真菌SMO406的種屬鑒定及其木聚糖酶的分離純化研究.pdf

1、半纖維素的主要成分是木聚糖，它是地球上第二大可再生碳源。自然界中能降解半纖維素的微生物種類很多，它們都能分泌多種木聚糖酶。木聚糖酶可將木聚糖降解成低聚木糖和木糖等小分子物質(zhì)，它在生物轉(zhuǎn)化、食品、飼料、醫(yī)藥、能源、造紙、紡織等行業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用，具有廣闊的開發(fā)前景。 本文以實(shí)驗(yàn)室內(nèi)保存的一株可高效降解木聚糖的真菌SM0406為目的菌株。經(jīng)土豆培養(yǎng)基培養(yǎng)后，SM0406菌落形態(tài)為：圓形，凸起，干燥，無光澤，呈深綠色，反正面顏色無差

2、別。掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SM0406的菌絲細(xì)長，分叉少，無橫隔，表面光滑，直徑約0.8～1.5 μm；分生孢子梗呈帚狀分支，至少2級以上輪生，分生孢子從頂端脫落；分生孢子呈短棒狀，單生，孢子直徑1～2μm，長4～6μm。SM0406能降解纖維素和淀粉，明膠的液化不明顯。經(jīng)過18S rDNA和部分ITS基因序列的比對，本文分離到的這株真菌與Myrothecium sp.屬同源性達(dá)到99％，故命名為Myrothecium sp.SM0406(

3、以后簡稱M.sp.SM0406)。 同時(shí)，本文研究了利用M.sp.SM0406液體發(fā)酵生產(chǎn)木聚糖酶的最佳條件：2％麩皮為碳源，0.1％硫酸銨為氮源，500 ml三角瓶中裝培養(yǎng)基100ml，接種量為3％，培養(yǎng)時(shí)間為6天。在上述條件下，發(fā)酵液中木聚糖酶的酶活可達(dá)到89.6IU／ml。 取M. sp.SM0406發(fā)酵的粗酶液，經(jīng)過離心，超濾，分子篩層析和陽離子交換層析后，得到了一個(gè)分子量大約為48 kDa內(nèi)切木聚糖酶。從分

4、子量看，該酶屬于糖基水解酶家族10。該酶的最適反應(yīng)溫度為45℃，最適反應(yīng)pH值為pH6.5，最適反應(yīng)時(shí)間是10 min，K<,m><'app>為8.33 g／L，V<,max>為833μmol／g·min。酶在pH 5.5～7.5的緩沖體系內(nèi)比較穩(wěn)定，酶活可以保持在80％以上，在pH 6時(shí)最穩(wěn)定。Na<'+>、K<'+>、Li<'+>、Ba<'2+>、Mn<'2+>、Mg<'2+>、Ca<'2+>等金屬離子對酶活有促進(jìn)作用； Zn<'2