抗氧化劑n-乙酰半胱氨酸治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床協(xié)同作用觀察.pdf

1、研究背景:
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)是典型的自身免疫性疾病，其主要特征是血清中出現(xiàn)以抗核抗體為主的多種自身抗體和多系統(tǒng)損害。近年來，關(guān)于氧化應(yīng)激失衡在SLE發(fā)病中作用的多項(xiàng)研究證實(shí):SLE的發(fā)病及器官損害與機(jī)體氧化應(yīng)激失衡有關(guān)。
　　正常情況下，體內(nèi)氧化抗氧化系統(tǒng)是個(gè)平衡過程，在某些病理情況下，氧化過程超過抗氧化系統(tǒng)的抗衡能力，平衡打破以后，活性氧化物(ROS)增

2、多，后者通過一系列化學(xué)反應(yīng)損傷細(xì)胞膜、DNA及脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，導(dǎo)致相應(yīng)的功能障礙，此過程稱為氧化應(yīng)激?；钚匝趸?ROS)是導(dǎo)致組織病理損傷的主要活躍性物質(zhì)，清除機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，直接檢測(cè)非常困難，血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平是傳統(tǒng)的反應(yīng)氧化過度的指標(biāo)。近年的研究結(jié)果顯示8-表前列腺素F2α(8-epi-P6F2α)是氧化應(yīng)激的敏感指標(biāo)，它是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化時(shí)的產(chǎn)物，性質(zhì)穩(wěn)定，易被檢測(cè)，能很好的反映體內(nèi)自由基損害程度。體內(nèi)抗氧化系

3、統(tǒng)分酶類和非酶類兩部分，這些抗氧化系統(tǒng)物質(zhì)可以對(duì)抗ROS，通過一系列反應(yīng)，把過氧化物還原為羥基化合物，促進(jìn)過氧化氫(H2O2)的分解為水，從而把有毒性的化合物轉(zhuǎn)化為無毒性的代謝產(chǎn)物，避免了組織細(xì)胞受氧化應(yīng)激的損害。
　　糖皮質(zhì)激素作為臨床應(yīng)用廣泛的傳統(tǒng)的免疫抑制劑，是目前治療SLE的主要藥物，可以使患者生存率明顯提高，但是，其不良反應(yīng)如無菌性骨壞死、嚴(yán)重感染增加、嚴(yán)重骨質(zhì)疏松、心腦血管病變等讓無數(shù)患者付出了沉痛的代價(jià)。因此，近年來

4、關(guān)于SLE非激素或少激素治療的研究日益增多，經(jīng)典免疫抑制劑如環(huán)磷酰胺治療SLE的方案日趨合理多樣，新型免疫抑制劑如來氟米特、嗎替麥考酚酯、他克莫司等在緩解及控制維持SLE特別是狼瘡性腎炎病情方面，已經(jīng)取得了可喜的進(jìn)展。以單克隆抗體藥物為代表的靶向治療更是在小規(guī)模的臨床試驗(yàn)中取得了突破性進(jìn)展。此外，在非免疫抑制劑藥物的嘗試中，出現(xiàn)了諸多有前景的選擇，如羥氯喹的臨床資料已經(jīng)使之成為SLE治療的基礎(chǔ)用藥，其他藥物的嘗試也開始有陸續(xù)的臨床觀察如

5、他汀類藥物、維生素D及抗氧化劑的臨床應(yīng)用，其中，近年來已有多種抗氧化劑用于治療SLE，部分藥物的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示出了良好的臨床應(yīng)用前景。
　　基礎(chǔ)病理學(xué)證實(shí)氧化應(yīng)激參與了機(jī)體內(nèi)炎癥的產(chǎn)生，作為自身免疫性炎癥性疾病，SLE的發(fā)病及組織損害關(guān)系與氧化應(yīng)激關(guān)系也已經(jīng)被多項(xiàng)研究證實(shí)。因此，有多項(xiàng)研究開始探討SLE抗氧化劑治療的可能前景。N-乙酰半胱氨酸(NAC)是經(jīng)典的抗氧化劑，它是體內(nèi)非必需氨基酸L-半光氨酸乙?；难苌?，能直接干擾各

6、種自由基生成，且能清除已生成的自由基，同時(shí)能提高機(jī)體內(nèi)的谷胱甘肽的含量，抑制炎癥反應(yīng)核因子-kB，拮抗細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝活性，所以具有廣泛的生物學(xué)活性，在機(jī)體的炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答等多個(gè)生理活動(dòng)調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。
　　2012年，首個(gè)隨機(jī)雙盲病例對(duì)照的N-乙酰半胱氨酸(NAC)治療SLE研究在Arthritis Rheum雜志發(fā)表，隨后美國(guó)學(xué)者也進(jìn)行了NAC的治療SLE的臨床觀察，標(biāo)志著NAC可能會(huì)成為SLE的治療藥物之一

7、。但目前尚沒有國(guó)內(nèi)相關(guān)研究資料。
　　本課題旨在探討NAC對(duì)國(guó)內(nèi)漢族人群SLE的療效，但因倫理學(xué)因素，未設(shè)安慰劑對(duì)照組，而是選擇輕癥SLE予以兩種不同治療方案，通過含NAC聯(lián)合方案的協(xié)同增益作用來觀察NAC的療效。以期探討SLE非糖皮質(zhì)激素治療的更多臨床選擇。
　　為較全面地觀察NAC在SLE中抗氧化治療的效果，我們選用MRL/lpr小鼠作為狼瘡小鼠模型，應(yīng)用N-乙酰半胱氨酸干預(yù)MRL/lpr小鼠，觀察小鼠血清中NO、MDA

8、、SOD、GSH-PX水平的變化情況，同時(shí)檢測(cè)小鼠血清抗ds-DNA水平及尿蛋白變化，以初步探討NAC對(duì)SLE氧化應(yīng)激的影響及治療效應(yīng)。同時(shí)對(duì)輕癥SLE患者予以含NAC的非糖皮質(zhì)激素方案治療，分析NAC在輕度SLE治療中的臨床協(xié)同作用。
　　研究目的
　　第一部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分
　　1.通過觀察自發(fā)性狼瘡小鼠模型MRL/lpr小鼠血清氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化情況，了解系統(tǒng)性紅斑狼瘡初期機(jī)體氧化應(yīng)激特征。
　　2.初步了解

9、抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對(duì)狼瘡小鼠模型MRL/lpr小鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響及對(duì)狼瘡小鼠的治療作用。
　　第二部分臨床研究部分
　　1.觀察N-乙酰半胱氨酸(NAC)對(duì)輕癥系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者治療前后血清一氧化氮(NO)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、人8異前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)的影響，同時(shí)觀察患者血沉(ESR)、抗雙鏈DNA(Ds-DNA)、免疫球蛋白G(IgG)、補(bǔ)體3(C3)及系統(tǒng)性紅斑狼瘡病情活動(dòng)

10、評(píng)分(SLEDAI)的變化。
　　2.探討N-乙酰半胱氨酸聯(lián)合合非糖皮質(zhì)激素方案（硫酸羥氯喹）治療輕癥系統(tǒng)性紅斑狼瘡能否增加近期療效。
　　研究方法
　　第一部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分
　　實(shí)驗(yàn)分為3組:正常對(duì)照組(BALB/c小鼠)6只;狼瘡模型鼠(MRL/lpr鼠)組20只;隨機(jī)分為非干預(yù)組10只，NAC觀察組10只，觀察組各鼠給予NAC150mg/d腹腔注射，共30天。正常對(duì)照組和非干預(yù)組各鼠每天給予等量0.9％氯化

11、鋪?zhàn)⑸湟焊骨蛔⑸?。試?yàn)30天后留取足量尿液，處死小鼠獲取血清標(biāo)本,分別檢測(cè)小鼠尿蛋白、抗ds-DNA抗體變化。同時(shí)分別采用硝酸根還原酶法、硫代巴比妥酸法、黃嘌呤氧化酶-羥胺法、化學(xué)比色法檢測(cè)各組小鼠血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的表達(dá)水平，觀察分析各指標(biāo)的變化情況，分析NAC的治療作用。
　　第二部分臨床研究部分
　　65例輕度SLE患者分對(duì)照組30例，應(yīng)

12、用硫酸羥氯喹治療，觀察組35例，除硫酸羥氯喹治療外加用NAC（1200mg/日），在治療前、治療6月檢測(cè)血清一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)、人8異前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）、抗雙鏈DNA(Ds-DNA)、免疫球蛋白G(IgG)、補(bǔ)體3(C3)。同時(shí)記錄患者血沉(ESR)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡病情活動(dòng)評(píng)分(SLEDAI)的變化。
　　研究結(jié)果
　　第一部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分
　　1.狼瘡模型鼠組的MDA、NO水平

13、分別為(12.35±2.56) nmol/ml和(51.23±22.15) umol/l，明顯高于對(duì)照組的(5.26±1.89) nmol/ml和(32.36±18.56)umol/l（P均＜0.05），狼瘡模型鼠組的SOD、GSH-PX水平分別為(51.05±12.35)U/ml和(155.19±32.48) U/ml，明顯低于對(duì)照組的(75.41±20.54) U/ml和(195.34±23.02) U/ml（P均＜0.05)。

14、r>　　2.狼瘡鼠模型組血清MDA、NO水平和抗dsD-NA抗體呈現(xiàn)正相關(guān)(r=0.5329，0.6675，P＜0.05)而GSH-PX、SOD則與抗dsDNA抗體呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(r=-0.6476，-0.5746，P＜0.05)。
　　3.應(yīng)用N-乙酰半胱氨酸干預(yù)4周后，觀察組狼瘡模型鼠的MDA、NO水平分別為(11.23±1.64) nmol/ml和(46.28±19.35) umol/l，明顯低于非干預(yù)組組的(14.12±3.2

15、0) nmol/ml和(32.36±18.56) umol/l（P均＜0.05），狼瘡模型鼠的SOD、GSH-PX水平分別為(83.25±21.46) U/ml和(221.30±23.85) U/ml，明顯高于非干預(yù)組的(60.12±22.41)U/ml和(183.62±22.14)U/ml（P＜均0.05）。
　　4.應(yīng)用N-乙酰半胱氨酸干預(yù)4周后，觀察組狼瘡模型鼠的尿蛋白(102.57±18.21) ng/ml，明顯低于非干預(yù)

16、組(126.24±21.32) ng/ml（P＜0.05）;觀察組狼瘡模型鼠的血清ds-DNA(15.40±2.10) ng/ml，明顯低于非干預(yù)組(18.02±2.32) ng/ml(P＜0.05)。
　　第二部分臨床研究部分
　　1.治療6月后，觀察組SLE患者血清NO(36.45±8.4) umol/l、8-iso-PGF2α(41.26±8.36) ug/l與治療前NO(56.53±8.9)umol/l、8-iso-

17、PGF2α(65.32±10.23)ug/l比較明顯降低（P＜0.05），而GSH明顯升高(1.01±3.26 mg/gVS0.45±0.23 mg/g)(P＜0.05)。
　　2.對(duì)照組SLE治療6月比較，各指標(biāo)(NO50.37±8.9umol/l，8-iso-PGF2α55.65±8.45ug/l，GSH0.62±0.34mg/g)與治療前(NO57.05±7.8umol/l，8 iso-PGF2α63.59±11.36 ug

18、/l，GSH0.49±0.31mg/g)均無顯著差異（P＞0.05）。
　　3.觀察組SLE治療6月SLEDAI(3.78±1.20)與治療前(7.33±1.41)比較明顯降低（P＜0.05）;對(duì)照組SLE治療6月SLEDAI(5.50±0.92)與治療前(7.50±1.41)比較亦明顯降低（P＜0.05）。治療6月后，觀察組SLEDAI(3.78±1.20)與對(duì)照組SLEDAI(5.50±0.92)明顯降低（P＜0.05）。觀察

19、組及對(duì)照組治療6月與治療前比較IgG無明顯差異(19.64±6.83g/lVS23.22±7.23g/l;20.11±5.69g/l VS24.95±8.21g/l)（P均＞0.05）。觀察組及對(duì)照組治療6月與治療前比較C3變化無明顯差異(0.82±0.24g/lVS0.85±0.32g/l;0.73±0.21 g/l VS0.72±0.26g/l)(P＞0.05).治療6月觀察組ESR(38.65±10.36)mm/h，抗ds-DNA

20、(45.36±16.32) IU/l與治療前ESR(55.11±13.56) mm/h，抗ds-DNA(78.56±15.36)IU/l比較明顯降低（P＜0.05）;對(duì)照組SLE治療6月比較各指標(biāo)(ESR48.67±10.54mm/h，抗ds-DNA60.38±11.85IU/l)與治療前(ESR56.39±14.20mm/h，抗ds-DNA75.63±14.35IU/l)比較均無顯著差異（P＞0.05）。
　　研究結(jié)論