基于滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)超靈敏電化學(xué)免疫傳感器的研究.pdf

1、目的：
　　本文欲將電化學(xué)免疫方法的高特異性和滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)的信號(hào)放大作用結(jié)合在一起，構(gòu)建一種超靈敏檢測(cè)人附睪上皮分泌蛋白4的新型電化學(xué)免疫傳感器。
　　方法：
　　制備殼聚糖碳化鈦納米復(fù)合物，并分步探討殼聚糖-碳化鈦納米復(fù)合膜，納米金-殼聚糖-碳化鈦納米復(fù)合膜等不同修飾步驟的電極的電化學(xué)行為。制備超靈敏檢測(cè)人附睪上皮分泌蛋白4的免疫傳感器，對(duì)影響免疫傳感器檢測(cè)性能的因素進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)免疫傳感器進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。首先在恒電

2、勢(shì)下，將均一的殼聚糖碳化鈦納米復(fù)合膜電沉積在ITO電極上。然后利用循環(huán)伏安法將納米金粒子電沉積到修飾有殼聚糖碳化鈦納米復(fù)合膜的ITO電極上。捕獲抗體經(jīng)由納米金和納米碳化鈦的雙重作用被吸附在電極表面。在捕獲抗體，HE4抗原，生物素化的二抗特異性結(jié)合后，生物素化引物DNA經(jīng)由生物素-親和素體系被固定在生物素化的二抗上。然后，將適量的環(huán)狀DNA模板和生物素化的引物DNA滴加在電極上，在最適條件下，ITO電極表面開(kāi)始進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)。滾環(huán)擴(kuò)增反

3、應(yīng)的產(chǎn)物提供了大量可用于結(jié)合DNA檢測(cè)探針的結(jié)合位點(diǎn)。隨后加入的鹽酸阿霉素可嵌合在滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物和DNA檢測(cè)探針之間的“G=C”，“C=G”雙鍵中，而其所產(chǎn)生的電流變化用差分脈沖伏安法進(jìn)行檢測(cè)。電極的不同修飾步驟所產(chǎn)生的電極每層表面變化用掃描電子顯微鏡(SEM)和原子力顯微鏡(AFM)進(jìn)行表征。而電極的阻抗變化用電阻抗譜(EIS)進(jìn)行表征。
　　結(jié)果：
　　基于以上級(jí)聯(lián)放大作用，在最適檢測(cè)條件下，傳感器的電流響應(yīng)與HE44抗原