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文檔簡介
1、目的:
本研究采用分支鏈DNA技術(shù)(b-DNA)和免疫組織化學(xué)方法來分別檢測HPV陽性病人E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白表達(dá),探討不同級別上皮內(nèi)病變與HPV E6/E7 mRNA及HPV L1蛋白表達(dá)的關(guān)系,并評估這兩種方法在診斷宮頸上皮內(nèi)病變中的臨床價值,以期尋找最佳的宮頸病變檢測指標(biāo),為臨床分流HPV陽性病人,監(jiān)測宮頸病變進(jìn)展、復(fù)發(fā)等提供實驗依據(jù)。
方法:
1.收取2014年2月至2015年10
2、月在河南省直第三人民醫(yī)院行宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(thinprep cytologic test,TCT)的標(biāo)本,采用第二代雜交捕獲(hybridcaptureⅡ,HC2)法檢測其高危型人乳頭瘤狀病毒DNA,并追蹤其組織病理結(jié)果。選取其中HPV陽性且具有組織學(xué)診斷結(jié)果的患者127例,年齡16-77歲,(37.23±16.39)。其中24例細(xì)胞學(xué)檢測為未見上皮內(nèi)病變細(xì)胞或惡性細(xì)胞(Negative forIntraepithelial L
3、esion or Malignancy,NILM)且組織學(xué)診斷正常或慢性炎癥者設(shè)為對照組,收集其剩余TCT標(biāo)本和宮頸組織石蠟標(biāo)本,分別進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白檢測。
2.處理剩余TCT標(biāo)本,采用分支鏈DNA技術(shù)(b-DNA)檢測標(biāo)本中HPVE6/E7 mRNA水平。
3.采用免疫組織化學(xué)技術(shù),檢測宮頸組織石蠟標(biāo)本中人乳頭瘤狀病毒L1蛋白表達(dá)水平。
4.使用SPSS17.0軟件來進(jìn)行
4、數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白表達(dá)水平與宮頸病變嚴(yán)重程度間關(guān)系采用關(guān)聯(lián)分析;E6/E7 mRNA和HPVL1蛋白陽性率間比較采用McNemar檢驗,不同病變級別組間比較采用x2檢驗;不同檢驗方法間敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較采用x2檢驗。兩種檢測方法間一致性評估采用Kappa統(tǒng)計分析。α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。
結(jié)果:
1.在不同組織學(xué)分組對照組、CIN1、CIN2、CIN3
5、和鱗狀細(xì)胞癌(SquamousCells Cancer,SCC)組中HPV E6/E7 mRNA的陽性率分別為37.5%、53.6%、85.2%、94.1%、100.0%。HPV L1蛋白的陽性率分別為16.7%、60.7%、29.6%、11.8%、0%,HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白表達(dá)水平均與組織學(xué)診斷級別間有一定聯(lián)系(x2分別為35.801和27.320,均P<0.001),關(guān)聯(lián)系數(shù)r分別為0.469和0.421(
6、均P<0.001)。CIN1-(包括對照和CIN1)組HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯低于CIN2+組(包括CIN2、CIN3和SCC,x2=32.924,P<0.001),而CIN1-組HPV L1蛋白陽性率高于CIN2+組(x2=9.494,P<0.05)。
2.對應(yīng)不同細(xì)胞學(xué)診斷級別NILM、ASCUS、LSIL、ASC-H/LSIL-H、AGC、HSIL和SCC中E6/E7 mRNA陽性率分別為37.5%、63.
7、3%、68.8%、84.6%、100%、96.6%、100.0%; HPV L1蛋白表達(dá)的陽性率分別為16.7%、43.3%、68.8%、15.4%、14.3%、6.9%、0%。分析HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白的表達(dá)趨勢,發(fā)現(xiàn)二者均與細(xì)胞學(xué)診斷級別間有一定聯(lián)系(x2分別為31.680和30.553,均P<0.001),關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為(r=0.447和0.440,均P<0.001)。LSIL-組(包括NILM,ASCUS
8、和LSIL)E6/E7 mRNA陽性率明顯低于ASC-H+組(包括ASC-H,LSIL-H,AGC,HSIL和SCC,x2=24.403,P<0.001),而LSIL-組HPV L1蛋白陽性率明顯高于ASC-H+組(x2=15.930,P<0.001)。
3.HPV E6/E7 mRNA陽性率(73.2%)明顯高于HPV L1蛋白陽性率(26.0%,x2=42.451,P<0.001),兩種檢測方法的符合率為64.57%(82
9、/127),因而E6/E7mRNA和HPV L1蛋白表達(dá)水平間沒有聯(lián)系(x2=0.979,P>0.05)。
4.以組織學(xué)為金標(biāo)準(zhǔn),E6/E7 mRNA分別與HPV L1蛋白檢測及兩者聯(lián)合檢測方法間敏感性和陰性預(yù)測值比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(x2分別為2.988和4.474,均P>0.05);但兩者聯(lián)合檢測方法特異性高于E6/E7 mRNA檢測方法(x2=7.278,P<0.016),且其陽性預(yù)測值高于HPV L1蛋白方法(x2=6.
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