大鼠骨髓來源與前交叉韌帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞體外生物學(xué)特性的比較研究.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對(duì)于促進(jìn)前交叉韌帶重建術(shù)后的腱骨愈合具有積極的作用，最近的研究發(fā)現(xiàn)，前交叉韌帶中可以分離得到間充質(zhì)干細(xì)胞(ACLMSCs)，并且該細(xì)胞可以體外增殖及向骨、脂肪、軟骨等多向誘導(dǎo)分化。由于不同來源干細(xì)胞的增殖及分化潛能差異對(duì)臨床的選擇應(yīng)用具有指導(dǎo)意義，而骨髓來源與前交叉韌帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的體外生物學(xué)特性比較目前尚無明確報(bào)道。
　　目的：比較大鼠骨髓與前交叉韌帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖及成骨、成軟骨及

2、成脂分化潛能的差異。
　　方法：取SPF級(jí)6周齡雄性BN大鼠10只，體質(zhì)量200-220g，在無菌的條件下分別取BN大鼠前交叉韌帶及骨髓，貼壁法培養(yǎng)獲取BMSCs與ACLMSCs并進(jìn)行傳代，注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化，取生長(zhǎng)良好的P3代細(xì)胞用于以下實(shí)驗(yàn);體外克隆形成實(shí)驗(yàn)及CCK8法檢測(cè)增殖能力;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞免疫表型;體外誘導(dǎo)多向分化;實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)成骨(ALP、Bglap、Runx2、Bmp2、Spp1)、成軟骨(Col2

3、α1、Acan、Sox9)及成脂（PPARγ2及c/EBPα）相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：P3代ACLMSCs和BMSCs形態(tài)學(xué)相似，均表現(xiàn)為貼壁生長(zhǎng)的長(zhǎng)梭形細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型顯示，兩種細(xì)胞均表達(dá)CD29、CD90，基本不表達(dá)CD45及CD34;細(xì)胞增殖能力試驗(yàn)和細(xì)胞克隆形成分析顯示ACLMSCs比BMSCs具有更強(qiáng)的體外增殖能力(p=0.023＜0.05);兩種干細(xì)胞均可體外誘導(dǎo)成骨、成脂、成軟骨分化;分化相