與轉錄因子AP-2α相互作用的蛋白質的鑒定.pdf

1、AP-2α作為一個重要的轉錄因子AP-2家族的成員,具有組織表達特異性和DNA結合特異性.在胚胎發(fā)育,細胞分化,腫瘤發(fā)生等方面有重要作用,轉錄調控多個下游靶基因.為了闡明AP-2α確切的轉錄調控方式,找出與其直接相互作用的蛋白質因子,我們以AP-2α為餌蛋白通過酵母雙雜交對HeLa細胞的cDNA文庫進行了篩選.篩選得到兩個陽性克隆,測序后經(jīng)Blast軟件比較基因庫確定這兩個陽性克隆中所含cDNA分別為已知基因TESTIN和ACTN1的片

2、段.目前對TESTIN基因的功能研究還不多,其蛋白C端含有3個LIM結構域,可能是一個抑癌基因.ACTN1編碼輔肌動蛋白1,則是公認的與細胞骨架和細胞通訊有關的基因.將這兩段篩選所得cDNA片段和AP-2αcDNA全長及AP-2αcDNA的分段形式用GST基因融合系統(tǒng)進行表達,并用AP-2 α的單克隆抗體檢測了GST-AP-2α融合蛋白表達的情況.雖然所提取的融合蛋白GST-AP-2α出現(xiàn)較多降解,但是電泳遷移率變動分析顯示其仍然具有良

3、好的DNA結合活性.所獲得的GST-TESTIN,GST-ACTN融合蛋白用于多克隆抗體的制備.用制備所得的抗GST-TESTIN血清和抗GST-ACTN血清及AP-2α的單克隆抗體分別檢測了這三種蛋白質在HeLa細胞中的表達.結果顯示三種蛋白在HeLa細胞中均有表達,且AP-2α主要表達于細胞核提取物中;TESTIN大部分表達于細胞質提取物中,細胞核提取物中也有少量;ACTN1既表達于細胞質又表達于細胞核提取物中.AP-2α與這兩種蛋