亞洲棉石系亞1號耐旱相關(guān)基因cDNA文庫的構(gòu)建與分析.pdf

1、我國是棉花種植大國，但干旱缺水等環(huán)境因素越來越威脅著棉花的生長發(fā)育。由于棉花耐旱性狀的復(fù)雜性和缺乏有效的選擇手段，常規(guī)育種對棉花耐旱性的改良進(jìn)展較慢。本研究是國內(nèi)外首次利用抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建棉花耐旱相關(guān)基因文庫，從分子水平上進(jìn)行了棉花耐旱EST的篩選，為分離、克隆、轉(zhuǎn)化棉花耐旱基因奠定了基礎(chǔ)。 本研究通過抑制消減雜交技術(shù)成功的構(gòu)建了高質(zhì)量的亞洲棉石系亞1耐旱相關(guān)cDNA文庫。經(jīng)過藍(lán)白斑篩選、菌落PCR、反向Northern、

2、生物信息學(xué)、RT-PCR等分子生物手段分析和檢驗(yàn)庫了的質(zhì)量。通過對隨機(jī)挑選的、經(jīng)過菌落PCR初步驗(yàn)證的960個(gè)有效克隆做反向Northern，最終篩選出陽性克隆392個(gè)。通過EST測序得到265個(gè)單一序列(unigene)，其中41個(gè)為重疊群(contigs)，224個(gè)為單拷貝(singlets)。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明：該抑制差減cDNA文庫中含有大量與耐旱相關(guān)的基因，且獲得的耐旱相關(guān)基因可以分為兩大類：一是功能蛋白類，如光合作用相關(guān)