阿薩希毛孢子菌體外抗氧化誘導(dǎo)及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的:
　　真菌抗氧化應(yīng)激與其感染機(jī)制密切相關(guān)，也是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。獲得穩(wěn)定的抗氧化菌株是深入研究其抗氧化機(jī)制的前提。阿薩希毛孢子菌Trichosporon asahii(T.asahii)是重要的條件致病菌，其感染機(jī)制的相關(guān)研究匱乏。本實(shí)驗(yàn)研究體外能否用常用氧化劑過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)和亞硫酸氫鈉甲萘醌(menadione sodium bisulfate，MSB)誘導(dǎo)T.asahii產(chǎn)生抗氧

2、化性，以及誘導(dǎo)獲得的抗氧化表型的穩(wěn)定性，并觀察誘導(dǎo)前后菌株的生理學(xué)特性變化。
　　方法:
　　1.將T.asahii臨床標(biāo)準(zhǔn)株CBS2479和環(huán)境株CBS8904在H2O2或MSB濃度逐漸梯級(jí)倍增的YPD液體培養(yǎng)基中傳代，直至無(wú)法誘導(dǎo)為止。取誘導(dǎo)終末代菌株在不含氧化劑的YPD液體培養(yǎng)基中連續(xù)傳代10次，進(jìn)行誘導(dǎo)回復(fù)。測(cè)定誘導(dǎo)前、誘導(dǎo)終末代、回復(fù)終末代等不同階段菌株的過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)和超氧化物歧化酶(su

3、peroxide dismutase，SOD)活性，并應(yīng)用SPSS20.0軟件分析酶學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)。
　　2.取誘導(dǎo)前、誘導(dǎo)終末代、回復(fù)終末代的菌株行肉眼形態(tài)和光鏡下形態(tài)觀察。
　　3.參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)推薦的M27-A3標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定兩種氧化劑誘導(dǎo)前、誘導(dǎo)中期、誘導(dǎo)末期、回復(fù)中期、回復(fù)末期的菌株對(duì)抗真菌藥氟康唑的MIC值和對(duì)氧化劑H2O2和MSB的MIC值。
　　結(jié)果:
　　1.抗氧化酶活性變化測(cè)定經(jīng)H2O2誘

4、導(dǎo)后，CBS2479菌株誘導(dǎo)末期的CAT值、SOD值分別比誘導(dǎo)前升高了約2.15、2.97倍;CBS8904菌株誘導(dǎo)末期的CAT值、SOD值分別比誘導(dǎo)前升高了約1.79、1.79倍。經(jīng)MSB誘導(dǎo)后，CBS2479菌株誘導(dǎo)末期的CAT值、SOD值各比誘導(dǎo)前上升了約3.36、2.68倍;CBS8904菌株誘導(dǎo)末期的CAT值、SOD值分別比誘導(dǎo)前升高了約2.27、2.57倍。經(jīng)H2O2和MSB誘導(dǎo)后，CBS2479菌株的CAT和SOD活性均顯

5、著升高(P＜0.05)?；貜?fù)后的CAT、SOD均比誘導(dǎo)前高（P＜0.05）。CBS2479-H2O2、CBS2479-MSB菌株回復(fù)后的CAT比誘導(dǎo)末期下降（P＜0.05），而SOD則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)H2O2和MSB誘導(dǎo)后，CBS8904菌株的CAT和SOD活性均比誘導(dǎo)前升高(P＜0.05)。CBS8904-H2O2菌株回復(fù)后的SOD比誘導(dǎo)前高（P＜0.05），但回復(fù)后CAT與誘導(dǎo)前比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。CBS8904-MS

6、B菌株回復(fù)后的CAT和SOD值均比誘導(dǎo)前升高（P＜0.05）。CBS8904-H2O2、CBS8904-MSB菌株回復(fù)后的CAT、CBS8904-MSB菌株回復(fù)后的SOD均比誘導(dǎo)末期下降(P＜0.05)，而CBS8904-H2O2菌株回復(fù)后的SOD與誘導(dǎo)末期相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2.形態(tài)學(xué)變化誘導(dǎo)后菌落肉眼形態(tài)發(fā)生一定改變;光鏡下可見(jiàn)CBS2479、CBS8904分別由誘導(dǎo)前的菌絲狀、孢子狀變?yōu)檎T導(dǎo)后呈假菌絲與孢

7、子混合狀態(tài)。
　　3.藥物敏感性變化測(cè)定T.asahii分別在H2O2、MSB濃度梯級(jí)倍增的YPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)4次傳代后，CBS2479-H2O2、CBS8904-H2O2、CBS2479-MSB、CBS8904-MSB菌株對(duì)氟康唑、H2O2和MSB的MIC值均為誘導(dǎo)前MIC值的2倍。經(jīng)歷回復(fù)性實(shí)驗(yàn)以后，CBS8904-H2O2、CBS8904-MSB菌株的MIC H2O2均恢復(fù)到誘導(dǎo)前水平，但其余均與誘導(dǎo)第4代的MIC