弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗免疫效果研究及弓形蟲ROP2-P30基因工程復合抗原的構建.pdf

1、該課題基于該室與復旦大學生化與分子生物學實驗室共同研制成功弓形蟲P30乳酸球菌(Lactococcus lactis/P30)口服疫苗基礎上的延伸工作,在研究的第一部分對弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗的實際免疫效果進行考察,第二部分利用基因工程手段構建弓形蟲ROP2-P30復合抗原.目的:1.課題研究的第一部分觀察弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗(L.lactis /P30)的免疫效果.首先確定L.lactis /P30免疫小鼠產生免疫保護性

2、的適宜劑量,在此劑量下考查L.lactis /P30口服免疫在小鼠體內誘導的體液免疫反應,以及產生的保護性效果,進一步伐L.lactis /P30口服免疫誘導小鼠產生的細胞免疫效果和抗體IgG的動態(tài)發(fā)生過程,最后觀察L.lactis /P30口服免疫鼠血清中,細胞因子IFN-γ、IL-2及NO分子的變化情況.2.該研究課題的第二部分致力于弓形蟲病復合型疫苗的研制,以進一步提高弓形蟲P30乳酸球菌口服疫苗的免疫保護性效果.從弓形蟲RH株總

3、DNA中分別克隆棒狀體蛋白ROP2和表面膜蛋白P30基因片段,聯(lián)合克隆至表達載體pET28b中,構建重組質粒pET28b-ROP2-P30,導入大腸桿菌中表達,分析表達的重組蛋白ROP2-P30的免疫活性,為弓形蟲病復合型疫苗的研制做準備.結論:1.(1)確定了3×10<'9> CFU的免疫劑量,用此劑量,小鼠的保護性效果則比其他劑量組有所提高;(2)L.lactis/ P30口服疫苗一定程度上刺激小鼠產生了相應的抗體,誘導產生了偏向T

4、h1型的免疫反應,且在小鼠體內發(fā)揮了部分保護作用;(3)L.lactis/ P30口服疫苗有效地激發(fā)了小鼠細胞免疫反應,特異性抗體IgG在免疫結束一個月后生成明顯;(4)L.lactis/ P30口服疫苗有效地刺激了小鼠細胞因子IFN-γ和IL-2的產生,NO分子的釋放.2.(1)克隆到的弓形蟲棒狀體蛋白ROP2在大腸桿菌中得到了表達,分子量為45kDa;(2)弓形蟲棒狀體蛋白ROP2和主要表面膜蛋白P30融合基因克隆成功,表達出分子量