惡性血液病合并侵襲性真菌感染的分子生物學(xué)鑒定及藥物敏感性研究.pdf

1、目的：
　　 1.鑒于惡性血液病真菌感染日趨嚴(yán)重，探討惡性血液病合并真菌感染的分子生物學(xué)診斷方法，以達(dá)到對真菌感染的早期診斷的目的。
　　 2.隨著抗真菌藥物的廣泛使用，耐藥菌株逐漸增多，對菌株進(jìn)行藥敏實驗，檢測對常用抗真菌藥物的敏感性。
　　 方法：
　　 1.采取患者靜脈血進(jìn)行常規(guī)血液培養(yǎng)；對血培養(yǎng)陽性樣本進(jìn)行菌株鑒定，并鑒定到種；使用改良的真菌DNA 提取法進(jìn)行基因提取；使用通用引物ITS1和ITS

2、4 進(jìn)行基因擴(kuò)增；使用MspI 酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切鑒定；對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，所得序列與Genbank核酸庫已登錄的序列進(jìn)行BLAST 比對。
　　 2.使用ATB FUNGUS3 試條進(jìn)行藥敏試驗?？拐婢幬铮簝尚悦顾谺（AMB）、5-氟胞嘧啶（5-FC）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC）。
　　 結(jié)果：
　　 1.在500人份可疑真菌感染的全血標(biāo)本中，共檢出陽性樣本115 份。酶切鑒定

3、結(jié)果為白色念珠菌48株(41.7％)，熱帶念珠菌27株(23.5％)，光滑念珠菌16株(13.9％)、克柔念珠菌11株(9.6％)、近平滑念珠菌8株(7.0％)、其他5株(4.3％)。與血培養(yǎng)分離鑒定結(jié)果基本一致。
　　 2.擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)序列比對后發(fā)現(xiàn)，與酶切結(jié)果完全一致。PCR-RFLP 檢測和鑒定結(jié)果與血培養(yǎng)法有較好的一致性，但是統(tǒng)計學(xué)上無意義（p>0.05）。
　　 3.真菌主要為白色念珠菌，占41.7％。體外抗真菌

4、藥敏試驗對兩性霉素B（AMB）、5-氟胞嘧啶（5-FC）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC）平均敏感率分別100％、97.22％、68.50％、77.78％和81.48％。其中對兩性霉素B、5-氟胞嘧啶敏感性最好，耐藥率分別為0％和2.78％。對氟康唑的敏感性最差，耐藥率為31.50％。
　　 結(jié)論：
　　 1.使用PCR-RFLP 進(jìn)行菌株鑒定的技術(shù)敏感性、特異性高，與常規(guī)血培養(yǎng)方法比較耗時短，可