TGF-β I型受體抑制劑SD-208對(duì)增生性瘢痕抑制作用的體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　增生性瘢痕是臨床常見病和多發(fā)病之一，是創(chuàng)傷后人體自我修復(fù)過程中的異常反應(yīng)，以成纖維細(xì)胞增殖失控和膠原等細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積為特征的人類真皮區(qū)特有的纖維代謝性疾病。而TGF-β1目前已知的最強(qiáng)的促進(jìn)瘢痕增生的生長(zhǎng)因子，它可以直接作用于成纖維細(xì)胞，促進(jìn)其增殖及遷移，并且可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)瘢痕內(nèi)血管新生，除此之外還可抑制基質(zhì)金屬蛋白酶活性，通過以上作用機(jī)制導(dǎo)致瘢痕增生。因此，通過對(duì)抗TGF-

2、β1成為治療增生性瘢痕的新思路。而SD-208是由Scios INC.(Fremont，CA)人工合成的小分子化合物，其合成方便快捷，并高度特異性結(jié)合 TGF-βI型受體，本實(shí)驗(yàn)通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究新型 TGF-βI型受體抑制劑SD-208對(duì)增生性瘢痕的治療效果及其機(jī)制。
　　研究方法:
　　1.體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SD-208對(duì)增生性瘢痕有明顯的抑制作用：
　　取人瘢痕組織行瘢痕成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，取第5代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)干預(yù)，CCK

3、-8試劑盒檢測(cè)SD-208對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的影響，并根據(jù)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)確定SD-208最適濃度，細(xì)胞劃痕及transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè) SD-208對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞遷移的影響，應(yīng)用F-actin特異探針rhodamine-phalloidin檢測(cè) F-actin及應(yīng)力纖維的改變，Western Blot檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組的Ki-67、α-SMA、Smad3、p-Smad3、CTGF、TGF-β1及I型膠原表達(dá)情況。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)

4、證SD-208對(duì)增生性瘢痕有明顯的抑制作用：
　　48只裸鼠做瘢痕模型，每只裸鼠背部接種1×1cm2人瘢痕組織，按照完全隨機(jī)原則將裸鼠分為2組，每組24只，分組情況為：空白對(duì)照組、SD-2081μmol/L組。瘢痕造模成功后每日給藥一次，觀察并記錄各組瘢痕大小變化及裸鼠體重變化，分別于給藥后1、2及3周取材，免疫組化比較兩組的Ki-67、α-SMA、Smad3、p-Smad3、CTGF、TGF-β1及I型膠原表達(dá)情況。
　　

5、研究結(jié)果:
　　1.體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)SD-208對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞的增殖及遷移有明顯的抑制的作用，且SD-208可抑制F-actin及應(yīng)力纖維的表達(dá)及延伸，SD-208組的Ki-67、α-SMA、3、p-Smad3、CTGF、TGF-β1及I型膠原表達(dá)低于空白對(duì)照組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提示SD-208處理組瘢痕面積明顯縮小，而裸鼠體重并無明顯改變，免疫組化提示SD-208實(shí)驗(yàn)組Ki-67、α-SMA、p-Smad3