?；悄懰釋?duì)小鼠免疫細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本文旨在通過觀察TCA對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞的影響，探討TCAX寸機(jī)體免疫細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)理。其主要內(nèi)容包括: 為了闡明TCA對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，本研究分別采用雞紅細(xì)胞半體內(nèi)法和體外培養(yǎng)的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅法測(cè)定了TCA對(duì)體內(nèi)、外小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響，結(jié)果證明，高、低劑量的TCA均能極顯著的提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞百分率(p<0.01)，顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的雞紅細(xì)胞吞噬指

2、數(shù)，0.015、0.3、1.5和15μg/mL的TCA均能顯著提高體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)中性紅的吞噬率(P<0.05)，表明TCA具有提高巨噬細(xì)胞吞噬功能的作用。采用ELISA法測(cè)定了TCA對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞分泌白介素-1β的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，高、低劑量的TCA均能極顯著提高正常和免疫抑制小鼠血清中的含量(P<0.01)，1.5和15μg/mL的TCA可顯著提高體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞ⅠL-1β的分泌量(P<0.01)，0.015和1

3、.5μg/mL的TCA可極顯著提高LPS活化的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞IL-1β的分泌量P<0.01)，0.3和15μg/mL的TCA可顯著提高LPS活化的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞IL-1β的分泌量(P<0.05)，表明TCA具有促進(jìn)腹腔巨噬細(xì)胞的分泌ⅠL-1β的功能。采用ELISA法，檢測(cè)了TCA對(duì)正常和免疫抑制模型小鼠血清中TNF-α含量的影響，結(jié)果證明，TCA能夠極顯著的提高正常小鼠和免疫抑制小鼠血清中TNF-α的含量(P<0.01)，表明TCA

4、具有刺激巨噬細(xì)胞分泌TNF-α功能。采用MTT法檢測(cè)了TCA對(duì)正常的腹腔巨噬細(xì)胞和適量LPS和CsA刺激的腹腔巨噬細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，0.15、0.3、3和15μg/ml的TCA可極顯著提商小鼠腹腔巨噬細(xì)胞增殖活性P<0.01)，且其作用峰期在用藥后的12h；0.3μg/mL的TCA可顯著增強(qiáng)LPS刺激的腹腔巨噬細(xì)胞的增殖反應(yīng)(P<0.05)，0.015、0.3、1.5和15μg/ml的TCA對(duì)CsA抑制的腹腔巨噬細(xì)胞的增

5、殖反應(yīng)有顯著的恢復(fù)作用(p<0.05)，表明TCA具有刺激巨噬細(xì)胞增殖分化的作用。 為了闡明TCA對(duì)B、T淋巴細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)理，本研究采用MTI法檢測(cè)了TCA對(duì)正常和適量LPS、ConA及CsA刺激的體外培養(yǎng)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，隨TCA濃度的逐漸增大，小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖活性逐漸增強(qiáng)，且其作用峰期在加藥后24h，15μg/mL的TCA可顯著提高體外培養(yǎng)的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖活性(P<0.0

6、5)，可極顯著提高LPS刺激活化的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖活性(P<0.01)，可極顯著提高CsA抑制的脾淋巴細(xì)胞的增殖活性(P<0.01)，表明TCA具有增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖活性的功能。采用流式細(xì)胞術(shù)雙抗標(biāo)記法檢測(cè)TCA對(duì)正常和免疫抑制模型小鼠外周血和脾臟中T、B淋巴細(xì)胞及其亞群的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，高、低劑量的TCA均可極顯著地提高小鼠外周血CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+的比值(P<0.01)，低劑量的T

7、CA可極顯著地提高外周血和脾臟CD19+細(xì)胞百分率(P<0.01)，高劑量TCA能夠極顯著恢復(fù)被CsA抑制的小鼠外周血和脾臟CD3+細(xì)胞百分率(P<0.01)，而低劑量的TCA則極顯著地恢復(fù)被CsA抑制的小鼠外周血和脾臟CD19+細(xì)胞百分率(P<0.01)，高、低劑量的TCA都能極顯著地提高被CsA抑制的小鼠外周血CD4+和CD8+細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+的比值(P<0.01)高、低劑量的TCA均能極顯著提高小鼠脾臟CD3+細(xì)胞的

8、百分率(P<0.01)，表明TCA作用于機(jī)體后可引起輔助性T細(xì)胞和誘導(dǎo)性T細(xì)胞的增多，抑制性T細(xì)胞減少，從而增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)，增加B淋巴細(xì)胞的百分率，從而增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫應(yīng)答反應(yīng)。采用ELISA法測(cè)定了健康小鼠和免疫抑制小鼠血清中以及體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中IgG的含量，試驗(yàn)結(jié)果表明，TCA可顯著提高健康小鼠血清中IgG的含量(P<0.05)，顯著提高體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細(xì)胞IgG的分泌量(P<0.05)，顯著恢復(fù)被Cs

9、A抑制的小鼠脾淋巴細(xì)胞的IgG分泌量(P<0.05)，顯著增強(qiáng)被LPS刺激的脾淋巴細(xì)胞IgG分泌量(P<0.05)，表明TCA具有刺激B淋巴細(xì)胞分泌IgG作用；采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)了正常和免疫抑制模型小鼠脾臟IL-2基因的相對(duì)表達(dá)量以及體外培養(yǎng)的正常和適量LPS和ConA刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2基因的相對(duì)表達(dá)量，并采用ELISA方法檢測(cè)了TCA對(duì)正常和適量LPS、ConA及CsA刺激的脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響，試

10、驗(yàn)結(jié)果表明，低劑量TCA可極顯著的提高免疫抑制小鼠脾臟IL-2 mRNA的表達(dá)(P<0.01)，但對(duì)小鼠體外培養(yǎng)的脾淋巴細(xì)胞IL-2基因的表達(dá)卻表現(xiàn)為極顯著降低作用(p<0.01)，不同濃度TCA均有促進(jìn)體外培養(yǎng)的脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2蛋白的作用，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，而且TCA可顯著提高LPS、ConA活化的脾淋巴細(xì)胞IL-2分泌量(P<0.05)，顯著提高被CsA抑制的脾淋巴細(xì)胞IL-2分泌量(P<0.05)。 結(jié)論:TCA對(duì)