應用尿液外泌體蛋白質(zhì)組學技術(shù)初步探索膜性腎病的生物學標志物.pdf

1、目的:檢測膜性腎病患者與健康人尿液外泌體差異蛋白，初步探索尿液外泌體蛋白質(zhì)是否存在膜性腎病的生物學標志物。
　　方法:選取2017年10月-2018年1月就診于大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，經(jīng)腎活檢確診為特發(fā)性膜性腎病患者6名，男女各3例，24h尿蛋白波動于515-12896mg，eGFR波動于107.7-181.7(mL/min/1.73m2)。正常對照組9例。入選標準:實驗組:結(jié)合臨床及腎組織病理檢查，確診為特發(fā)性膜性腎病，

2、并除外繼發(fā)性因素。正常對照組:選取年齡、性別匹配的健康志愿者。排除標準:年齡＜18歲或＞70歲、乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎、狼瘡性腎炎、藥物或毒物相關(guān)性等繼發(fā)性腎病、泌尿系統(tǒng)先天發(fā)育異常、懷孕或哺乳患者、感染患者、腫瘤、器官移植。留取24h尿標本，低溫高速離心機離心去除細胞碎片及雜質(zhì)后，放于-80℃冰箱冷藏，利用BCA試劑盒從人體的尿液中分離出外泌體，并通過質(zhì)譜分析法提取出能夠穩(wěn)定表達的尿外泌體。利用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計學分析。連續(xù)

3、型變量均進行正態(tài)性檢驗，服從正態(tài)分布的連續(xù)性變量用（均數(shù)±標準差）表示，不服從正態(tài)分布的連續(xù)性變量采用非參數(shù)秩和檢驗，組間相關(guān)性比較采用回歸分析，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:膜性腎病患者尿外泌體中纖維蛋白溶酶原(plasminogen)、免疫球蛋白γ2重鏈（Immunoglobulin heavy constant gamma2）、抗凝血酶Ⅲ(Antithrombin-Ⅲ)、免疫球蛋白γ1重鏈(Immunoglobu

4、lin gamma-1heavy chain)的表達量分別是正常對照組的8.9倍(P=0.013)、3.9倍(P=0.026)、3.1倍(P=0.012)、2.0倍(P=0.026)。采用回歸分析尿外體水平與腎功能參數(shù)的相關(guān)性進行評價。我們發(fā)現(xiàn)，外泌體纖維蛋白溶酶原的水平與24h尿蛋白、甘油三酯、白蛋白和同型半胱氨酸有顯著的相關(guān)性。ROC分析表明纖維蛋白溶酶原、免疫球蛋白γ2重鏈、抗凝血酶Ⅲ、免疫球蛋白γ1重鏈對IMN具有潛在的診斷價值

5、。IMN尿外泌體中谷氨酰氨基肽酶(glutamyl aminopeptidase)、免疫球蛋白J鏈（Immunoglobulin J chain）、γ-谷氨酰胺水解酶（Gamma-glutamyl hydrolase）、熱休克蛋白β1（Heat shock protein beta-1）、尿調(diào)節(jié)素(Uromodulin)、角蛋白(Keratin)的表達量分別比正常對照組降低4.51倍(P=0.039)、3.37倍(P=0.026)、2.

6、83倍(P=0.050)、2.42倍(P=0.026)、2.03倍(P=0.036)、1.76倍(P=0.050)。ROC分析表明谷氨酰氨基肽酶、免疫球蛋白J鏈、γ-谷氨酰胺水解酶、熱休克蛋白β1、尿調(diào)節(jié)素、角蛋白對IMN具有潛在的診斷價值。
　　結(jié)論:IMN患者尿外泌體纖維蛋白溶酶原、免疫球蛋白γ2重鏈、抗凝血酶Ⅲ、免疫球蛋白γ1重鏈表達明顯高于正常對照組，尿外泌體谷氨酰氨基肽酶、免疫球蛋白J鏈、γ-谷氨酰胺水解酶、熱休克蛋白β