鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的初步研究.pdf

1、B7-H4（別稱B7S1或B7x），是2003年發(fā)現(xiàn)的B7家族新分子。人的B7-H4基因含有5個(gè)內(nèi)含子和6個(gè)外顯子，編碼區(qū)基因長(zhǎng)度為849個(gè)bp，位于人染色體的1p11.1。作為一種重要的負(fù)性刺激因子，當(dāng)B7-H4分子與相應(yīng)受體結(jié)合后，會(huì)抑制ERK和JNK蛋白激酶活性，抑制IL-2基因轉(zhuǎn)錄,阻斷了PI3K/AKT途徑，從而影響了細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡，抑制一些細(xì)胞因子的分泌和 T細(xì)胞的增殖。越來(lái)越多的文獻(xiàn)報(bào)道，B7-H4分子高表達(dá)于多種腫瘤

2、中，如肺癌、腎癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌和食管癌等。另外，在一些腫瘤浸潤(rùn)性巨噬細(xì)胞及腫瘤的血管內(nèi)皮細(xì)胞也檢測(cè)到B7-H4的高量表達(dá)，這些研究顯示B7-H4作為一種新的腫瘤標(biāo)志物為研究其在機(jī)體腫瘤免疫逃逸中的機(jī)制和癌癥的治療提供了幫助。
　　本課題組在來(lái)源于人扁桃體的部分淋巴細(xì)胞中檢測(cè)到B7-H4受體的表達(dá)，并以此為基礎(chǔ)研制鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體，并運(yùn)用本課題組建立的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株SPCA-1與Jurkat細(xì)胞

3、共培養(yǎng)的體系初步研究了單克隆抗體的生物學(xué)功能。
　　鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的初步研究
　　【目的】
　　研制鼠抗人B7-H4受體的單克隆抗體并初步研究其生物學(xué)功能
　　【方法】
　　從人體扁桃體組織中獲取淋巴細(xì)胞，并以此為免疫原，免疫5~8周齡的BALB/c小鼠，融合當(dāng)天取小鼠脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞Ag8融合。一段時(shí)間后，運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)對(duì)雜交瘤上清進(jìn)行初步篩選，以B

4、7-H4-mFc-FITC為基礎(chǔ)，通過(guò)位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)進(jìn)一步篩選，再通過(guò)多次亞克隆技術(shù)獲得能穩(wěn)定分泌抗B7-H4受體單克隆抗體的細(xì)胞株。通過(guò)快速試紙法測(cè)定目標(biāo)單抗的Ig亞型，對(duì)純化后的單抗標(biāo)記生物素后借助Western Blot實(shí)驗(yàn)和ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)單克隆抗體進(jìn)行鑒定。結(jié)合本課題組建立的SPCA-1細(xì)胞與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)的體系初步研究單克隆抗體的功能。
　　【結(jié)果】
　　獲得了一株能穩(wěn)定分泌鼠抗人 B7-H4受體的單克

5、隆抗體，命名為7B11。經(jīng)快速試紙法鑒定7B11為IgG1類，Western Blot結(jié)果顯示7B11不能與人B7-H4受體蛋白特異性結(jié)合，但ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明7B11能特異性識(shí)別B7-H4受體蛋白。將7B11加入到SPCA-1細(xì)胞與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)的體系作用72小時(shí)后，能阻斷SPCA-1細(xì)胞表達(dá)的B7-H4分子對(duì)Jurkat細(xì)胞的作用，使Jurkat細(xì)胞上CD3、CD69的表達(dá)水平及細(xì)胞增殖水平趨近正常。
　　【結(jié)論】