關(guān)附胺醇衍生物體外干預(yù)消化道腫瘤細胞株AGS和SW480的實驗研究.pdf

1、目的:1、以中藥關(guān)白附中的有效成分之一，關(guān)附胺醇(GFAA)為底物，應(yīng)用?；姆椒▽ζ溥M行結(jié)構(gòu)修飾，半合成新的衍生物，豐富二萜生物堿的數(shù)據(jù)庫。2、研究關(guān)附胺醇衍生物對人胃癌細胞株AGS、人結(jié)腸癌細胞株SW480的體外抗腫瘤活性，初步總結(jié)其構(gòu)效關(guān)系，并探討其抗腫瘤活性的可能機制。
　　方法:1、以關(guān)附胺醇(GFAA)為底物，采用吡啶為溶劑、催化劑或四氫呋喃(THF)為溶劑、吡啶為催化劑，使用一系列的苯甲酰化試劑在加熱條件下進行反應(yīng)，

2、獲得GFAA的半合成衍生物。利用MS、IR、1HNMR、13C NMR等二維譜確定化合物的結(jié)構(gòu)。2、采用MTT法檢測GFAA衍生物AA-Ac1、AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac5、AA-Ac6、AA-Ac7作用于指數(shù)生長期的AGS細胞、SW480細胞的增殖抑制活性，從而確定各化合物對兩種腫瘤細胞株作用12h、24h、48h的IC50值;3、利用流式細胞技術(shù)分析各活性化合物對AGS細胞、SW480細胞凋亡及細胞周期的影

3、響。
　　結(jié)果:
　　1、成功得到關(guān)附胺醇(GFAA)半合成衍生物7個，利用MS、IR、1HNMR、13C NMR等二維譜確定化合物的結(jié)構(gòu)，高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)檢測純度，均＞95％。
　　2、AGS細胞:所獲得的7個化合物中，有5個(AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac5、AA-Ac6)對指數(shù)生長期的AGS細胞有增殖抑制

4、作用，作用12小時后的IC:(20.95±0.30)μg/ml、(7.94±0.58)μg/ml、(7.39±0.61)μg/ml、＞50μg/ml、μg/ml;作用24小時后的IC50值分別為:(14.12±0.11)μg/ml、(3.89±0.15)μg/ml、(6.27±0.44)μg/ml、＞50μg/ml、(16.09±0.19)μg/ml;作用48小時后的IC50值分別為:（8.73±0.15）μg/ml、(3.09±0.2

5、4)μg/ml、（4.18±0.42)μg/ml、（19.83±0.07)μg/ml、（7.74±0.26)μg/ml。
　　3、SW480細胞:所獲得的7個化合物中，有4個(AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac6)對指數(shù)增殖期的SW480細胞有增殖抑制作用，作用12小時后的IC50值分別為:（17.00±0.42）μg/ml、（7.48±0.52）μg/ml、（6.94±0.62）μg/ml、（34.84±0.2

6、0）μg/ml;作用24小時后的IC50值分別為:（13.35±0.56）μg/ml、(4.50±0.32)μg/ml、（4.88±0.85）μg/ml、（23.36±0.75）μg/ml;作用48小時后的IC50值分別為:（10.38±026）μg/ml、（3.60±0.20）μg/ml、（4.53±0.89）μg/ml、(11.91±0.64)μg/ml。
　　4、流式細胞儀(FCM)分析細胞凋亡:在活性化合物作用48h后，A

7、GS細胞對照組、實驗組（AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac5、AA-Ac6）細胞總凋亡比率分別為:(13.25±0.78)％、(28.2±1.13)％、(26.75±1.77)％、(39.25±0.92)％、(30.95±2.62)％、（40.85±0.35）％;SW480細胞對照組、實驗組(AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac6)細胞總凋亡比率分別為:（4.45±1.06）％、（22.85±1.63）

8、％、(14.65±0.78)％、（18.05±0.78）％、（29.4±0.85）％;實驗組與對照組相比，AGS細胞、SW480細胞總凋亡比率顯著升高，并以晚期凋亡為主。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5、流式細胞儀(FCM)分析細胞周期:在活性化合物作用48h后，AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac6可顯著提高AGS細胞G2/M期細胞的比例，四者分別為:(22.07±1.34)％、(16.08±0.76)％、(14.

9、14±2.33)％，以及(3.93±0.13)％;AA-Ac2、AA-Ac5可顯著提高AGS細胞S期細胞的比例，三者分別為:(45.28±0.75)％、(45.46±0.55)％，以及(39.14±1.44)％;AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac6可顯著提高SW480細胞G2/M期細胞的比例，五者分別為:(60.04±1.34)％、(68.65±1.67)％、(63.42±0.84)％、(69.68±0.64)％，以及

10、(48.77±1.43)％。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、本課題中所設(shè)計的技術(shù)路線是合理可行的，按此路線可獲得一定得率的關(guān)附胺醇(GFAA)半合成衍生物。
　　2、GFAA半合成衍生物AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac5、AA-Ac6對指數(shù)增殖期的AGS細胞有不同程度的增殖抑制活性，并呈時間、劑量依賴性。
　　3、GFAA半合成衍生物AA-Ac2、AA-Ac3、AA-

11、Ac4、AA-Ac6對指數(shù)增細胞有不同程度的增殖抑制活性，并呈時間、劑量依賴性。
　　4、GFAA半合成衍生物AA-Ac2、AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac5、AA-Ac6與對照組相比，能顯著誘導(dǎo)指數(shù)增殖期的AGS細胞、SW480細胞凋亡，尤其是晚期凋亡
　　5、GFAA半合成衍生物AA-Ac3、AA-Ac4、AA-Ac6可將AGS細胞阻滯在G2/M期，AA-Ac2、AA-Ac5可將AGS細胞阻滯在S期，AA-Ac2、