α-latrotoxin對細胞分泌的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、a-latrotoxin是由黑寡婦蜘蛛分泌的僅作用于哺乳動物的毒素，在二價陽離子的作用下可以形成四聚體。其在細胞膜上存在有三種受體Neurexin，latrophilin和PTPd。通過和受體的結(jié)合，a-latrotoxin可以通過在細胞膜上形成的穿孔以及受體介導的信號通路而引起突觸前神經(jīng)遞質(zhì)的釋放以及細胞的分泌。其中在受體介導的信號通路中，a-latrotoxin除了動員細胞內(nèi)鈣庫參與作用以外，還可以通過其它特殊途徑直接作用于細胞的分

2、泌機制。對于a-latrotoxin以及其作用方式的研究必將有助于我們對細胞囊泡分泌機制以及神經(jīng)遞質(zhì)的釋放機制的認識。本論文中通過細胞膜電容檢測、細胞內(nèi)Ca2+熒光測量、Ca2+光解釋放以及碳纖維電極等技術(shù)手段對a-latrotoxin在大鼠胰腺b細胞的[Ca2+]I以及b細胞分泌的動力學影響進行了詳細研究。研究的主要結(jié)果如下：a-latrotoxin可以在b細胞膜上形成具有大電導的通道并導致細胞外液中的Ca2+內(nèi)流，但是a-latro

3、toxin不會引起細胞內(nèi)的鈣庫釋放。A-latrotoxin在β細胞的穿孔可被三價陽離子La3+阻斷。通過使用熒光持續(xù)照射使[Ca2+]I緩慢升高來刺激分泌，我們發(fā)現(xiàn)a-latrotoxin降低了b細胞分泌時的鈣閾值，但是不會對立即可釋放囊泡庫（RRP）的大小產(chǎn)生影響。通過Ca2+光解釋放技術(shù)，我們也發(fā)現(xiàn)分泌的立即可釋放囊泡庫的分泌動力學明顯加快，在同樣的[Ca2+]I下，a-latrotoxin使b細胞分泌的最大速度加大并且使b細胞的

4、分泌與Ca2+依賴關(guān)系向低鈣方向移動。與之相對應的是，在無Ca2+條件下，通過碳纖維電極的檢測發(fā)現(xiàn)a-latrotoxin可以在b細胞上引發(fā)一定的量子釋放。在a-latrotoxin作用方式的研究中，a-LTXN4C是一種有效的研究工具。它是一種a-latrotoxin突變體，與受體的親合力與野生型相同，但是其不能在細胞膜上形成穿孔，在存在二價陽離子（Ca2+或Mg2+）的情況下，a-LTXN4C會引起b細胞內(nèi)的鈣庫釋放，從而導致[Ca

5、2+]I升高。使用a-LTXN4C處理b細胞以后，可以在分泌的鈣閾值以及RRP動力學上得到與a-latrotoxin一致的結(jié)果。不僅如此，a-latrotoxin和a-LTXN4C的作用依賴于細胞外液中二價陽離子（Ca2+或Mg2+）的存在。使用不同的PKC阻斷劑都可以使a-latrotoxin和a-LTXN4C在細胞分泌上的作用受到抑制，表明a-latrotoxin和a-LTXN4C的作用通過了PKC的介導。從中我們可以得出結(jié)論a-l