產(chǎn)紫杉烷真菌Pestalotiopsis malicola的EMS誘變育種及NK-36b的細胞水平遺傳分析.pdf

1、紫杉烷類化合物最初是從植物中得到的天然產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)分類屬于二萜類，又稱紫杉烷二萜。其中，紫杉醇是一種高效、低毒、廣譜、作用機制獨特的天然抗腫瘤藥物。紫杉烷類藥物的市場供應(yīng)受制于原料來源和制備技術(shù)兩方面，藥價昂貴。真菌大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)具有廣闊的發(fā)展前景，將產(chǎn)生巨大的社會效應(yīng)和市場效益。
　　 本實驗室分離得到一株產(chǎn)紫杉烷類化合物的擬盤多毛孢屬真菌Pestalotiopsis malicola，經(jīng)HPLC、LC-MS、NMR驗證其發(fā)

2、酵產(chǎn)物中包括紫杉醇、10-DAB在內(nèi)的多種紫杉烷衍生物。為了提高紫杉烷產(chǎn)量，本文采用化學(xué)誘變的方法對P.malicola進行誘變育種。實驗以EMS作為誘變劑，摸索不同濃度下EMS對P.malicola的致死效果，并選取終濃度0.4M的EMS進行誘變育種?，F(xiàn)已獲得253株突變菌株，并且經(jīng)HPLC檢測，部分突變菌株次生代謝產(chǎn)物含量與野生型相比明顯增多。我們對產(chǎn)紫杉烷衍生物含量增多的突變株進行單孢分離并多次傳代培養(yǎng)，結(jié)果表明突變菌株性狀遺傳穩(wěn)

3、定。
　　 本實驗室通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化(ATMT)篩選得到一株產(chǎn)紫杉醇能力缺失的轉(zhuǎn)化子Bu95。本文通過反向PCR和染色體步移方法對插入Bu95的T-DNA左側(cè)翼序列進行了分析并測序。
　　 本論文的另一項重要工作是對本實驗室篩選的一株腐生真菌NK-36b進行細胞水平的遺傳分析。NK-36b的次生代謝產(chǎn)物非常豐富，除紫杉烷類化合物外，其發(fā)酵產(chǎn)物中還含有大