簡(jiǎn)介：本課題對(duì)牛蒡子醇提液、將牛蒡子醇提的銀翹散制劑及牛蒡子甙元的抗流感病毒作用，進(jìn)行體內(nèi)、外研究，希望能夠通過(guò)改進(jìn)牛蒡子的提取工藝，研制療效更好的新銀翹散制劑，或從牛蒡子中發(fā)現(xiàn)具有療效可靠、質(zhì)量可控、成分單一的新的抗流感病毒植物藥制劑。通過(guò)改進(jìn)牛蒡子的提取工藝，可以提高銀翹散的療效，從牛蒡子中可以提取出預(yù)防和治療流感的成分，通過(guò)本研究，可以從兩方面對(duì)抗流感中成藥或植物藥制劑進(jìn)行更加深入的研究對(duì)其單味藥或復(fù)方的制劑工藝進(jìn)行改進(jìn)；對(duì)牛蒡子有效成分的提取方法進(jìn)一步進(jìn)行研究，并對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，以期發(fā)現(xiàn)療效可靠的植物單體。

簡(jiǎn)介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文慢病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因小鼠制備技術(shù)研究姓名劉勤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師魏泓20080501第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文肝細(xì)胞、早期胚胎細(xì)胞等，用LV制作的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物有小鼠、大鼠、豬，牛等。LV的優(yōu)勢(shì)在于1轉(zhuǎn)染效率高，能夠感染分裂期和靜息期細(xì)胞，能轉(zhuǎn)染多種組織；2整合到宿主基因組中的目的基因能持久穩(wěn)定的表達(dá)，不易形成嵌合體，一般能自然繁殖傳代3LV經(jīng)改構(gòu)后，不在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖，也不會(huì)導(dǎo)致寄主細(xì)胞的死亡，免疫源性極小，生物安全性高。LV用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型制備也有一定的局限性1一是制備難度較大，不易獲得高滴度、高純度的病毒；2L、，在宿主基因組上的整合一般是隨機(jī)的，可能干擾插入位點(diǎn)及其附近基因表達(dá)；3雖可通過(guò)控制病毒的滴度來(lái)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)入基因的拷貝數(shù)，但是不容易實(shí)現(xiàn)整合拷貝數(shù)的精確控制；4攜帶目的基因的容量較小90％1178／1189，說(shuō)明包裝的病毒成功并高效地轉(zhuǎn)染小鼠胚胎；2將注射后發(fā)育至2細(xì)胞的胚胎通過(guò)輸卵管壺腹部穿刺移植法移植后，假孕母鼠妊娠率為428％12／28，很大程度上避免了傘部移植法出血導(dǎo)致的胚胎存活率下降，提高了移植成功率；3EGFP首建鼠陽(yáng)性率為608％73／120、轉(zhuǎn)基因小鼠的總體研制效率轉(zhuǎn)基因小鼠數(shù)／注射胚胎數(shù)為50％73／1453，說(shuō)明卵周隙顯微注射對(duì)胚胎2一細(xì)胞卵6

簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文腺相關(guān)病毒介導(dǎo)內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)移抑制角膜新生血管的研究姓名湯明芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師陸曉和20080428中文摘要害作用，免疫反應(yīng)小，能有效地轉(zhuǎn)導(dǎo)分裂、非分裂細(xì)胞，產(chǎn)生長(zhǎng)期基因表達(dá)。近來(lái)研究證實(shí)重組腺相關(guān)病毒用于眼部轉(zhuǎn)基因可長(zhǎng)期表達(dá)，已用于多種視網(wǎng)膜細(xì)胞，包括光感受器、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、MTILLER氏細(xì)胞和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。以往研究結(jié)果顯示RAAVL、RAAV5在人、鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞和鼠動(dòng)脈段轉(zhuǎn)基因時(shí)較RAAV2、RAAV3、RAAV4具有更高的轉(zhuǎn)染效率和更好的表達(dá)。而且RAAVL轉(zhuǎn)染人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞HASMC時(shí)也優(yōu)于其他血清型腺相關(guān)病毒載體。其結(jié)果提示重組腺相關(guān)病毒載體1、5是獨(dú)特的、有潛力的血管靶基因治療的載體。RAAV是迄今為止公認(rèn)的最具廣泛應(yīng)用前景的病毒載體。本研究擬用RAAVL載體攜帶內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染角膜基質(zhì)細(xì)胞和ECV304細(xì)胞，來(lái)抑制角膜新生血管增生。因此，展開(kāi)以下研究1利用RAAVL載體攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP基因轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的角膜基質(zhì)細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304細(xì)胞株；檢測(cè)RAAVL的轉(zhuǎn)染率。2單純和聯(lián)合采用結(jié)膜下注射RAAVLEGFP轉(zhuǎn)染液或轉(zhuǎn)染液局部浸泡角膜的途徑轉(zhuǎn)移基因，通過(guò)整體熒光體視鏡和激光共聚焦顯微鏡的觀察、監(jiān)測(cè)R從V1EGFP在活體動(dòng)物模型中角膜上的表達(dá)，驗(yàn)證此轉(zhuǎn)染途徑的有效性。3以RAAVL攜帶的人內(nèi)皮抑素ES基因?qū)虢悄せ|(zhì)細(xì)胞和ECV304細(xì)胞中；分析轉(zhuǎn)染RAAVJES后細(xì)胞中ES蛋白表達(dá)、分泌及對(duì)ECV304細(xì)胞和角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的影響。4建立炎性大鼠CNV的動(dòng)物模型，觀察單獨(dú)和聯(lián)合使用轉(zhuǎn)染液RAAVLES結(jié)膜下注射及局部浸泡去上皮角膜途徑轉(zhuǎn)染RAAVLES對(duì)角膜新生血管增生的抑制作用。本研究目的是為基因轉(zhuǎn)染角膜選擇具有廣泛應(yīng)用前景的病毒載體；為轉(zhuǎn)基因治療角膜新生血管病變提供簡(jiǎn)便的、更有效的轉(zhuǎn)染途徑。方法1細(xì)胞培養(yǎng)采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞。取6只SD大鼠角膜，刮去角膜上皮層，分離外周組織，自角膜緣剪下12MM寬的角膜組織條。用PBS液清洗，

簡(jiǎn)介：目的犬傳染性肝炎（ICH）是由犬腺病毒Ⅰ型（CAV1）引起的一種急性敗血性傳染病。該病以1歲以?xún)?nèi)的幼犬為多發(fā)，發(fā)病率和死亡率相對(duì)較高，對(duì)我國(guó)實(shí)驗(yàn)犬的飼養(yǎng)、毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前主要通過(guò)定期接種弱毒疫苗預(yù)防本病發(fā)生，但是弱毒疫苗存在毒力回升、生產(chǎn)成本較高、終生需要定期免疫的缺點(diǎn)。本研究將LOOP基因克隆到真核表達(dá)載體PVAX1，構(gòu)建核酸疫苗PVAX1LOOP，用RTPCR的方法檢測(cè)LOOP基因的表達(dá)，用WESTERNBLOTTING和激光掃描共聚焦顯微鏡鑒定LOOP蛋白的表達(dá)，用重組質(zhì)粒PVAX1LOOP免疫BALBC小鼠，并檢測(cè)其誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的細(xì)胞及體液免疫效果。方法⑴提取犬腺病毒的DNA，以其為模板擴(kuò)增LOOP1和LOOP2片段，同時(shí)通過(guò)引物設(shè)計(jì)在LOOP1片段兩端引入BAMHⅠ、SMAⅠ酶切位點(diǎn)，在LOOP2片段兩端引入SMAⅠ、XHOⅠ酶切位點(diǎn)。將LOOP1和LOOP2的PCR產(chǎn)物回收后用SMAⅠ進(jìn)行酶切，純化，將純化后片段在16℃進(jìn)行連接。⑵重組質(zhì)粒的大量提取取真核重組質(zhì)粒陽(yáng)性克隆重組菌接種于2YT液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)36H；離心收集細(xì)菌沉淀。采用SDS堿裂解法大量提取重組質(zhì)粒PVAX1LOOP。⑶ELISA測(cè)定血清抗體效價(jià)免疫3次后的小鼠斷尾采血，分離血清，以犬傳染性肝炎病毒抗原每孔100ΜGML包被酶標(biāo)板，4℃過(guò)夜。洗滌封閉后加稀釋的小鼠血清100ΜL，孵育60MIN后洗滌加HRP標(biāo)記的二抗孵育60MIN，OPD顯色。酶標(biāo)儀492NM波長(zhǎng)處測(cè)吸光度值。結(jié)果①目的基因與真核表達(dá)載體經(jīng)酶切及PCR鑒定，構(gòu)建成功。②PVAX1LOOP轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞后，用RTPCR的方法檢測(cè)到預(yù)期的特異性條帶。③PVAX1LOOP轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞后，激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察到表達(dá)蛋白顯著的熒光強(qiáng)度。④PVAX1LOOP轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞后，WESTERNBLOTTING結(jié)果顯示表達(dá)蛋白與抗LOOP抗體有特異性結(jié)合。⑤間接ELISA檢測(cè)顯示，各實(shí)驗(yàn)組小鼠所產(chǎn)生的抗體血清OD值明顯高于注射空質(zhì)粒PVAX1的對(duì)照組A組（P結(jié)論⑴成功構(gòu)建真核表達(dá)載體PVAX1LOOP。⑵PVAX1LOOP轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞后能夠表達(dá)LOOP蛋白。⑶PVAX1LOOP免疫BALBC小鼠，成功誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了特異性的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。

簡(jiǎn)介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文考試焦慮者注意偏向的認(rèn)知與神經(jīng)機(jī)制姓名劉瑩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)習(xí)科學(xué)指導(dǎo)教師周仁來(lái)20080522東南人學(xué)碩士學(xué)位論文COGNITIVEANDNEURALBASISOFATTENTIONALBIASINTESTANXIETYSTUDENTSABSTRACTAUTHORLIUYINGSUPERVISORPROFESSORZHOURENLAISOUTHEASTUNIVERSITYTESTANXIETYISAKINDOFSITUATIONRELATEDTRAITANXIETYTESTANXIOUSINDIVIDUALSAREMORESUSCEPTIBLETOINTERFERENCEORDISTRACTIONFROMEXTERNALTASKIRRELEVANTINFORMATIONALTHOUGHTHISISGENERALLYASSUMEDTHATTESTANXIETYINCREASESSUSCEPTIBILITYTODISTRACTION，THEREAREFEWEXPERIMENTALSTUDIESTHATHAVEDIRECTLYEXPLOREDTHECOGNITIVEANDNEURALMECHANISMSTHATMAYBEINVOLVEDTHENASERIESOFBEHAVIORALEXPERIMENTSANDANERPEXPERIMENTUSINGAMODIFIEDCUEINGTASKWERECONDUCTEDTOEXPLORESUCHBASISTHERESULTSOFBEHAVIOREXPERIMENTSSHOWTHATHIGHERTESTANXIETYINDIVIDUALSWERESLOWERWHENRESPONDINGTOTARGETSFOLLOWINGTHEINVALIDTESTRELATEDTHREATENINGWORDS，COMPAREDTOTHEINVALIDNONTHREATENINGWORDSITREVEALSTHATIMPAIREDATTENTIONALDISENGAGEMENTEXISTSINTHEHIGHERTESTANXIETYINDIVIDUALSINADDITION，ERPSTIMEBLOCKEDTOTHEVALIDTARGETONSETREVEALEDACICOMPONENTTHATWASGREATERFORTESTRELATEDTHREATTHANNONTHREATENINGWORDSANDWHOSELATENCYWASSHORTERFORTHREATENINGTHANNONTHREATENINGWORDSINHJIGHTESTANXIETYSTUDENTSTHESESUGGESTTHEEXISTINGOFTHEINCREASEDATTENTIONFORTHETARGETSAFTERTHETESTRELATEDTHREATANDEARLIERATTENTIONALENGAGEMENTFORTHETARGETSAFTERTHETHREATANDTHESEMAYBETHEREFLECTIONOFTHEATTENTIONALVIGILANCETOTHREATWORDINTHEHIGHGROUPERPSTIMEBLOCKEDTOTHEVALIDTARGETONSETALSEVEALEDAP1COMPONENTTHATWASSMALLERFORTHREATENINGTHANNONTHREATENINGWORDSINTHEHI【GHGROUP，REFLECTINGTHEIMPAIRMENTOFATTENTIONOFTHETARGETAFTERTHETHREATENINGWORDSINTHISPERIODTHENTHEP3COMPONENTSINALLTHESEDIFFERENTCUEINGCONDITIONSWERECOMPAREDTHERESULTSREVEALTHATTHEMEANAPTITUDEOFTHEP3COMPONENTWASSMALLERAFTERTHETESTRELATEDANDIRRELEVANTTHREATENINGCUESTHANTHOSENONTHREATENINGWORDSINTHEHI【GHTESTANXIETYINDIVIDUALS，WHILEONLYTHEAPTITUDEAFTERTESTIRRELEVANTTHREATENINGCUESWASSMALLERINTHELOWTESTANXIETYSTUDENTSTHISSUGGESTSTHEPROSPECTIVEOFAPPLYINGP300TOTHECLINICALDISCRIMINATIONFORTESTANXIETYERPSTIMEBLOCKEDTOTHEINVALIDTARGETONSETREVEALEDTHATTHEVISUALPROCESSWASSTRONGERFORTHENEURALTARGETINTHEOPPOSITESIDEOFTESTRELATEDTHREAT，ANDSUCHPROCESSWASWEAKERFORTHETARGETAPPEAREDINTHEOPPOSITESIDEOFTESTIRRELEVANTTHREATENINGWORDSINTHELOWGROUPTHISMAYREFLECTSTHEATTENTIONALAVOIDANCEFORTESTRELATEDTHREATANDTHEIMPAIRMENTOFATTENTIONALDISENGAGEMENTFORTESTIRRELEVANTTHREATINTHELOWTESTANXIETYSTUDENTSKEYWORDSTESTANXIETYADOLESCENTATTENTIONALBIASEVENTRELATEDPOTENTIALSII

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)密級(jí)Y984457單位代碼≯牟22學(xué)號(hào)2，|略8嬸厶茹另孥碩士學(xué)位論文SHANDONGUNIVERSITYMASTERSTHESIS論文題目學(xué)輪孓嬲槲乎危銻批略扣判繃對(duì)屏咖礴瑟稠王旃作吊作者姓名基塹叢專(zhuān)業(yè)鹵盤(pán)I地指導(dǎo)教師姓名到童客專(zhuān)業(yè)技術(shù)職務(wù)盤(pán)嬡J口∥6年S其O日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的端粒酶抑制基因?qū)Ω伟┰鲋车蛲龅淖饔么T士研究生馬進(jìn)財(cái)專(zhuān)業(yè)消化內(nèi)科導(dǎo)師劉吉勇中文摘要目的以逆轉(zhuǎn)錄病毒作為載體，將端粒酶抑制基因?qū)敫伟┘?xì)胞，研究其對(duì)肝癌體內(nèi)外生長(zhǎng)的抑制作用，為肝癌的基因治療提供新途徑。方法使用逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體PLXSN構(gòu)建的真核表達(dá)重組質(zhì)粒PLXSNHTR，攜帶反義端粒酶RNA基因，將其用電穿孔的方法轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞PT67細(xì)胞，G418篩選抗性細(xì)胞，獲取陽(yáng)性細(xì)胞克隆株，即穩(wěn)定表達(dá)病毒的產(chǎn)病毒細(xì)胞株，收集細(xì)胞上清液，濃縮得到重組逆轉(zhuǎn)錄病毒，用NIH3T3細(xì)胞測(cè)定病毒滴度。將濃縮后的病毒直接感染人肝癌細(xì)胞株BEL一7402，PCR檢測(cè)目的基因的插入，端粒酶反義RNA組分整合入肝癌細(xì)胞基因組中，通過(guò)其在細(xì)胞內(nèi)與HTR結(jié)合而抑制肝癌細(xì)胞端粒酶活性，從而抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，并促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、MTT法與流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率和凋亡情況。采用BEL7402細(xì)胞株建立裸鼠人肝癌皮下移植瘤模型。待腫瘤長(zhǎng)至約5MM時(shí)采用隨機(jī)數(shù)字法將裸鼠分為A、B、C、D、E、F6組，分別給每組裸鼠腹腔注射5FU、生理鹽水、5FU、5FU、生理鹽水、生理鹽水，同時(shí)分別局部注射質(zhì)粒BAMHL、質(zhì)粒BAMHL、生理鹽水、質(zhì)粒屁口RL、質(zhì)粒DRL、生理鹽水。隔日注藥～次，共三次。測(cè)量腫瘤體積，繪制各組腫瘤的生長(zhǎng)曲線，計(jì)算抑瘤率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，對(duì)移植瘤組織進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察瘤組織的形態(tài)學(xué)改變，TUNEL法檢測(cè)瘤組織內(nèi)腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)。結(jié)果反義端粒酶RNA基因和5FU均能抑制BEL7402的體外、體內(nèi)生長(zhǎng)，兩者聯(lián)合應(yīng)用能明顯增加療效從細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，MTT均可以看出A組抑制最明顯。反義端粒酶RNA基因和5FU能不同程度引起B(yǎng)EL7402細(xì)胞的體內(nèi)、體外凋亡壞死。流式細(xì)胞顯示A組7171253％，B組6132224％，

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多河北省部分地區(qū)人巨細(xì)胞病毒激活感染的現(xiàn)狀與分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：本研究分為四部分第一部分、全長(zhǎng)及不同片段缺失型PAP基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建目的構(gòu)建全長(zhǎng)和不同片段缺失型PAP基因的真核表達(dá)質(zhì)粒，為研究PAP抗HBV的活性區(qū)域奠定基礎(chǔ)。方法以含全長(zhǎng)PAP基因的質(zhì)粒PGEMPAP為模板，設(shè)計(jì)3對(duì)引物，PCR擴(kuò)增全長(zhǎng)及不同片段缺失型PAP基因，TA克隆到PMD18T載體中，經(jīng)PCR、酶切、測(cè)序確證后，將它們用BAMHⅠ和HINDⅢ雙酶切后，以正確讀碼框插入到經(jīng)同樣酶切的帶有HA標(biāo)簽的真核表達(dá)載體PXF3H中，獲得真核表達(dá)質(zhì)粒PXF3HPAP12、PXF3HPAP14、PXF3HPAP34。以PCR和酶切方法篩選鑒定陽(yáng)性重組質(zhì)粒并測(cè)序驗(yàn)證。結(jié)果構(gòu)建的全長(zhǎng)及不同片段缺失型PAP基因的真核表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和DNA測(cè)序，表明各基因正確地插入到真核表達(dá)載體PXF3H中，且密碼子閱讀框正確。結(jié)論成功地構(gòu)建了全長(zhǎng)和不同片段缺失型PAP基因的真核表達(dá)質(zhì)粒。第二部分、全長(zhǎng)PAP基因真核表達(dá)質(zhì)粒體外抑制HBV復(fù)制的研究目的了解全長(zhǎng)PAP基因真核表達(dá)質(zhì)粒在DNA水平、RNA水平、蛋白質(zhì)水平體外對(duì)HBV的抑制作用。方法利用脂質(zhì)體將全長(zhǎng)PAP基因真核表達(dá)質(zhì)粒PXF3HPAP12和具有復(fù)制能力的13倍HBV克隆PHBV13共轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，轉(zhuǎn)染72H后收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清。SOUTHERNBLOT檢測(cè)HBV核衣殼相關(guān)DNA含量，NTHERNBLOT檢測(cè)HBV核衣殼相關(guān)RNA含量，ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液HBSAG和HBEAG含量。結(jié)果與PXF3H空載體對(duì)照組相比，05UGML、10UGMLPXF3HPAP12質(zhì)粒對(duì)HBV核衣殼相關(guān)DNA的抑制率分別為380％（P﹤001）、740％（P﹤001）；對(duì)HBSAG的抑制率分別為768％（P﹤001）、997％（P﹤001），對(duì)HBEAG的抑制率分別為727％（P﹤001）、993％（P﹤001）；10UGMLPXF3HPAP質(zhì)粒對(duì)HBV核衣殼相關(guān)RNA的抑制率為690％（P﹤001）。結(jié)論全長(zhǎng)PAP基因真核表達(dá)質(zhì)粒PXF3HPAP12體外對(duì)HBV的病毒復(fù)制（DNA水平）和基因表達(dá)（RNA水平、蛋白質(zhì)水平）均有抑制作用。第三部分、天然PAP體內(nèi)抑制HBV復(fù)制的研究目的探討天然PAP在急性HBV感染小鼠模型體內(nèi)抗HBV的效果。方法以液壓法將具有復(fù)制能力的HBV質(zhì)粒PAAVHBV12通過(guò)尾靜脈注射到免疫功能正常的BALBC小鼠體內(nèi)，以建立急性HBV感染的小鼠模型。注射后第1天ELISA檢測(cè)小鼠血清中HBSAG、HBEAG水平，根據(jù)HBSAG和HBEAG水平將35只小鼠配對(duì)，分成PAP治療組和對(duì)照組（每組12只）。PAP治療組予025MGKG的PAP（對(duì)照組予生理鹽水）腹腔注射，每日一次，連續(xù)7天。于PAP注射前、注射第1、3、5、7天后，ELISA檢測(cè)小鼠血清中HBSAG、HBEAG、抗HBS、抗HBE水平，熒光定量PCR檢測(cè)小鼠血清中HBVDNA水平。注射第7天后HE染色檢測(cè)肝組織病理變化，免疫組化檢測(cè)肝組織HBSAG和HBCAG表達(dá)情況。結(jié)果35只小鼠注射PAAVHBV12后，有30只（857％）小鼠在注射后第1天血清中可檢測(cè)到HBSAG，另5只小鼠血清中始終未檢測(cè)到HBSAG。小鼠血清中HBSAG和HBEAG在第1天表達(dá)達(dá)高峰，之后逐漸下降，第8天均未能檢測(cè)到。小鼠血清中HBVDNA在第2天達(dá)高峰，之后仍維持在較高水平，至第8天時(shí)為19104COPIESML。與腹腔注射生理鹽水組相比，PAP在腹腔注射后第1、3、5天對(duì)HBSAG的抑制率分別為23％（P﹤005）、47％（P﹤005）、68％（P﹤005），對(duì)HBEAG的抑制率分別為36％（P﹤005）、55％（P﹤005）、83％（P﹤005）；PAP在腹腔注射后第1、3、5、7天對(duì)HBVDNA的抑制率分別為707％（P﹤005）、869％（P﹤005）、952％（P﹤005）、953％（P﹤005），PAP也能抑制肝組織HBSAG和HBCAG的表達(dá)。結(jié)論025MGKG劑量的天然PAP在急性HBV感染小鼠模型體內(nèi)對(duì)血清和肝組織的HBSAG、HBEAG的表達(dá)及HBVDNA的復(fù)制均有明顯的抑制效果。第四部分、全長(zhǎng)及不同片段缺失型PAP基因真核表達(dá)質(zhì)粒體外抗HBV的研究目的比較全長(zhǎng)和不同片段缺失型PAP基因真核表達(dá)質(zhì)粒體外抗HBV作用及其細(xì)胞毒作用。方法將全長(zhǎng)PAP基因、缺失C端25個(gè)氨基酸的PAP基因、既缺失N端69個(gè)氨基酸又缺失C端25個(gè)氨基酸的PAP基因的真核表達(dá)質(zhì)粒用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEPG22215細(xì)胞，轉(zhuǎn)染72H后收集細(xì)胞及培養(yǎng)上清。ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液HBSAG和HBEAG水平，熒光定量PCR檢測(cè)培養(yǎng)上清HBVDNA水平，MTT比色法檢測(cè)各質(zhì)粒對(duì)轉(zhuǎn)染的HEPG2細(xì)胞毒性作用。結(jié)果與PXF3H空載體對(duì)照組相比，20ΜGMLPXF3HPAP12、PXF3HPAP14、PXF3HPAP34質(zhì)粒對(duì)HBSAG的抑制率分別為6139％（P﹤005）、563％（P﹤005）、78％（P﹥005），對(duì)HBEAG的抑制率分別為842％（P﹤005）、758％（P﹤005）、110％（P﹥005）；對(duì)HBVDNA的抑制率分別為632％（P﹤005）、617％（P﹤005）、205％（P﹤005）；MTT結(jié)果顯示它們對(duì)細(xì)胞的抑制率分別為2874％（P﹤005）、126％（P﹤005）、478％（P﹥005）。PXF3HPAP14質(zhì)粒對(duì)HBV的抑制作用與PXF3HPAP12質(zhì)粒相比無(wú)明顯差異（P﹥005），但細(xì)胞毒性作用明顯低于PXF3HPAP12（P﹤005）。PXF3HPAP34質(zhì)粒無(wú)細(xì)胞毒性作用，但其抗HBV作用也喪失。結(jié)論P(yáng)AP的C端25個(gè)氨基酸與細(xì)胞毒性相關(guān)，與抗HBV活性無(wú)關(guān)；PAP的N端69個(gè)氨基酸與抗HBV活性相關(guān)。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)B84密級(jí)無(wú)我學(xué)校代碼10414學(xué)號(hào)2014320001我碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文基于認(rèn)知任務(wù)和刻板印象的基于認(rèn)知任務(wù)和刻板印象的沖突適應(yīng)的領(lǐng)域性探索沖突適應(yīng)的領(lǐng)域性探索ERPERP研究研究EXPLATIONEXPLATIONOFOFTHETHEGENERALITYGENERALITYOFOFCONFLICTCONFLICTADAPTATIONADAPTATIONBASEDBASEDONONCOGNITIVECOGNITIVETASKSTASKSSTEREOTYPICSTEREOTYPICTASKSTASKSAERPERPSTUDYSTUDY高曉琳高曉琳院所心理學(xué)院導(dǎo)師姓名向玲專(zhuān)業(yè)學(xué)位類(lèi)別應(yīng)用心理碩士專(zhuān)業(yè)領(lǐng)域心理健康與心理咨詢(xún)二○一七年六月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名簽字日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解江西師范大學(xué)研究生院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)江西師范大學(xué)研究生院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)）學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名簽字日期年月日簽字日期年月日

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多營(yíng)養(yǎng)教育課程對(duì)幼兒飲食認(rèn)知、飲食行為的影響——以太原市某幼兒園為例.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文MMN、P300評(píng)估帕金森病患者輕度認(rèn)知功能障礙的研究姓名李靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師李月春王寶軍20080501內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明鄭重聲明本人所呈交的學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文內(nèi)容不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)公開(kāi)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人學(xué)位論文與資料若有不實(shí)，愿意承擔(dān)一切相關(guān)的法律責(zé)任。論文作者簽名查鳘切轉(zhuǎn)年6月R‘日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人完全了解學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)院保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版。學(xué)院享有發(fā)表、復(fù)制、查閱、借閱及申請(qǐng)專(zhuān)利等權(quán)利?？梢圆捎糜坝?、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。同時(shí)本人保證畢業(yè)后發(fā)表、使用學(xué)位論文以及結(jié)合學(xué)蛾文研究課題再撰寫(xiě)的文章，作者署名單位一律為內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院O論文作者簽名簽疊ⅦP年6月，。日魯扎施Ⅲ名“猁M

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文認(rèn)知暴露療法在應(yīng)激障礙治療中的應(yīng)用研究姓名蘇衡申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)應(yīng)用心理學(xué)指導(dǎo)教師王家同20050501認(rèn)知暴露療法在應(yīng)激障礙治療中的應(yīng)用研究研究生蘇衡學(xué)科專(zhuān)業(yè)應(yīng)用心理學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)航空航天醫(yī)學(xué)系導(dǎo)師王家同教授輔導(dǎo)教師譚慶榮教授資助基金項(xiàng)目全軍醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金資助項(xiàng)目批準(zhǔn)編號(hào)01L072關(guān)鍵詞應(yīng)激急性應(yīng)激障礙創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙心理治療認(rèn)知暴露療法藥物治療隨訪中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2005年05月

簡(jiǎn)介：【研究目的】總目標(biāo)了解中原某農(nóng)村地區(qū)有償獻(xiàn)血艾滋病病毒感染者以下簡(jiǎn)稱(chēng)HIV感染者的心理健康狀況及影響因素。具體目標(biāo)1了解HIV感染者的心理健康狀況；2了解HIV感染者及其家庭的基本情況，探討心理健康狀況的影響因素；3初步探討HIV感染者對(duì)心理支持服務(wù)的意愿?！狙芯繉?duì)象和方法】本研究為現(xiàn)況研究，以心理應(yīng)激理論為理論基礎(chǔ)，采用定性訪談、定量調(diào)查和心理學(xué)測(cè)驗(yàn)等方法學(xué)收集相關(guān)資料。我們首先對(duì)5名HIV感染者進(jìn)行了定性訪談。在定量研究階段，我們從中原某農(nóng)村地區(qū)的7個(gè)艾滋病村中，先采用系統(tǒng)抽樣抽取500名HIV感染者，并對(duì)其家庭結(jié)構(gòu)進(jìn)行摸底，又采用完全隨機(jī)抽樣的方法從中抽取200名HIV感染者，對(duì)其和一名家庭成員分別進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查，同時(shí)采用抑郁焦慮壓力量表DEPRESSIONANXIETYSTRESSSCALES，DASS進(jìn)行心理學(xué)測(cè)驗(yàn)。每份調(diào)查表都經(jīng)過(guò)調(diào)查員現(xiàn)場(chǎng)審核、質(zhì)控員二審和最終三審，將審核好的調(diào)查表統(tǒng)一編碼，采用EPIDATA統(tǒng)計(jì)軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)用SPSS115統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行邏輯檢錯(cuò)和統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)分析方法主要包括T檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)、多元線性回歸分析和多因素LOGISTIC回歸分析等?！狙芯拷Y(jié)果】1研究對(duì)象的基本情況200個(gè)艾滋病家庭中，有73個(gè)365％雙陽(yáng)戶(hù)；過(guò)去的一年中，490％的家庭年人均純收入不足400元。填寫(xiě)HIV感染者調(diào)查表的200人中，女性略多515％；年齡在29～62歲之間，年齡中位數(shù)為420歲；文化程度比較低，以小學(xué)和初中為主750％，200％的人沒(méi)有上過(guò)學(xué)；全部為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民；絕大多數(shù)860％已婚，有18人的配偶死于艾滋病，有6人因艾滋病而與配偶分居或離婚；425％的人報(bào)告有親屬死于艾滋病。195名家屬中，176人是配偶，19人是子女；其中182人933％檢測(cè)過(guò)HTV抗體，73人為陽(yáng)性，其中69人有賣(mài)血史。本研究中共有269名有償獻(xiàn)血的HIV感染者，包括填寫(xiě)感染者調(diào)查表的200人和69名有賣(mài)血史的HTV陽(yáng)性家屬。在269名HIV感染者中，既往賣(mài)血次數(shù)最多的超過(guò)400次，大多數(shù)人是在2000年前后查出HIV抗體陽(yáng)性的；至今仍有40人從未檢測(cè)過(guò)CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)，其余人的CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)中位數(shù)為210；814％的HIV感染者目前仍在接受藥物治療，絕大多數(shù)免費(fèi)藥物來(lái)自縣防疫站966％，575％的人認(rèn)為“療效很好”；過(guò)去的一個(gè)月中，948％的HIV感染者有不同程度的軀體不適癥狀，245％的人有三種以上的軀體不適表現(xiàn)；524％的人覺(jué)得目前的身體狀況對(duì)重體力活兒有妨礙。2研究對(duì)象的心理健康狀況及其影響因素1抑郁焦慮壓力情緒及其影響因素HIV感染者中，抑郁、焦慮和壓力情緒的得分的中位數(shù)分別為8分、6分和8分，均高于普通人群的得分504、501、751，且高于HIV陰性者；分別有717％、552％、196％的HIV感染者有抑郁、焦慮和壓力情緒；單因素分析結(jié)果顯示，與HIV感染者抑郁等負(fù)面情緒相關(guān)的因素包括性別、文化程度、家庭收入、軀體不適癥狀、身體狀況對(duì)日常生活的影響、歧視和社會(huì)支持；多元線性回歸分析的結(jié)果提示，軀體不適癥狀多、感覺(jué)歧視嚴(yán)重、身體狀況對(duì)日常生活影響大可以增加HIV感染者抑郁等負(fù)面情緒的嚴(yán)重程度，而良好社會(huì)支持則可以減輕他們的負(fù)面情緒。2對(duì)命運(yùn)的看法HIV感染者比HIV陰性者更容易相信宿命和上天的安排，認(rèn)為“命運(yùn)決定貧富”345％、“生辰八字影響人的一生”242％、“人的才能是天生的”238％、“世事冥冥中早有安排”219％、“有些方法可以趨利避兇”223％。3社會(huì)歧視651％的HIV感染者感覺(jué)別人對(duì)他們有歧視，82％的人認(rèn)為歧視非常嚴(yán)重。4社會(huì)支持138％～387％的HIV感染者認(rèn)為得病后，親友和村里人對(duì)他們的態(tài)度不如以前；896％的HIV感染者至少有1名關(guān)系比較要好、能說(shuō)心里話兒的親友；但分別有427％和364％的人表示“臥病在床時(shí)，幾乎沒(méi)有或很少有人能來(lái)幫忙”和“有困難時(shí)，從來(lái)沒(méi)有或很少有人能提供好的意見(jiàn)”；日常生活中，他們的家屬一直照顧HIV惑染者631％，并為他們處理許多日常事務(wù)557％，幫他們做許多家務(wù)勞動(dòng)509％，但90％左右的家屬?zèng)]有因此而感到羞恥、厭煩和生氣。5自殺過(guò)去的一年里，323％的HIV感染者有過(guò)自殺的念頭，16人59％有過(guò)自殺行為；多因素LOGISTIC回歸分析結(jié)果表明，有抑郁情緒是自殺的危險(xiǎn)因素3175，“家人的態(tài)度好”是保護(hù)因素0331。3HIV感染者對(duì)心理支持服務(wù)的意愿與需求目前，HIV感染者最擔(dān)心的事情是“孩子的生活和教育”524％，其他依次為“自己的病情”327％、“怕傳染給家人”71％、“經(jīng)濟(jì)收入”52％等；955％的HIV陽(yáng)性人員表示愿意參加心理支持服務(wù)；他們最愿意接受的心理支持服務(wù)方式是跟其他艾滋病病人一起一邊活動(dòng)一起談心交流699％，其他方式還有跟村里的計(jì)生專(zhuān)干談心交流435％、心理咨詢(xún)264％、跟親戚朋友交流22％等?！窘Y(jié)論】1有償獻(xiàn)血HIV感染者中普遍存在抑郁、焦慮和壓力感等負(fù)性情緒理，且存在較為嚴(yán)重的自殺傾向；2有償獻(xiàn)血HIV感染者產(chǎn)生抑郁、焦慮和壓力的危險(xiǎn)因素有“嚴(yán)重歧視”、“身體狀況對(duì)日常生活影響大”，而“良好的社會(huì)支持”能明顯降低發(fā)生抑郁等負(fù)性情緒的危險(xiǎn)；3抑郁情緒是有償獻(xiàn)血HIV感染者產(chǎn)生自殺的重要危險(xiǎn)因素，而“家人態(tài)度好”可以降低產(chǎn)生自殺念頭的危險(xiǎn)；4大部分HIV感染者愿意參加心理支持服務(wù)，希望能與其他艾滋病病人或親人、朋友一起交流，并向醫(yī)生進(jìn)行咨詢(xún)，這為今后建立社會(huì)支持網(wǎng)絡(luò)提供了可靠的證據(jù)?！菊呓ㄗh】1農(nóng)村地區(qū)有償獻(xiàn)血HIV感染者的心理健康問(wèn)題，如普遍存在的抑郁、焦慮情緒和自殺意念，應(yīng)該引起全社會(huì)的關(guān)注。2結(jié)合我國(guó)實(shí)際情況，為HIV感染者提供適宜的心理關(guān)愛(ài)和情感支持，例如在常規(guī)計(jì)劃生育服務(wù)中加入心理支持的內(nèi)容，或設(shè)立心理咨詢(xún)室，也可以在集體活動(dòng)加入心理干預(yù)等。

簡(jiǎn)介：首發(fā)抑郁癥患者認(rèn)知功能損害從神經(jīng)心理學(xué)測(cè)量到神經(jīng)影像學(xué)研究⑧論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人L評(píng)閱人2評(píng)閱人3評(píng)閱人4評(píng)閱人5答辯委員會(huì)主席邵福源教授上海長(zhǎng)征醫(yī)院委員1臧玉峰教授杭州師范大學(xué)委員2許毅主任醫(yī)師浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院委員3鄭旭寧主任醫(yī)師浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院委員4于恩彥主任醫(yī)師浙江省人民醫(yī)院委員5陳致宇主任醫(yī)師杭州市第七人民醫(yī)院委員6馮斌主任醫(yī)師浙江省立同德醫(yī)院答辯日期2012年5月30日，COGNITIVEIMPAIRMENTINFIRSTEPISODEPATIENTSL09NLTLVELMDALRMENTLNTLRSTEDLS0DEDATIENTSWITHMAJORDEPRESSIVEDISORDEREVIDENCESFROMNEUROPSYCHOLOGICALTESTTONEUROIMAGINGSTUDIES⑧AUTHOR’SSIGNATUREA‘■●‘3UPERYLS0R7SSLGNATURETHESISREVIEWER1THESISREVIE、VER2THESISREVIEWER3THESISREVIEWER41F11ESISREVIEWER5CHAIRPROFSHAOFUYUANSH觚GLLAICH鋤GZHENGHOSPITALCOMMI訛EOFORALDEFENCE一COMMITTEEMAN1PR0￡ZAJLGYU危NGHANGZLLOUNOMLAL岫IVERS時(shí)COMMITTEEMAN2PM￡XUⅥ11HEFIRSTA銜“ATI甜HOSPITALOF辦甸IALLGUNIVERS時(shí)COMMITTEEMAN3墅墨砷ENGXUNIILGNEF婦A珩LI咖DHOSPITALOFZHEJI觚GULLIVERS時(shí)COMMITTEEMAN4P∞￡YUENYAN動(dòng)勻IANGPROVINCEPEOPLE’SHOSPHLCOMMITTEEMAN5PMFCHENZHIYU111ESEV∞TLLPEOPLE’SHOSPI詛LOFH鋤G疝OUCOMMITTEEMAN6PMFFENGBIIL辦旬IANGPMVILLCIALTON酎EHOSPITALDATEOFORALDEFENCEMAY30，2012㈣3洲0川49MMM■IⅢ川㈨●I㈣2㈣Y

簡(jiǎn)介：肝炎病毒是引起急慢病毒性肝炎的主要致病原因之一，全球范圍內(nèi)有5億多人感染了慢性肝炎。病毒性肝炎傳染性強(qiáng)、傳播途徑復(fù)雜、流行面廣和發(fā)病率高，可演變?yōu)槁愿窝?、肝硬化以及肝?xì)胞癌HEPATOCELLULARCARCINOMAHCC。建立早期、敏感的方法對(duì)肝炎的診斷和預(yù)防將是目前控制肝炎繼續(xù)發(fā)展的重要途徑。乙型病毒性肝炎在我國(guó)是高流行區(qū)，已成為一個(gè)重要的健康問(wèn)題，年發(fā)病率為15810萬(wàn)，現(xiàn)患慢性肝炎的病人約為1800萬(wàn)人，其中40％的患者逐漸發(fā)展為更為嚴(yán)重的各種肝并發(fā)癥，包括肝硬化和HCC等，而受乙型肝炎病毒HBV慢性感染的人群罹患HCC的相對(duì)危險(xiǎn)性比正常人群至少增加300倍；丙型肝炎在我國(guó)整體人群流行率為1～3％，丙型肝炎病毒HCV感染約70％～80％會(huì)轉(zhuǎn)為慢性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于乙型肝炎的慢性化率5％～10％，約20％會(huì)發(fā)展成肝硬化，其中約5％在20～30年內(nèi)發(fā)展為HCC。到目前為此，沒(méi)有十分有效的方法來(lái)防止和控制HCV的感染，也沒(méi)有較為有效的疫苗，所以建立早期診斷HCV感染的方法十分重要。HCV有多種基因型，不同HCV基因型感染所致疾病的嚴(yán)重程度不同，1型及混合型較重，2型較輕，不同基因型對(duì)干擾素IFN應(yīng)答及病毒血癥水平存在差異；丁型肝炎病毒HDV是一種缺陷病毒，需要HBV的輔助才能感染和復(fù)制。乙型肝炎患者重疊感染HDV，常導(dǎo)致肝炎的重型化和慢性化。雖然許多HBV感染的分子機(jī)理研究都證實(shí)，HBV感染肝細(xì)胞后，誘導(dǎo)的肝損傷并非只是病毒的直接細(xì)胞毒作用，而是主要激活宿主免疫應(yīng)答反應(yīng)，但病毒感染及其致病機(jī)理仍不十分清楚，與肝細(xì)胞之間相互作用的分子機(jī)制也了解很少。近年來(lái)，逐漸從局限于研究病毒基因結(jié)構(gòu)和功能轉(zhuǎn)向?qū)Σ《舅拗飨嗷リP(guān)系的研究，病毒編碼的蛋白能夠影響肝細(xì)胞某些基因的表達(dá)從而影響細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)可能是病毒感染致病及最終致癌的重要因素。肝炎蛋白的表達(dá)不僅對(duì)于HBV的生活周期具有重要意義，而且對(duì)于肝細(xì)胞基因表達(dá)譜產(chǎn)生重要影響。例如有研究顯示，HBV的X基因編碼產(chǎn)物HBXAG是一種具有反式激活作用的病毒蛋白，能夠影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，激活多種病毒及細(xì)胞基因啟動(dòng)子，影響細(xì)胞分化與增殖，在HBV感染與HCC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮十分重要作用。但是由于肝炎病毒與宿主細(xì)胞和機(jī)體相互作用關(guān)系的多樣性和復(fù)雜性，傳統(tǒng)常用的從單個(gè)或幾個(gè)特定的因素研究病毒感染對(duì)宿主的影響，不足以找到規(guī)律性的結(jié)果，有必要引入新的策略和技術(shù)。目前臨床上肝炎病毒診斷主要方法有免疫學(xué)上傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA及分子生物學(xué)方法等。ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)的對(duì)象是抗原和抗體，由于人體對(duì)肝炎病毒產(chǎn)生免疫應(yīng)答有“窗口期”，所以人體對(duì)病毒感染免疫應(yīng)答有一定遲滯，對(duì)無(wú)免疫應(yīng)答或免疫力低下者的檢測(cè)更存在困難。另外，檢測(cè)的特異性和敏感性也不夠好。近年來(lái)發(fā)展的各種核酸雜交方法和聚合酶鏈反應(yīng)PCR方法各具優(yōu)點(diǎn)，可對(duì)其進(jìn)行定性、分型、半定量和定量檢測(cè)，不過(guò)核酸雜交雖有一定的特異性，但敏感性較低；而PCR操作容易造成交叉污染，假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果經(jīng)常出現(xiàn)，且存在操作較繁瑣、一次檢測(cè)的病毒種類(lèi)、型別有限、檢測(cè)的效率和自動(dòng)化程度不高。因而發(fā)展更有效、更科學(xué)、更直接、簡(jiǎn)化的方法，用于肝炎病毒的臨床檢測(cè)、分型十分必要。基因芯片技術(shù)是上世紀(jì)90年代興起，源于計(jì)算機(jī)集成化芯片理念的一門(mén)新技術(shù)。實(shí)質(zhì)就是利用SOUTHERNBLOT原理，以可尋址的方式在載體表面，有序地點(diǎn)陣排列大量DNA雙鏈或OLIGO探針。這些被固定在基質(zhì)的探針就形成了高密度DNA微陣列。樣品DNA或RNA經(jīng)過(guò)熒光標(biāo)記，與陣列上的探針進(jìn)行雜交反應(yīng)，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，探針特異性地結(jié)合相應(yīng)被熒光標(biāo)記的分子。用激光激發(fā)熒光標(biāo)記物，就可獲得樣品分子的信息，從而對(duì)基因序列及功能進(jìn)行大規(guī)模、高通量、平行地研究。DNA芯片技術(shù)為肝炎病毒診斷提供了一種快速、敏感、高通量、高效的方法，并可同時(shí)對(duì)多種肝炎病毒進(jìn)行大規(guī)模篩查和多種肝炎種類(lèi)的鑒定，芯片技術(shù)在病毒性肝炎診斷上的價(jià)值還在于，能對(duì)各種肝炎病毒的各亞型、變異株、耐藥性等情況，通過(guò)一張芯片同時(shí)診斷出來(lái)。應(yīng)用診斷芯片可為臨床上病毒性肝炎的診斷、用藥、療效判定及疾病的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸提供可靠依據(jù)，具有非常大的發(fā)展前景。論文全文共分為三部分1肝炎病毒聯(lián)合診斷CDNA芯片的制備與應(yīng)用對(duì)于基因組較小的HBV、HDV，利用普通PCR技術(shù)制備探針，采用PRIMERPREMIER50軟件分別針對(duì)HBV、HDV保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異引物，得到各10條、4條探針；利用限制性顯示PCRRESTRICTIONDISPLAYRDPCR技術(shù)制備基因組較大且復(fù)雜的HCV芯片探針首先運(yùn)用該技術(shù)建立了HCV三個(gè)亞型的CDNA文庫(kù)，在分離RD產(chǎn)物條帶時(shí)，還用到了聚丙烯酰胺凝膠PAGE電泳結(jié)合銀染法。由PCVH77CHCV1A克隆共得到大小從222BP到840BP含兩端共38BP長(zhǎng)的接頭，以下同共22個(gè)限制性片段，由PCVJ4L6SHCV1B得到216BP至907BP間片段共23個(gè)，由PJ6CFHCV2A得到218BP至878BP間片段共21個(gè)；然后，從中選取了基因片段作為芯片探針。為了便于摸索實(shí)驗(yàn)條件和更好進(jìn)行探針優(yōu)化，我們先后制備了3種芯片，包括HBV與HDV診斷芯片、HCV診斷芯片及HBV、HDV、HCV聯(lián)合診斷芯片。雜交結(jié)果顯示HBV、HDV診斷芯片、HCV優(yōu)化診斷芯片效果較為滿(mǎn)意。從以上芯片中選取探針制備了HBV、HDV、HCV聯(lián)合診斷芯片，對(duì)芯片的檢測(cè)質(zhì)量進(jìn)行了初步的評(píng)估線性在104～1011COPIESML之間，芯片檢測(cè)法顯示了較好的線性R分別為09902、09921、09819，P＜001，其中稀釋最低濃度水平為HBV092104COPIESML、HDV108104COPIESML、HCV103104COPIESML，初步認(rèn)定該芯片三種肝炎病毒的檢測(cè)靈敏度不低于此水平；特異性所制備的芯片檢測(cè)YFV、JEV、DV等其他病毒樣品結(jié)果均顯示為陰性，顯示有著較好的特異性；重復(fù)性HBV、HDV、HCV的檢測(cè)重復(fù)性分別為批內(nèi)精密度CV值為71％、72％、66％，批間精密度CV值為79％、82％、76％；準(zhǔn)確性將共計(jì)HBV、HDV14條PCR片段，HCV24條限制性片段，部分臨床陽(yáng)性血清PCR產(chǎn)物全部進(jìn)行序列測(cè)定，與GENBANK進(jìn)行BLAST比較，結(jié)果表明克隆基因均屬于相應(yīng)基因，與理論一致。為了適應(yīng)臨床診斷的要求，能快速、敏感地檢測(cè)血清標(biāo)本，我們對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了一些優(yōu)化，包括減少雜交時(shí)間從常規(guī)的過(guò)夜雜交16H到2H，取消預(yù)雜交步驟，標(biāo)記的樣品不經(jīng)過(guò)純化，利用商用試劑盒對(duì)血清核酸進(jìn)行快速高效提取，將雜交時(shí)間從42℃提高到52℃等措施。通過(guò)這些改進(jìn)，可以使病毒檢測(cè)在送檢標(biāo)本當(dāng)天出報(bào)告，敏感性也大大提高。2肝炎病毒診斷分型寡核苷酸芯片的制備與應(yīng)用從GENBANK數(shù)據(jù)庫(kù)獲取HBV全長(zhǎng)DNA序列，HDV及HCV4個(gè)基因型全長(zhǎng)CDNA序列，根據(jù)BLAST分析結(jié)果獲得HBV、HDV種屬保守序列及HCV各型特異性序列，以作為設(shè)計(jì)寡核苷酸OLIGO探針的備選序列。用ARRAYDESIGNER30分別對(duì)BLAST檢索所得的HBV、HDV種屬保守序列和HCV型特異性序列逐一進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)長(zhǎng)度均一的60MEROLIGO探針。為了保證設(shè)計(jì)的探針具有高度的特異性和靈敏度，設(shè)計(jì)時(shí)使探針TM值在80±5℃之間，GC含量介于40％～60％，且探針內(nèi)部和探針之間不易形成穩(wěn)定的二級(jí)結(jié)構(gòu)。在BLAST比對(duì)中，與其它基因的同源性小于70％，連續(xù)相同堿基的數(shù)量不超過(guò)18個(gè)。遵循以上探針設(shè)計(jì)的原則，從HBV、HDV、HCV種屬保守序列和HCV型特異性序列中分別挑選出16、8、68條60MEROLIGO探針。OLIGO探針合成和純化后，用芯片打印儀固定在玻片上。為便于研究，先后制備了2種芯片，包括HBV、HDV診斷芯片、HCV分型芯片。同CDNA芯片一樣，我們采用RDPCR技術(shù)進(jìn)行樣品熒光標(biāo)記后與芯片雜交，并根據(jù)雜交結(jié)果篩除了有非特異雜交和信噪比低于40的探針，選取高特異的探針制備了HBV、HDV、HCV聯(lián)合診斷分型芯片。3利用寡核苷酸芯片對(duì)乙型肝炎基因表達(dá)譜的研究本實(shí)驗(yàn)選用AGILENTHUMANLAOLIGO基因芯片進(jìn)行乙型肝炎基因表達(dá)改變的研究，探討HBV感染的分子致病機(jī)理。對(duì)照細(xì)胞株HEPG2，為分化較好的人肝癌細(xì)胞，所產(chǎn)生蛋白的功能與正常肝細(xì)胞近似；實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株HEPG2215，為HBVDNA轉(zhuǎn)染HEPG2而成，可持續(xù)穩(wěn)定地分泌DANE顆粒及HBSAG、HBEAG、HBVDNA等。用CY3標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞HEPG2215，CY5標(biāo)記對(duì)照細(xì)胞HEPG2。通過(guò)雜交、掃描、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，根據(jù)PVALUELOGRATIO值及GPROCESSEDSIGNALRPROCESSEDSIGNAL值從近20000個(gè)基因中共篩選出差異表達(dá)基因744個(gè)，其中423個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，321個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。