亞硫酸鈉通過脂肪細(xì)胞對(duì)共培養(yǎng)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響.pdf

1、目的：
　　探討亞硫酸鈉是否通過脂肪細(xì)胞來影響肝臟細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（TG）與膽固醇含量，為研究亞硫酸鈉的肝毒性作用機(jī)制提供參考。
　　方法：
　　將3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，成為成熟脂肪細(xì)胞，并用油紅O染色驗(yàn)證；用不同濃度（0.02、0.1、0.5、2.5 mmol/L）Na2SO3和1 mmol/L油酸（OA）染毒脂肪細(xì)胞12 h，收集脂肪細(xì)胞上清，再分別用上述收集的各組脂肪細(xì)胞上清染毒HepG2細(xì)胞24 h

2、，即共培養(yǎng)組。另外再用同上述相同濃度（0.02、0.1、0.5、2.5 mmol/L）Na2SO3和1 mmol/L油酸單獨(dú)培養(yǎng)HepG2細(xì)胞24 h，即單獨(dú)培養(yǎng)組；采用游離脂肪酸（FFA）檢測(cè)試劑盒測(cè)定脂肪細(xì)胞上清中FFA含量；采用ELISA法測(cè)定脂肪細(xì)胞上清中脂聯(lián)素的含量；采用GPO-POD酶法測(cè)定脂肪細(xì)胞培養(yǎng)上清中的TG含量；采用有機(jī)抽提法提取肝細(xì)胞內(nèi)TG、總膽固醇（TC）和游離膽固醇（FC），再用POD酶法測(cè)定其含量；采用wes

3、tern blot法檢測(cè)Na2SO3對(duì)單獨(dú)培養(yǎng)組和共培養(yǎng)組肝細(xì)胞內(nèi)TG代謝相關(guān)蛋白腺苷酸活化蛋白激酶（AMPKα）、P-AMPKα、乙酰輔酶A羧化酶(ACC）、P-ACC、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FASN）、肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶1（CPT-1）和膽固醇代謝相關(guān)蛋白3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMGCR）、低密度脂蛋白受體（LDLR）、?；o酶A:膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（ACAT）的相對(duì)表達(dá)水平。<

4、br>　　結(jié)果：
　　1、與陰性對(duì)照相比Na2SO3各處理組脂肪細(xì)胞培養(yǎng)上清中FFA和脂聯(lián)素的含量都明顯減少（P＜0.05），TG含量無明顯變化（P＞0.05）。
　　2、Na2SO3處理后，單獨(dú)培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)TG含量無明顯變化（P＞0.05）。但是2.5 mmol/L亞硫酸鈉可引起共培養(yǎng)HepG2細(xì)胞內(nèi)TG的增加（P＜0.05）。
　　3、Western blot結(jié)果顯示，Na2SO3處理后，單獨(dú)培養(yǎng)肝細(xì)胞內(nèi)SREBP-

5、1c、AMPKα、P-ACC、CPT-1無明顯變化（P＞0.05）；2.5 mmol/L Na2SO3組和OA組FASN蛋白表達(dá)增高（P＜0.05）；ACC除0.5 mmol/L Na2SO3變化不明顯外，其余各組都升高（P＜0.05）。共培養(yǎng)組，P-ACC、SREBP-1c、FASN、CPT-1無明顯變化（P＞0.05）；未檢測(cè)到P-AMPKα；AMPKα和ACC的蛋白表達(dá)均增高（P＜0.05）。
　　4、Na2SO3處理后，單

6、獨(dú)培養(yǎng)肝細(xì)胞內(nèi)TC和FC含量的變化不明顯（P＞0.05）；0.5 mmol/L Na2SO3、2.5 mmol/L Na2SO3和1 mmol/L OA可引起共培養(yǎng)組肝臟細(xì)胞內(nèi)TC降低（P＜0.05）；而2.5 mmol/L Na2SO3和1 mmol/L OA可引起共培養(yǎng)組肝臟細(xì)胞內(nèi)FC含量增加（P＜0.05）。
　　5、Western blot結(jié)果顯示，Na2SO3處理后，單獨(dú)培養(yǎng)組肝細(xì)胞內(nèi)HMGCR表達(dá)無明顯變化（P＞0.0

7、5）；ACAT蛋白表達(dá)水平均增高（P＜0.05）；2.5 mmol/L Na2SO3使LDLR表達(dá)升高（P＜0.05）。共培養(yǎng)組，HMGCR和LDLR蛋白表達(dá)無明顯變化（P＞0.05）；ACAT蛋白表達(dá)增高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　暴露在較低劑量的Na2SO3環(huán)境下時(shí)，不會(huì)引起肝臟TG和膽固醇的增加。但暴露于2.5 mmol/L較高濃度的Na2SO3環(huán)境下，機(jī)體不能代謝解毒Na2SO3，則可能通過脂肪細(xì)胞的作用使肝