難治性根尖周炎糞腸球菌臨床分離株的生物學(xué)特性及其抗菌方法的研究.pdf

1、難治性根尖周炎通常指使用常規(guī)的根管治療方法反復(fù)進(jìn)行治療卻仍遷延不愈的根尖周炎，是臨床治療的難點(diǎn)與重點(diǎn)。在持續(xù)感染根管中通常存在著擁有頑強(qiáng)生命力的糞腸球菌（Enterococcus faecalis,E.f），它具有多種不同于其他細(xì)菌的獨(dú)特的生物學(xué)特性，目前由于存在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法及病例數(shù)量等方面因素的限制，對(duì)于難治性根尖周炎病例中E.f的檢出、臨床分離株與標(biāo)準(zhǔn)株之間的生物學(xué)表型差異及關(guān)于臨床分離株的殺菌效果研究尚無(wú)足夠的證據(jù)。故本實(shí)驗(yàn)的主要

2、目的是檢測(cè)E.f在難治性根尖周炎病例中的檢出率及其與臨床癥狀之間的相關(guān)性，分析E.f臨床分離株的表型差異及探討幾種抗菌方法對(duì)分離株的殺滅效果，主要分為以下三部分實(shí)驗(yàn)：
　　1.臨床樣本中糞腸球菌的分離鑒定及表型測(cè)定
　　按照已設(shè)定的納入排除標(biāo)準(zhǔn)收集2014年12月至2015年3月之間因難治性根尖周炎（至少接受過(guò)2次正規(guī)根管治療后，出現(xiàn)癥狀者）在本科室進(jìn)行根管再治療的病例信息，使用 Reciproc單支銼按照事先設(shè)定的步驟采集

3、根管內(nèi)的細(xì)菌樣本，實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)，16srRNA測(cè)序鑒定。將E.f陽(yáng)性樣本進(jìn)行生物學(xué)特性的測(cè)定，分別使用結(jié)晶紫染色法結(jié)合紫外分光光度測(cè)定值來(lái)檢測(cè)生物膜形成能力、細(xì)菌計(jì)數(shù)法結(jié)合OD600值法測(cè)定細(xì)菌生長(zhǎng)曲線及使用96孔板法測(cè)定各菌株的耐酸堿能力。最后將細(xì)菌的檢出率與臨床癥狀之間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，將各項(xiàng)生物學(xué)特性結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，分析臨床分離株與標(biāo)準(zhǔn)株之間的表型差異。
　　結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)共采集難治性根尖周炎患牙中的細(xì)菌樣本39例，經(jīng)分

4、離鑒定共得到E.f臨床分離株18例，其檢出率為46.15％。與此同時(shí)，在對(duì)16srRNA序列測(cè)定結(jié)果與基因組的比對(duì)中發(fā)現(xiàn)，各臨床分離株均與E.f V583的序列存在高相似度（≈99%）。E.f的檢出與疼痛、腫脹、竇道及無(wú)癥狀四組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。E.f標(biāo)準(zhǔn)株V583與18株臨床分離株（S1-S18）均可以形成生物膜，且與標(biāo)準(zhǔn)株比較CV染色OD570值有顯著性差異（P＜0.05）的共7株，但在細(xì)菌生長(zhǎng)曲線、耐酸堿能力方面

5、沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。細(xì)菌生物膜形成能力與臨床癥狀之間沒(méi)有明顯相關(guān)性（P＞0.05）。
　　2.現(xiàn)有根管消毒方法對(duì)臨床分離株殺菌效果的研究
　　超聲沖洗作為目前臨床應(yīng)用中被普遍認(rèn)可的消毒方法，已納入規(guī)范的根管消毒步驟。而最新引進(jìn)的激光技術(shù)以其良好的消毒效果也已被更多的臨床醫(yī)生及科研工作者認(rèn)可?；谀壳皩?duì)激光和超聲激活技術(shù)用于根管消毒的作用比較的研究結(jié)果來(lái)看，在臨床應(yīng)用中此兩種技術(shù)哪一個(gè)可以達(dá)到更好的根管消毒效果，其

6、結(jié)論大不一致。因此，我們擬通過(guò)系統(tǒng)評(píng)價(jià)的方法來(lái)解決這一臨床問(wèn)題。
　　即便本領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)研究仍存在一些不足，但我們可以看出：LAI包括PIPS在內(nèi)的激光處理方式有著其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。因此，在本領(lǐng)域設(shè)計(jì)更加完善的高質(zhì)量文章供meta分析（定量分析）之前，我們暫且認(rèn)為激光的作用效果略好于超聲處理組。隨后，在體外建立 E.f饑餓狀態(tài)的離體牙感染根管模型，使用系統(tǒng)評(píng)價(jià)得出的優(yōu)勢(shì)消毒方法與幾種根管消毒劑對(duì)E.f臨床分離株與標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行殺菌效果研究。在

7、使用Er:YAG激光配合NaOCl這一特定組合對(duì)E.f標(biāo)準(zhǔn)株ATCC29212及臨床分離株中生物膜形成能力最強(qiáng)的一株進(jìn)行殺菌實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，無(wú)論在標(biāo)準(zhǔn)株還是分離株的感染根管中，Er:YAG激光組與 NaOCl陽(yáng)性對(duì)照組在根管表面及各深度處殺菌效果均顯著優(yōu)于陰性對(duì)照組（P＜0.05）。兩組細(xì)菌的Er:YAG激光處理組殺菌效果均好于5.25% NaOCl組。另外，隨著深度增加，兩組細(xì)菌的細(xì)菌減少率有降低的趨勢(shì)，且在對(duì)同一深度處不同細(xì)菌的比較中發(fā)