卵黃抗體對腸道感染小鼠黏膜免疫的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、卵黃抗體(Egg Yolk immunoglobulin，IgY)是禽類經(jīng)特定抗原免疫后產(chǎn)生并貯存在卵黃中的特異性抗體，廣泛應用于動物感染性疾病的防治。IgY的抗病機理目前尚未完全闡明，在本課題組前期研究基礎上，本論文從體內(nèi)和體外兩方面進一步探討IgY對腸道黏膜免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，是對特異性IgY防治感染性疾病作用機理的重要補充。
　　本研究以滅活的鼠傷寒沙門氏菌免疫蛋雞制備特異性IgY。酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測抗體效價，

2、結(jié)果表明抗體效價達到最高值為1∶12000，抗體高效價（≥6000）可持續(xù)16周。采用水稀釋-兩步鹽析-超濾技術(shù)分離純化IgY，最終獲得抗體純度可達80％。體外抑菌實驗表明，特異性IgY能有效抑制病原菌的生長且該抑制作用呈劑量依賴性，濃度為20 mg/ml時抑菌效果最明顯，抑菌率達50％。免疫熒光和免疫電鏡結(jié)果表明，特異性IgY與病原菌特異性結(jié)合，且粘附于其表面。
　　建立鼠傷寒沙門氏菌昆明小鼠腸道感染模型24 h后，分別給予特異

3、性IgY、非特異性IgY和PBS，期間觀察小鼠的存活率和體重變化。持續(xù)3天后，處死并解剖小鼠，取小腸段，制作病理切片和超薄切片用于組織病理學檢測和小腸上皮細胞超微結(jié)構(gòu)的觀察; ELISA法檢測髓過氧化物酶(MPO)的含量以探討嗜中性粒細胞的活化和增殖狀態(tài)。另外，免疫組織化學法檢測空腸中T淋巴細胞及其亞型細胞數(shù)量的變化。結(jié)果表明，特異性IgY可以有效地降低感染小鼠的死亡率，增加小鼠的體重，且顯著改善腸道的病理狀態(tài)（如黏膜損傷、絨毛腫脹斷裂

4、等），有效緩解腸道炎性細胞浸潤狀態(tài)并保持小腸上皮細胞結(jié)構(gòu)和細胞器的完整。另外，特異性IgY顯著降低攻毒導致的MPO含量的升高（降低64％），顯著緩解嗜中性粒細胞的過度激活和炎性浸潤（P＜0.05）。特異性IgY顯著降低攻毒導致的T淋巴細胞(CD3)、輔助T淋巴細胞(CD4+)、細胞毒性T淋巴細胞(CD8+)和Tγδ淋巴細胞數(shù)量的顯著增加（P＜0.05），分別降低45％、50％、76％和25％，從而緩解腸道應激導致的炎癥反應和腸道黏膜免疫

5、應答的過度激活狀態(tài)。
　　巨噬細胞是鼠傷寒沙門氏菌等胞內(nèi)病原體的主要宿主，本研究考察病原菌與巨噬細胞共同培養(yǎng)時，特異性IgY對巨噬細胞吞噬作用和NO含量的影響。流式細胞儀檢測結(jié)果表明，特異性IgY顯著增強巨噬細胞的吞噬率(P＜0.05)且濃度為5 mg/ml時對巨噬細胞吞噬率增強作用最顯著，吞噬率由11％升高至62％。另外，特異性IgY顯著減少了鼠傷寒沙門氏菌誘導的NO的釋放（P＜0.01），NO的釋放量由111.5μmol/L降