2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:探討溺死大鼠死后不同時(shí)間點(diǎn)mRNA的變化及穩(wěn)定性,篩選穩(wěn)定的內(nèi)參基因,并定量水通道蛋白5(Aquaporin,AQP-5)mRNA的表達(dá)。
  方法:選取30只無(wú)特定病原體(Specific pathogen Free,SPF)級(jí)健康成年SD(Sprague Dawley)大鼠,并按照隨機(jī)單位組設(shè)計(jì)分組法,以每組6只,隨機(jī)均勻分為對(duì)照組(脊椎脫臼法處死)、溺死15min組(溺死尸體置于水中15min),溺死4h組(溺死尸體置

2、于水中4h),溺死16h組(溺死尸體置于水中16h),溺死48h組(溺死尸體置于水中48h)。取溺死尸體及對(duì)照組尸體解剖,觀察肺臟變化,并分取肺組織,一部分用4%多聚甲醛(polyformaldehyde,PFA)中性PBS(phosphate buffer saline)液固定,用于形態(tài)學(xué)檢測(cè);一部分液氮速凍,提取RNA,采用qPCR(Real Time PCR,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng))篩選穩(wěn)定的內(nèi)參基因以及對(duì)AQP-5進(jìn)行定量檢測(cè)

3、。
  結(jié)果:與對(duì)照組比較,各溺死組大鼠肺部均呈嚴(yán)重水腫,一定程度破裂出血,并可感覺到明顯溺液存于肺臟。通過(guò)提取RNA,并行qPCR, geNorm和NormFinder排序篩選發(fā)現(xiàn)ACTB(β-Actin,β-肌動(dòng)蛋白)為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因;檢測(cè)AQP-5的表達(dá)我們發(fā)現(xiàn)溺死大鼠較對(duì)照組大鼠AQP-5相對(duì)表達(dá)量下降。
  結(jié)論:篩選出 ACTB為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因,各溺死時(shí)間點(diǎn)大鼠AQP-5 mRNA的表達(dá)均顯著下調(diào)。本研究中A

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