TGF-β受體抑制劑Compound C對hESC向RPE定向誘導效率的影響.pdf

1、分類號：R77密級：學位類別：科學學位團專業(yè)學位口。學校代碼：10062學號：2011602588學科門類：醫(yī)學又肄鼉斜六號碩士學位論文MASTER’SDISSER，I!ATIoN論文題目：TGFP受體抑制劑CompoundC對hESC向RPE定向誘導效率的影響TITLEEffectsofTGFPreceptorinhibitorCompoundCondirecteddifferentiationofhumanembryonicstem

2、cellsintetinalpigmentepithelialcells一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：眼科學論文作者：楊博宇指導教師：李筱榮教授導師組成員：楊春波研究員天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文’中文摘要研究目的應用人胚胎干細胞(HumanEmbryonicStemCells，hESC)來源的視網膜色素上皮細胞(RetinalPigmentEpithelium，RPE)進行體內細胞移植治療，為視網膜變性疾病

3、患者重見光明帶來了希望。然而hESC向RPE細胞誘導分化效率低、成熟周期長、造價高仍然是目前研究的瓶頸。RPE由神經外胚層發(fā)育而來，促進hESC向神經外胚層分化，可以提高RPE定向誘導效率。文獻報道，轉化生長因子p(TGFp)超家族受體抑制劑CompoundC能提高1lESC向神經方向誘導分化效率，抑制llESC向內胚層、中胚層及滋養(yǎng)外胚層分化。本研究通過在誘導分化培養(yǎng)體系qb力1]ACompoundC，觀察其對RPE誘導效率的影響，并

4、對hESC來源的RPE(11ESCRPE)細胞特性進行體外驗證，為將來hESC來源的RPE移植治療視網膜變性疾病提供基礎。方法將H1hESC分為對照組和CompoundC處理組。對照組在細胞過度融合后，以去除堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的血清替代物(KOSR)培養(yǎng)體系誘導RPE定向分化；CompoundC處理組于誘導分化前6d在培養(yǎng)體系中加入luMCompoundC。在誘導分化第1、3、5周，采用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(I

5、mPCR)檢測兩組人類配對盒基因(PAX6)、小眼球相關轉錄因子(ⅦTF)、細胞視黃醛結合蛋白(C凡地BP)、RPE65mRNA的表達。將hESCRPE細胞分離純化，采用RTPCR、蛋白免疫印跡法(Westernblot)、細胞免疫熒光法和吞噬實驗對純化的hESCRPE細胞進行體外鑒定。結果1、在誘導分化第4周，CompoundC處理組肉眼可見黑色素團塊出現(xiàn)，而對照組無色素團塊出現(xiàn)。誘導分化第5周，CompoundC處理組可見多個色素細