秋水仙堿對(duì)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、第一部分人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)和秋水仙堿對(duì)其細(xì)胞增殖、周期的影響
　　 目的:培養(yǎng)原代人體瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(Keloid Fibroblast,KFB);并觀察秋水仙堿作用細(xì)胞后,其增殖及細(xì)胞周期的變化。
　　 方法:采用常規(guī)的組織塊貼壁培養(yǎng)法進(jìn)行原代瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞培養(yǎng);不同濃度秋水仙堿(1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml)處理細(xì)胞后,采用四甲基偶氮唑鹽(M

2、TT)法觀察秋水仙堿作用后細(xì)胞的增殖情況;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)秋水仙堿對(duì)細(xì)胞周期的影響。
　　 結(jié)果:原代瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞培養(yǎng)成功;秋水仙堿能抑制細(xì)胞的生長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞分裂前期(G2期)產(chǎn)生影響,并呈時(shí)間依賴性和藥物濃度依賴性。
　　 結(jié)論:組織塊貼壁培養(yǎng)法可以得到瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞;秋水仙堿在一定濃度范圍內(nèi)可調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)及細(xì)胞周期,可以抑制瘢痕疙瘩的形成。
　　 第二部分秋水仙堿對(duì)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白

3、酶的影響
　　 目的:研究秋水仙堿對(duì)體外培養(yǎng)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶-1、基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的影響。
　　 方法:體外培養(yǎng)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞,不同濃度秋水仙堿(2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml)處理細(xì)胞。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)KFB的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)mRNA的表達(dá)情況;采用Western Blot方法檢測(cè)KFB的基質(zhì)金屬蛋白酶(M

4、MP)蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:秋水仙堿組的MMP-1和MMP-2的mRNA和蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組。MMP-1的mRNA表達(dá)水平分別為0.282±0.015、0.369±0.022、0.541±0.027、0.672±0.020,較對(duì)照組(0.174±0.016)上調(diào)(P＜0.05);MMP-2 mRNA表達(dá)水平分別為0.371±0.026、0.548±0.031、0.653±0.019、0.796±0.024,較對(duì)照組(0

5、.201±0.033)上調(diào)(P＜0.05),并呈濃度依賴性。秋水仙堿組MMP-1蛋白表達(dá)水平分別為0.205±0.013、0.293±0.027、0.349±0.034、0.512±0.035,較對(duì)照組(0.127±0.031)上調(diào)(P＜0.05);MMP-2蛋白表達(dá)水平分別為0.395±0.036、0.526±0025、0.673±0.014、0.792±0.037,較對(duì)照組(0.278±0.023)上調(diào)(P＜0.05),并呈濃度依賴