結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用過(guò)程中成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為和Cx43表達(dá)研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是一類常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，據(jù)世界癌癥協(xié)會(huì)2014年的研究表明，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率仍然高居第三位。雖然到目前為止，結(jié)直腸癌的研究已取得較多成果，但腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、耐藥性等問(wèn)題仍然存在，其發(fā)病機(jī)制并未完全明確。因此，深入研究結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的調(diào)節(jié)因素和機(jī)制，對(duì)于尋找有效的治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。
　　腫瘤間質(zhì)對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著重要作用。成纖維細(xì)胞是腫瘤間質(zhì)的重要組成成分，影響著腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、血管生成等，且與

2、腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。腫瘤間質(zhì)中成纖維細(xì)胞活化為癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancer-associatedfibroblasts，CAFs）是腫瘤細(xì)胞-成纖維細(xì)胞相互作用過(guò)程中的一個(gè)重要過(guò)程，是成纖維細(xì)胞發(fā)揮腫瘤調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵?？p隙連接蛋白43(connexin43，Cx43)是一種重要的連接子蛋白，是構(gòu)成細(xì)胞間縫隙連接通道（gap junction）的基本組成成分，是細(xì)胞間縫隙連接通訊(gap junction intercellula

3、r communication，GJIC)建立的基礎(chǔ)。我們小組前期在臨床樣本中發(fā)現(xiàn)，Cx43在結(jié)直腸癌浸潤(rùn)前沿高表達(dá)。體外運(yùn)用雙層細(xì)胞球和直接共培養(yǎng)模型模擬結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用證實(shí)Cx43在結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞接觸區(qū)域表達(dá)升高，且成纖維細(xì)胞被活化。且用結(jié)直腸癌細(xì)胞上清培養(yǎng)成纖維細(xì)胞可促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化，激活成纖維細(xì)胞中TGFβ信號(hào)和Wnt信號(hào)。而雙層共培養(yǎng)模型，將結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞間接共培養(yǎng)也發(fā)現(xiàn)，相互作用可促進(jìn)成

4、纖維細(xì)胞活化，上調(diào)腫瘤細(xì)胞Cx43表達(dá)，其機(jī)制與腫瘤細(xì)胞Wnt信號(hào)激活有關(guān)。這表明相互作用可促進(jìn)Cx43表達(dá)，也提示我們，腫瘤間質(zhì)中成纖維細(xì)胞的活化可能與Cx43表達(dá)有關(guān)。但相互作用對(duì)成纖維細(xì)胞功能行為有何影響，其Cx43表達(dá)是否有改變，二者是否相關(guān)？這些仍不清楚。有研究發(fā)現(xiàn)，Cx43對(duì)成纖維細(xì)胞的活化、增殖和遷移等具有調(diào)節(jié)作用[1-3]，提示Cx43可能參與成纖維細(xì)胞功能行為的調(diào)節(jié)。因此，我們的目的是研究在結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互

5、作用過(guò)程中成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為和Cx43的表達(dá)情況，并探究其可能的機(jī)制和意義。
　　為證實(shí)以上猜想，我們構(gòu)建結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用模型，觀察成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為改變。結(jié)果表明，相互作用后成纖維細(xì)胞活化標(biāo)記α-SMA、FAP、FSP1表達(dá)上調(diào)，其(S+G2)期細(xì)胞百分比由32％上升至40％以上，24 h和48 h遷移范圍增加?；罨衫w維細(xì)胞Cx43上調(diào)，與此同時(shí)，Wnt信號(hào)被激活，抑制Wnt通路可下調(diào)成纖維細(xì)胞活化標(biāo)記α

6、-SMA和Cx43表達(dá)。TGFβ1可促進(jìn)成纖維細(xì)胞Wnt信號(hào)激活，上調(diào)Cx43表達(dá)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化、增殖和遷移。但Cx43的上調(diào)并未影響成纖維細(xì)胞的GJIC功能。據(jù)報(bào)道，Cx43是Wnt下游一個(gè)靶基因，能調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞活化、增殖和遷移等，由此我們推測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞相互作用通過(guò)激活Wnt信號(hào)，上調(diào)Cx43表達(dá)，以一種非通道依賴的方式，促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化、增殖、遷移等生物學(xué)行為改變。
　　通過(guò)研究，我們得出以下結(jié)論: