小梅山公豬生殖軸促性腺激素抑制激素及其受體的生后發(fā)育性變化.pdf

1、促性腺激素抑制激素（Gonadotropin-inhibitory hormone，GnIH）是Tsutsui等人于2000年在鵪鶉下丘腦內(nèi)分離得到的一種神經(jīng)肽，因其對(duì)垂體前葉促性腺激素的釋放有抑制作用而得名。GnIH通過(guò)其天然的內(nèi)源性受體GPR147和GPR74發(fā)揮生理功能，對(duì)動(dòng)物生殖、行為、攝食及應(yīng)激等均有調(diào)控作用。到目前為止，關(guān)于GnIH對(duì)家畜生殖功能調(diào)節(jié)方面的研究報(bào)道較少，并且文獻(xiàn)中未見(jiàn)有GnIH對(duì)公豬生殖調(diào)控的研究報(bào)道。因此，

2、本文以小梅山公豬為研究對(duì)象，通過(guò)半定量RT-PCR、免疫組織化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)和放射免疫測(cè)定等方法研究了小梅山公豬生殖軸GnIH及其受體的生后發(fā)育性變化。
　　一、小梅山公豬生殖軸GnIH及其受體mRNAs的生后發(fā)育性變化本實(shí)驗(yàn)采用半定量RT-PCR技術(shù)，對(duì)15頭不同日齡(3d、30d、60 d、90 d、120d，n=3)小梅山公豬下丘腦、垂體和睪丸中GnIH及其受體mRNAs表達(dá)的變化規(guī)律進(jìn)行了研究。結(jié)果如下:
　　1.Gn

3、IH及其受體mRNAs在不同日齡小梅山公豬下丘腦的表達(dá)呈現(xiàn)規(guī)律性波動(dòng)且表達(dá)模式相似。GnIH及其受體mRNAs均在3d表達(dá)豐度最高，到30 d表達(dá)豐度顯著下降，在60 d表達(dá)豐度升高，然后持續(xù)下降，到120 d表達(dá)豐度最低。
　　2.GnIH及其受體mRNAs在不同日齡小梅山公豬垂體的表達(dá)也呈現(xiàn)規(guī)律性波動(dòng)且它們的表達(dá)模式基本相似。GnIH和GPR147 mRNAs的表達(dá)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，其中60 d表達(dá)豐度最高，3d表達(dá)豐度

4、最低。而GPR74 mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)持續(xù)降低的趨勢(shì)，3d表達(dá)豐度最高。
　　3.GnIH及其受體mRNAs在不同日齡小梅山公豬睪丸的表達(dá)呈現(xiàn)規(guī)律性波動(dòng)但各不相同。GnIH和GPR147 mRNAs表達(dá)模式幾乎完全相反，GnIH mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)，在30 d表達(dá)豐度最低;而GPR147 mRNA的表達(dá)是先升高后降低的趨勢(shì)，在30d表達(dá)豐度最高。GPR74 mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢(shì)，其中90 d

5、表達(dá)豐度最高，120 d表達(dá)豐度最低。
　　二、GnIH在小梅山公豬下丘腦、垂體和不同日齡睪丸的分布定位
　　本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法對(duì)GnIH在小梅山公豬下丘腦、垂體及不同日齡睪丸中的分布定位進(jìn)行系統(tǒng)的研究。結(jié)果如下:
　　1.GnIH免疫陽(yáng)性神經(jīng)元在下丘腦主要分布于室旁核，呈紡錘形或多角形，可見(jiàn)明顯的軸突和樹(shù)突。
　　2.GnIH免疫陽(yáng)性細(xì)胞在垂體分布廣泛，無(wú)論是腺垂體還是神經(jīng)垂體均有強(qiáng)烈的免疫陽(yáng)性反應(yīng)。

6、r>　　3.GnIH免疫陽(yáng)性細(xì)胞在不同日齡的睪丸曲細(xì)精管內(nèi)（支持細(xì)胞和生精細(xì)胞）均有分布，而在睪丸間質(zhì)細(xì)胞的分布只出現(xiàn)在60～90 d。
　　三、GnIH對(duì)體外培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌的影響及機(jī)制研究
　　為了探討GnIH對(duì)體外培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌的影響及機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞免疫組織化學(xué)法、半定量RT-PCR法及放射免疫法，研究不同劑量(10-6～10-12 M)GnIH對(duì)體外培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌和相關(guān)基因3β-HS

7、D和P450表達(dá)的影響。結(jié)果如下:
　　放射免疫測(cè)定結(jié)果顯示，10-8M GnIH組能極顯著抑制睪酮的釋放，而10-6、10-10和10-12M GnIH對(duì)睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮均無(wú)顯著抑制作用。PCR檢測(cè)結(jié)果顯示10-8、10-10和10-12M GnIH均可以極顯著抑制3β-HSD mRNA的表達(dá)，10-8和10-10M GnIH均可以極顯著抑制P450mRNA的表達(dá)。
　　以上試驗(yàn)分別在基因、蛋白以及細(xì)胞水平為研究GnI