向日葵黑莖病和莖潰瘍病菌生物學(xué)特征、分子檢測(cè)及檢疫處理.pdf

1、向日葵是我國(guó)重要的油料作物之一，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。近幾年，我國(guó)不斷的從國(guó)外引進(jìn)向日葵種子，種子上攜帶的多種危險(xiǎn)性病害傳入我國(guó)的風(fēng)險(xiǎn)加大。其中向日葵黑莖病菌Leptosphaeria lindguistii和莖潰瘍病菌Diaporthe helianthi是兩種重要的檢疫性真菌病害，向日葵黑莖病菌在我國(guó)局部地區(qū)有發(fā)生，莖潰瘍病菌未在我國(guó)出現(xiàn)，為防忠于未然，急需建立一種快速的分子檢測(cè)技術(shù)。
　　 本文描述了向日葵黑莖病菌在大田危害

2、癥狀和發(fā)生時(shí)各個(gè)時(shí)期癥狀表現(xiàn)，以及觀察兩種病原菌和向日葵上寄生的其他病原菌的形態(tài)特征，其中包括菌落、分生孢子器、分生孢子。調(diào)研人員在寧夏和新疆向日葵病害田間采集的具有明顯病害癥狀的病殘?bào)w，本文針對(duì)兩種病原菌致病癥狀特征對(duì)采集回來(lái)的病殘?bào)w進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室分離檢疫鑒定。通過(guò)形態(tài)學(xué)以及ITS區(qū)域的PCR擴(kuò)增克隆測(cè)序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，新疆向日葵莖稈編號(hào)TXMGX、BXC1、XYHJ為向日葵黑莖病菌Leptosphaeria lindguistii，除此之外

3、，在新疆地區(qū)還發(fā)現(xiàn)梭孢殼屬Thielavia hyalocarpa、光黑殼屬Preussia sp、向日葵鏈格孢 Alternaria helianth、大麗輪枝菌Verticillium dahliae、大刀鐮孢球黑孢 Nigrospora sphaerica，在寧夏地區(qū)發(fā)現(xiàn)向日葵鏈格孢 Alternaria helianthi與細(xì)鏈格孢 Alternaria alternata。
　　 為了建立一種快速檢測(cè)向日葵黑莖病菌和莖

4、潰瘍病菌的分子生物學(xué)方法，本研究通過(guò)收集不同地區(qū)的向日葵黑莖病菌和莖潰瘍病菌菌株、向日葵上寄生的其他病害以及購(gòu)買的標(biāo)準(zhǔn)菌株作為供試材料;以油菜黑莖病菌Leptosphaeria biglobosa的肌動(dòng)蛋白Actin基因設(shè)計(jì)的一對(duì)引物actF/actR;利用actF/actR對(duì)向日葵黑莖病菌和莖潰瘍病菌以及向日葵上寄生的其他11種病害菌絲DNA進(jìn)行Actin-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測(cè)序經(jīng)軟件比對(duì)分析后，依據(jù)Actin基因序列差異位點(diǎn)設(shè)

5、計(jì)2種病原菌的特異引物L(fēng)LF/LLR和DHF/DHR。然后以通用引物ITS1/ITS4和自行設(shè)計(jì)2對(duì)特異引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化并建立三重PCR檢測(cè)方法，結(jié)果表明ITS1/ITS4擴(kuò)增片段為580bp，特異引物L(fēng)LF/LLR擴(kuò)增片段為255bp，特異引物DHF/DHR擴(kuò)增片段為394bp，據(jù)此可準(zhǔn)確鑒定出2種檢疫性真菌病害向日葵黑莖病菌和向日葵莖潰瘍病菌。
　　 對(duì)危險(xiǎn)性真菌病害向日葵黑莖病菌和莖潰瘍病菌檢疫處理研究，本文采用2種病菌殺滅技

6、術(shù):溴甲烷和熱水在不同條件下熏蒸和熱處理2種病原菌的菌絲，并觀察在同等處理?xiàng)l件下對(duì)向日葵種子萌發(fā)的影響。采用32 g/m3溴甲烷熏蒸處理24h可100％殺滅向日葵黑莖病菌和向日葵莖潰瘍病菌，且對(duì)向日葵種子的萌發(fā)無(wú)影響。52℃熱水處理向日葵黑莖病菌和向日葵莖潰瘍病菌超過(guò)3min后兩種菌無(wú)活性，不能繼續(xù)生長(zhǎng)，而熱水處理向日葵種子15min，對(duì)向日葵種子的萌發(fā)無(wú)影響。因此，一定條件下溴甲烷熏蒸處理和熱水處理可以對(duì)向日葵種子中攜帶向日葵黑莖病菌