副干酪乳桿菌的分離鑒定及免疫功能研究.pdf

1、副干酪乳桿菌是干酪乳桿菌的一個亞種，常見于健康人體腸道，自然發(fā)酵乳制品及其它發(fā)酵產(chǎn)品中，該菌種有很強的耐NaCl、耐酸及耐膽汁鹽能力，某些菌株還有抗過敏作用，在我國，對其研究較少。本研究擬從傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品中分離篩選優(yōu)良性狀的乳酸菌，通過形態(tài)學(xué)、生理生化特征、耐受性及分子生物學(xué)方法進行系統(tǒng)鑒定，同時進行分離株對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究，為豐富我國益生菌菌株資源及副干酪乳桿菌的研究和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，奠定理論基礎(chǔ)。
　　 以民間多種發(fā)

2、酵奶制品和保健品為材料，從中分離出31株細菌，其中12株符合乳酸菌的性狀。通過菌株對NaCl、酸和膽汁鹽的耐受能力，篩選出LP2、LP4和LP9三株優(yōu)良菌株，經(jīng)形態(tài)學(xué)和生理生化鑒定，三株菌與副干酪乳桿菌性狀一致。進一步的胃腸道模擬環(huán)境耐受性試驗表明，菌株LP2和標準菌CICC20241在pH3.0，0.3％膽汁鹽，10 mg/mL胃蛋白酶和10 mg/mL胰蛋白酶環(huán)境下處理24h后均保持了90％以上的存活率，耐受性最強。
　　

3、根據(jù)GeneBank(FJ607300)發(fā)表的Lactobacillus paracasei16S rDNA基因序列，設(shè)計并合成一對特異引物，采用PCR技術(shù)擴增出LP2的16S rDNA片段，序列測定與分析結(jié)果表明，LP2與GenBank中Lactobacillus paracasei EU676339同源性為99.6％，進一步從分子水平上鑒定了分離菌株LP2為副干酪乳桿菌。
　　 對菌株LP2和CICC20241進行了免疫調(diào)節(jié)

4、功能的研究。選用ICR小鼠分成4批共360只，雌雄各半隨機分為對照、低劑量、中劑量和高劑量4個劑量組，其中低、中、高劑量組每天灌喂不同劑量重懸于10％脫脂乳中的LP2和CICC20241，對照組每天灌喂等量的10％脫脂乳，試驗周期為3周。結(jié)果表明，綿羊紅細胞誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)，中、高劑量組24h足跖增厚均高于對照組，.并有顯著性差異(P＜0.05)，中高劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)；LP2中、高劑量組小鼠脾淋巴細