酪蛋白激酶Ⅱ與AP-2基因家族相互作用研究.pdf

1、1:AP-2基因家族是一類非常重要的轉(zhuǎn)錄激活因子,現(xiàn)已克隆成功的成員有AP-2α,AP-2β,AP-2γ和AP-2δ.我們將人的AP-2β基因插入酵母雙雜交系統(tǒng)中的PDB-Leu載體中,將AP-2β融合到轉(zhuǎn)錄激活因子(GAL4)氨基端的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-bind domain,B D)上,得到的克隆PDB-Leu/AP-2β.所得克隆經(jīng)測序,以確定其閱讀框碼的正確性.然后將正確的克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到酵母菌Mav203中,通過酵母雙雜交

2、方法從人乳腺癌細(xì)胞HeLa cDNA文庫篩選與AP-2β基因家族相互作用的基因.用此誘餌蛋白篩選到陽性克隆,所得陽性克隆經(jīng)藍斑試驗進一步驗證,所得陽性克隆只有2個能使X-gal變成藍色.將所篩選的基因抽提出來,經(jīng)過測序,所得測序結(jié)果分析,得知兩個基因分別為CK2,GAS41.2:利用酵母雙雜交技術(shù)已篩選到一個與轉(zhuǎn)錄激活因子AP-2β相互作用的酪蛋白激酶CK2.CK2是真核細(xì)胞保守的絲/蘇氨酸激酶,是細(xì)胞生存的必要的,在細(xì)胞生長、增殖、分