蛋白CMS SH3結構域溶液結構的測定及其與c-Cbl C-末端多肽相互作用的研究.pdf

1、本論文工作的重點是與人類疾病相關的蛋白質的結構域的克隆表達及結構、功能的研究。我們克隆,表達和純化了人源蛋白質CMS N端的第二個SH3結構域(CMSSH3B),并用NMR的方法測定了這個結構域的溶液結構。同時通過Biacore和NMR化學干擾實驗研究CMSSH3B與來自c-Cb1 C-末端多肽(Cb1-p)的結合作用。我們第一次給出了CMSSH3B水溶性結構,并通過NMR化學位移干擾和Biacore試驗第一次確定c-Cb1 C末端肽段

2、701-712參與了c-Cb1與CMS的相互作用。我們給出了CMSSH3B與Cb1-p相互作用的結合模型。所有這些結果都有利于CMS功能進一步的研究
　　第一章是蛋白質CMS的研究背景和功能簡介。CMS(Cas ligand witn multiple Src homology 3 domians)是一種信號轉導途徑中的銜接蛋白質(adaptor protein)。它最初是在酵母雙雜交實驗中作為p130cas的結合蛋白質被發(fā)現(xiàn)的。

3、CMS自身有很多可以與其他蛋白質相互作用的結合位點,通常可以與其他蛋白質形成更加復雜的蛋白質復合物,這就是使得CMS在信號轉導途徑中通常是以腳手架蛋白質(scaffolding protein)的角色出現(xiàn),從而調控細胞的生長,分化,繁殖,遷移以及凋亡。這些結構特點是CMS行使生化功能的基礎。
　　在第二章中,我們使用NMR波譜技術測定了CMSH3B的溶液結構。CMS在N-末端有三個SH3結構域,這些結構域是CMS與其它蛋白質作用的

4、結合區(qū)域。在這三個SH3結構域中,第二個與第三個SH3結構域序列同源性為48.2％,而第一個和第二個SH3結構域的序列同源性為42%。因此,第二個和第三個SH3結構在功能上可能更為相似。已有文獻報導CMS與c-Cb1的相互作用是通過其第二個SH3結構域結合到c-Cb1的C-末端上,我們研究的重點放在CMS第二個SH3結構域上。通過分子克隆技術,編碼CMSSH3B的基因在大腸桿菌中得到了克隆和表達。然后利用Ni離子親和層析法,這個重組蛋白