弓形蟲代謝分泌抗原和表面蛋白1抗原表位研究.pdf

1、弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，具有廣泛的宿主群并在世界范圍內(nèi)流行，引起人獸共患寄生蟲病。在畜牧業(yè)方面，懷孕動(dòng)物尤其是牛和羊會(huì)出現(xiàn)流產(chǎn)或死胎，豬會(huì)大批死亡，給畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此建立特異、快速、靈敏的弓形蟲病診斷方法和研制有效預(yù)防弓形蟲病的疫苗成為迫切需要解決的問題。
　　 由于弓形蟲抗原成分較復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)表明，單一抗原疫苗免疫效果或診斷試劑檢測(cè)效果均不理想，研制多表位疫苗和診斷試劑必然是一個(gè)新的發(fā)展策略。本研究在弓形蟲代

2、謝分泌抗原和多表位抗原免疫保護(hù)研究基礎(chǔ)之上，對(duì)主要抗原的線性B細(xì)胞表位進(jìn)行了鑒定，為制備弓形蟲B細(xì)胞表位抗原奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1)代謝分泌抗原(ESA)較其它可溶性抗原和包囊抗原能更好的誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)，是研制抗弓形蟲疫苗的一種非常好的候選抗原。本研究評(píng)估了ESA與弗氏佐劑乳化疫苗對(duì)豬的免疫保護(hù)效果，通過對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫水平、血液中荷蟲量、豬臨床癥狀、病理剖解及組織變化等一些重要參數(shù)的評(píng)估，表明ESA加弗氏

3、佐劑乳化疫苗誘導(dǎo)豬產(chǎn)生的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)能抵抗急性弓形蟲感染。
　　 2)本研究中，我們首次探討一個(gè)線性B細(xì)胞表位(來自表面蛋白1(SAG1)保守區(qū)域)和兩個(gè)T細(xì)胞表位(來自致密顆粒蛋白1(GRA1)和致密顆粒蛋白4(GRA4))通過GG間隔序列串聯(lián)，然后連接到賴氨酸以多表位肽(MAP)形式免疫小鼠所引發(fā)的免疫反應(yīng)。結(jié)果，MAP結(jié)構(gòu)+弗氏佐劑不僅誘導(dǎo)BALB/c和昆明小鼠產(chǎn)生高水平特異性抗體，而且還誘導(dǎo)小鼠發(fā)生強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反

4、應(yīng)，用致死劑量的弓形蟲GJS強(qiáng)毒株(1×103)攻擊免疫鼠，小鼠的存活時(shí)間比對(duì)照組的明顯延長(zhǎng)。數(shù)據(jù)證明多表位肽疫苗可作為一種弓形蟲候選疫苗值得進(jìn)一步進(jìn)行研究。
　　 3)本研究利用B細(xì)胞表位分析軟件預(yù)測(cè)和肽掃描技術(shù)兩種方法對(duì)弓形蟲兩個(gè)主要抗原SAG1和GRA1的優(yōu)勢(shì)線性B細(xì)胞表位進(jìn)行篩選。對(duì)于SAG1鑒定到2個(gè)新的高度保守的線性B細(xì)胞抗原表位：91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKAVTLSSL120和151PVTT

5、QTFVVGCIKGDDAQSCMVTVTVQARA180；對(duì)于GILA1鑒定了3個(gè)新的高度保守的線性B細(xì)胞抗原表位：134YSEVGNVNMEEVIDTMKSMQ153、164NKGETVEEAIEDVAQAEGLN183和214LEKDKQQLKDDIGFLTGERE233)，所鑒定到的表位與弓形蟲感染豬血清反應(yīng)原性良好，有研發(fā)診斷試劑和表位疫苗的價(jià)值。
　　 4)本研究以91PTLAYSPNRQICPAGTTSSCTSKA