體內(nèi)病毒載量、建立動物模型及疫苗和藥物的研發(fā)打下了基礎(chǔ)。

簡介：論文題目高危型人乳頭瘤病毒檢測在宮頸癌及其癌前病變中的I晦床意義THECIINICAI8I即JFICANCEONTHEEXPRESSIONOFHRHPVINTHECERVJCAICAREINOMAANDITSPRECANCEROUSIESIONS作者專業(yè)導(dǎo)師合作導(dǎo)師2011年5月8日目錄中文摘要?????????????????????????????L英文摘要?????????????????????????????3符號說明??’???????????????????????????5前言???????????????????????????????6刖吾?””??“?“????????????????????????。6資料與方法????????????????????????????8結(jié)果??????????????????????????????1L討論???????一?????????????????????”13結(jié)論?????I????????????????????????17參考文獻(xiàn)?????????????????????????????18綜述?????????????????????????????21綜述參考文獻(xiàn)．．．?????????????????????????29致謝??????????????????????????????33