全氟化碳對(duì)肺間充質(zhì)干細(xì)胞體外相關(guān)生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:肺間充質(zhì)干細(xì)胞為肺間充質(zhì)來(lái)源的內(nèi)源性成體干細(xì)胞，能夠自我復(fù)制并分化成肺組織中的各種間充質(zhì)及非間充質(zhì)細(xì)胞，參與肺損傷的修復(fù)過(guò)程，是急性肺損傷及各種肺部疾病治療的潛在靶點(diǎn)。全氟化碳為肺液體通氣治療的主要介質(zhì)，具有高攜氧性及生物抗炎效應(yīng)，但其治療急性肺損傷的機(jī)制仍不明確，本研究擬從全氟化碳對(duì)肺間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響方面探討全氟化碳治療急性肺損傷的作用機(jī)制。
　　方法:
　　(1)采用膠原蛋白酶消化法從大鼠肺臟中提取LM

2、SC，并對(duì)所提取細(xì)胞的表面標(biāo)志抗原及體外誘導(dǎo)分化能力進(jìn)行鑒定。
　　(2)將細(xì)胞分為L(zhǎng)MSC組和PFC處理組，分別繪制兩組生長(zhǎng)曲線并檢測(cè)細(xì)胞周期以觀察PFC對(duì)LMSC體外生長(zhǎng)增殖的影響。
　　(3)將細(xì)胞分為對(duì)照組、SAGM誘導(dǎo)分化組和SAGM+PFC組，誘導(dǎo)LMSC向肺上皮細(xì)胞分化，分別采用RT-qPCR及免疫熒光檢測(cè)SPC和AQP5的mRNA和蛋白表達(dá)，觀察PFC對(duì)LMSC向肺泡上皮分化能力的影響。
　　(4)將細(xì)

3、胞分為對(duì)照組、LPS(200ng/ml)組、PFC組以及LPS(200ng/ml)+PFC組，分別干預(yù)24h后，采用RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞IL-1ra、KGF、VEGF、HGF、TSG-6、ANG-1和TGF-β的mRNA表達(dá)，采用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HGF的分泌量，以觀察PFC對(duì)LMSC旁分泌能力的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)從大鼠肺臟組織中提取的細(xì)胞體外培養(yǎng)貼壁，免疫表型為CD29+/CD54+/CD90+

4、/CD45-/CD11b-/CD31-，能夠誘導(dǎo)向成脂、成骨和成軟骨方向分化，可以鑒定為L(zhǎng)MSC。
　　(2) LMSC的生長(zhǎng)曲線及細(xì)胞周期檢測(cè)均符合干細(xì)胞特點(diǎn)，PFC組生長(zhǎng)曲線及細(xì)胞周期均較LMSC組無(wú)明顯差異。
　　(3)誘導(dǎo)分化組及PFC組均可見(jiàn)SPC和AQP5表達(dá)，對(duì)照組免疫熒光基本無(wú)SPC和AQP5表達(dá)。前兩組SPC和AQP5的平均光密度值及mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組。誘導(dǎo)分化組SPC平均光密度值及mRNA

5、相對(duì)表達(dá)量均高于PFC組，但兩組之間AQP5的平均光密度值及mRNA相對(duì)表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　(4) LPS組IL-1ra、KGF、VEGF和TSG-6 mRNA表達(dá)高于對(duì)照組。LPS+PFC組IL-1ra、KGF及VEGF mRNA表達(dá)高于LPS組。細(xì)胞培養(yǎng)上清中LPS組HGF含量明顯高于對(duì)照組，LPS+PFC組則高于LPS組。PFC組和對(duì)照組之間所有旁分泌因子表達(dá)均無(wú)差異。
　　結(jié)論:
　　(1)利用膠原酶消化