2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:低氧損傷誘導(dǎo) PC12細(xì)胞自噬激活
  目的:
  初步探討在低氧損傷下神經(jīng)元樣腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12細(xì)胞)自噬的發(fā)生情況。
  方法:
  通過低氧培養(yǎng)箱建立細(xì)胞低氧損傷模型;構(gòu)建GFP-LC3質(zhì)粒;分別在給予或者不給予溶酶體質(zhì)子泵抑制劑Baf A1的情況下,通過western blot法檢測自噬相關(guān)蛋白的表達(dá);RT-PCR法檢測自噬小體表面微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)mRNA水平的表達(dá);激

2、光共聚焦顯微鏡檢測LC3的表達(dá)及分布變化。統(tǒng)計學(xué)分析低氧損傷與細(xì)胞自噬之間的關(guān)系。
  結(jié)果:
  western blot結(jié)果顯示,低氧損傷下,PC12細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)明顯隨著低氧時間的延長而增加,24小時后出現(xiàn)下降;RT-PCR結(jié)果顯示,低氧損傷下,LC3的mRNA水平明顯上調(diào);激光共聚焦顯微鏡檢查結(jié)果顯示,低氧損傷下,細(xì)胞內(nèi)含有GFP-LC3顆粒的自噬小體明顯增多。自噬的發(fā)生與低氧損傷之間存在相關(guān)性。
  

3、結(jié)論:
  低氧損傷能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞發(fā)生自噬,兩者之間存在相關(guān)性。
  第二部分:自噬激活在低氧損傷中的作用及其機制
  目的:
  以對低氧敏感的神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞為低氧損傷模型,探討低氧誘導(dǎo)的自噬激活在低氧損傷中發(fā)揮的作用及其機制。
  方法:
  通過低氧培養(yǎng)箱建立細(xì)胞低氧損傷模型;體外給予細(xì)胞自噬抑制劑3-MA,通過MTT方法檢測細(xì)胞活力;LDH法檢測細(xì)胞毒性;PI染色檢測細(xì)胞死亡情況;c

4、aspase-3活性檢測試劑盒檢測caspase-3的活性;western blot方法檢測caspase-3的活性形式cleaved caspase-3的表達(dá)變化。統(tǒng)計學(xué)分析低氧損傷下抑制細(xì)胞自噬后細(xì)胞活力及凋亡變化及其相關(guān)性。
  結(jié)果:
  MTT結(jié)果顯示給予自噬抑制劑3-MA后,低氧損傷的細(xì)胞活力進一步降低;LDH結(jié)果顯示給予自噬抑制劑3-MA后,低氧損傷的細(xì)胞細(xì)胞毒性進一步增強;PI染色結(jié)果顯示給予自噬抑制劑3-M

5、A后,低氧損傷的細(xì)胞死亡進一步增多;并且caspase-3的活性及活性形式表達(dá)檢測結(jié)果顯示,給予自噬抑制劑3-MA后,caspase-3的活性增強,其活性表達(dá)形式cleaved caspase-3的表達(dá)增多。
  結(jié)論:
  低氧損傷下,自噬發(fā)揮細(xì)胞保護作用,這種保護作用可能與抑制凋亡有關(guān)。
  第三部分:凋亡抑制自噬活動
  目的:
  低氧損傷24小時后自噬活動逐漸減弱,而凋亡活動逐漸增強。凋亡對自噬是

6、否影響及其可能的機制尚不完全明了。本研究目的是初步探討低氧損傷的后期凋亡的增強是否導(dǎo)致自噬的減弱,兩者之間是否存在相關(guān)性。
  方法:
  通過低氧培養(yǎng)箱建立細(xì)胞低氧損傷模型;構(gòu)建Flag-Bax WT,F(xiàn)lag-Bax S184V和Flag-BaxΔC過表達(dá)質(zhì)粒;將EGFP-LC3分別與Flag-Bax WT(或Flag-Bax S184V,F(xiàn)lag-BaxΔC)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,western blot檢測自噬相關(guān)蛋白的變化;

7、給予細(xì)胞凋亡抑制劑z-VAD-FMK,蛋白酶體抑制劑MG132和溶酶體抑制劑氯喹,western blot檢測共轉(zhuǎn)細(xì)胞內(nèi)LC3表達(dá)的變化;細(xì)胞低氧時給予細(xì)胞凋亡抑制劑z-VAD-FMK,western blot檢測LC3表達(dá)的變化。
  結(jié)果:
  western blot結(jié)果顯示,當(dāng) EGFP-LC3與野生型 Flag-Bax WT或激活性Flag-Bax S184V質(zhì)粒共轉(zhuǎn)時其表達(dá)明顯減少,而與突變型Flag-BaxΔC

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