干酪乳桿菌SY13粘附屬性研究.pdf

1、干酪乳桿菌在制作功能性酸乳、發(fā)酵豆乳、干酪和乳酸菌飲料當中廣泛應(yīng)用。由于干酪乳桿菌優(yōu)良的發(fā)酵風味和良好的功能性，其在食品研究與開發(fā)中占有重要地位。干酪乳桿菌SY13分離自傳統(tǒng)乳制品。經(jīng)研究表明，干酪乳桿菌SY13具有良好的抗氧化功能。粘附在人體腸道中的益生菌能夠調(diào)節(jié)腸道菌群，抑制腸道病原物生長。益生菌在人體腸道粘附定植是其進一步發(fā)揮益生功能的前提。對于乳酸菌的粘附能力測定主要集中于細胞研究，但是，單純的細胞培養(yǎng)與現(xiàn)實的腸道環(huán)境相去甚遠。

2、本文針對干酪乳桿菌SY13在BALB/c小鼠腸道粘附屬性的研究，開發(fā)了在BALB/c小鼠腸道內(nèi)干酪乳桿菌的檢測方法，并對干酪乳桿菌SY13在BALB/c小鼠腸道粘附規(guī)律進行了測定和粘附規(guī)律原因的解析。具體研究內(nèi)容如下:
　　(1)本論文采用TaqMan-MGB RT-PCR來實現(xiàn)干酪乳桿菌SY13在BALB/c小鼠腸道內(nèi)的檢測。引物設(shè)計的模板選取的是干酪乳桿菌的特有基因CasX，DNA標準品的制作是通過目標片段連接T載體，藍白篩選

3、而制得。引物的特異性是通過篩選遺傳相近乳桿菌擴增陰性來證明的。方法的標準方程曲線是Y=-3.531gC+45.28（R2=0.998，Y代表CT，C代表標準品DNA濃度，PCR的擴增效率是92.011％），試驗方法的檢出限是102copies/μL。經(jīng)引物的特異性驗證和后續(xù)的小鼠試驗證明，方法可行。
　　(2)本論文通過BALB/c小鼠體內(nèi)試驗測定干酪乳桿菌SY13腸道粘附能力。實驗發(fā)現(xiàn)，干酪乳桿菌SY13在小鼠的盲腸和結(jié)腸中分布

4、較多，空腸分布較少，回腸中未發(fā)現(xiàn)目標菌。本研究從干酪乳桿菌SY13的灌胃時間，宿主年齡和益生元的影響三個方面對干酪乳桿菌SY13的粘附能力進行了分析。結(jié)果表明，灌胃時間，宿主年齡和益生元都對干酪乳桿菌SY13的粘附能力有影響。灌胃時間越長，干酪乳桿菌SY13的數(shù)量越多，在宿主腸道內(nèi)的保留時間也越長（單次灌胃，保留時間是3天;28天灌胃后，保留時間大于7天）。益生元能夠改變干酪乳桿菌SY13在小腸中的分布。同時灌胃益生元和干酪乳桿菌SY1

5、3后，在回腸中檢測到了目標菌。在灌胃干酪乳桿菌SY13后，青年組小鼠中的回腸中，并未檢測到目標菌，但是在老齡組中，卻能檢測到。研究結(jié)果表明灌胃時間越長，有益生元輔助，越有利于干酪乳桿菌SY13在小腸中的粘附。
　　(3)本論文對干酪乳桿菌SY13在小鼠腸道內(nèi)的粘附規(guī)律的原因進行了探究。選取了部分試驗小鼠盲腸腸內(nèi)容物的基因組DNA進行了16S rRNA擴增子的測序試驗。試驗發(fā)現(xiàn)，青年組小鼠的腸道核心微生物菌群數(shù)量大于老齡組（青年組1

6、45左右，老齡組115左右）。灌胃干酪乳桿菌SY13、低聚果糖和乳果糖后，alpha多樣性指數(shù)升高，宿主腸道內(nèi)的微生物多樣性升高;經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，灌胃后，試驗組小鼠盲腸中的梭菌類明顯下降，擬桿菌類明顯上升，腸道菌群結(jié)構(gòu)明顯改善。
　　本研究所開發(fā)的干酪乳桿菌TaqMan-MGB探針檢測方法為干酪乳桿菌的檢測提供新的參考。本文從粘附理論的角度，為干酪乳桿菌SY13的功能性評價以及為其后期開發(fā)功能性食品或者發(fā)酵生產(chǎn)飼料等工業(yè)應(yīng)用提供了部分