副干酪乳桿菌VL8胞外多糖(VL8-EPS)的結(jié)構(gòu)與免疫活性研究.pdf

1、乳酸菌作為國際公認(rèn)的安全生物菌株，其產(chǎn)物因具有多種生物活性常常用于研發(fā)功能性產(chǎn)品，乳酸菌胞外多糖已然成為了當(dāng)今研究的熱點(diǎn)之一。而本研究就是以從芬蘭傳統(tǒng)發(fā)酵酸奶viili中分離、鑒定得到的一株副干酪乳桿菌VL8為基礎(chǔ)，研究其胞外多糖（VL8-EPS）的結(jié)構(gòu)和免疫調(diào)節(jié)活性，探究VL8-EPS對機(jī)體的免疫增強(qiáng)作用，進(jìn)而為功能性產(chǎn)品的研發(fā)提供基礎(chǔ)。主要是利用高碘酸氧化及Smith降解、傅里葉紅外光譜、核磁共振圖譜、β-消除反應(yīng)、剛果紅實(shí)驗(yàn)和碘-

2、碘化鉀反應(yīng)分析VL8-EPS的結(jié)構(gòu);體外試驗(yàn)測定VL8-EPS對小鼠脾淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞RAW264.7免疫調(diào)節(jié)活性作用;體內(nèi)試驗(yàn)測定VL8-EPS對正常小鼠的細(xì)胞免疫、體液免疫和巨噬細(xì)胞吞噬功能。主要研究結(jié)果如下:
　　1.一級結(jié)構(gòu)分析得知，VL8-EPS相鄰單糖基連接方式有1→3、1→6、1→2(1→4)，其糖苷鍵型比約為6.8∶1.2∶1，其中1→3糖苷鍵為主要鍵型;VL8-EPS是不含糖醛酸、具有毗喃環(huán)結(jié)構(gòu)的特征多糖;1H

3、 NMR、13C NMR共同證實(shí)VL8-EPS是由5種單糖組成，其多糖含有α和β兩種糖苷鍵型，是以β型吡喃糖為主的糖環(huán)結(jié)構(gòu);VL8-EPS的糖肽鍵連接方式為O-鏈接。剛果紅實(shí)驗(yàn)和碘-碘化鉀反應(yīng)確定VL8-EPS高級結(jié)構(gòu)，可能是具有螺旋構(gòu)象、存在較長的側(cè)鏈和較多的分支結(jié)構(gòu)。
　　2.12.5～800μg/mL濃度范圍內(nèi)的VL8-EPS能顯著地促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，而且在協(xié)同ConA作用時(shí)，其誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖效果明顯高于單獨(dú)

4、施用VL8-EPS，400μg/mL的VL8-EPS增殖效果較對照提高了49.7％(P＜0.01);與ConA單獨(dú)刺激組相比，50～800μg/mL的VL8-EPS顯著地促進(jìn)了小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2、IFN-γ和IL-6細(xì)胞因子的分泌水平(P＜0.01)，其分泌量隨著多糖濃度增加而增加，具有量效關(guān)系。
　　3.VL8-EPS分別對巨噬細(xì)胞RAW264.7作用12h、24h和48h來探究VL8-EPS對巨噬細(xì)胞的活性作用，發(fā)現(xiàn)VL8

5、-EPS對巨噬細(xì)胞無毒性作用，在一定程度上還促進(jìn)了巨噬細(xì)胞增殖;50，200，400，800μg/mL的VL8-EPS能夠提高巨噬細(xì)胞RAW264.7吞噬中性紅能力，促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO及iNOS mRNA的表達(dá)，促進(jìn)了巨噬細(xì)胞IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10免疫細(xì)胞因子的分泌(P＜0.01)，且各種檢測指標(biāo)隨著VL8-EPS濃度的增加而增加，具有量效關(guān)系，VL8-EPS的作用效果與陽性對照LPS相似。
　　4.對正常

6、小鼠分別灌胃給予0.5，1.0，2.0g/kg/day的VL8-EPS能夠提高小鼠體重、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、血清中溶血素水平和小鼠血清中與免疫相關(guān)的細(xì)胞因子的含量(P＜0.05或P＜0.01)。其中低、高劑量組的VL8-EPS吞噬能力分別較對照提高了40.89％和30.11％(P＜0.01);小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6的分泌量隨著多糖濃度增加而增加，具有量效關(guān)系。
　　結(jié)論: