弓形蟲GRA10復(fù)合表位殼聚糖微球疫苗的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、弓形蟲疫苗的研究經(jīng)歷了從蟲體滅活疫苗、減毒活疫苗和基因工程疫苗的巨大飛躍。蟲體滅活疫苗安全性較高，但保護(hù)性較弱，基本沒(méi)有實(shí)用價(jià)值;減毒活疫苗具有較好的免疫力，但其存在很大的安全隱患;基因工程疫苗可安全有效刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，但受限于載體容量無(wú)法提供全面的有效保護(hù)。目前表位疫苗被認(rèn)為是第四代疫苗，是新近發(fā)展起來(lái)的的疫苗研制趨勢(shì)。表位疫苗設(shè)計(jì)靈活、特異性強(qiáng)，直接進(jìn)行人工合成的表位疫苗能夠被具有遺傳多樣性的MHC分子所識(shí)別進(jìn)而提高抗

2、原遞呈效率，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生高效的體液免疫和細(xì)胞反應(yīng)。
　　本課題評(píng)估了弓形蟲GRA10蛋白的優(yōu)勢(shì)表位作為弓形蟲表位疫苗的潛力。GRA10（致密顆粒蛋白10）是一種由364個(gè)氨基酸序列構(gòu)成的新型致密顆粒蛋白，參與并調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞rRNA的合成，對(duì)蟲體在胞內(nèi)的生長(zhǎng)與增殖扮演著重要的角色。我們通過(guò)生物信息學(xué)和免疫學(xué)方法預(yù)測(cè)篩選出了弓形蟲GRA10蛋白中的B細(xì)胞表位、CD4+T細(xì)胞表位和CD8+T細(xì)胞表位，組成弓形蟲GRA10復(fù)合表位并對(duì)其免

3、疫原性進(jìn)行檢測(cè)。殼聚糖由于其生物相容性好、生物可降解易于合成和修飾加工等優(yōu)勢(shì)成為了疫苗載體和佐劑研究中的熱點(diǎn)。因此將復(fù)合表位用殼聚糖微球進(jìn)行裝載，構(gòu)建弓形蟲GRA10復(fù)合表位殼聚糖微球疫苗。
　　通過(guò)體外誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞，觀察微球疫苗刺激樹突狀細(xì)胞抗原提成能力的改變，從而對(duì)該疫苗的免疫機(jī)制進(jìn)行初步探討。通過(guò)免疫接種小鼠，檢測(cè)小鼠免疫后體液免疫和細(xì)胞免疫各項(xiàng)指標(biāo)的水平，評(píng)估該疫苗對(duì)弓形蟲慢性感染的保護(hù)性。結(jié)果顯示，弓形蟲GRA10復(fù)合

4、表位具有更好的免疫原性，可發(fā)揮B細(xì)胞表位、CD4+T細(xì)胞表位和CD8+T細(xì)胞表位的聯(lián)合作用。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，弓形蟲GRA10復(fù)合表位殼聚糖微球疫苗可以有效誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞高表達(dá)表面協(xié)同刺激分子CD86和分泌更多的細(xì)胞因子，進(jìn)而有效刺激淋巴細(xì)胞參與免疫應(yīng)答。在小鼠免疫接種實(shí)驗(yàn)表明，弓形蟲GRA10復(fù)合表位殼聚糖微球疫苗不僅可以誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生高水平的抗體IgG及IgG2a，而且可以有效的提高脾細(xì)胞的增殖水平，誘導(dǎo)產(chǎn)生促進(jìn)CD8+T細(xì)胞亞群增