低氧微環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞自噬與凋亡之間作用的研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文低氧微環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞自噬與凋亡之間作用的研究姓名：張瑞光申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：伍鋼201105華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文5第二部分第二部分低氧微環(huán)境誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞自噬的調(diào)控通路低氧微環(huán)境誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞自噬的調(diào)控通路目的：目的：調(diào)控自噬的分子機制分為依賴mT以及非依賴mT的分子通路。本研究擬通過應(yīng)用classIIIPI3K的抑制劑3MA、mT的抑制劑雷帕霉素以及MPKAp38抑制

2、劑SB202190，探討調(diào)控低氧微環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞自噬的分子機制。方法：方法：通過三氣培養(yǎng)箱建立低氧微環(huán)境；體外通過PI3K的特異性抑制劑3MA、mT的特異性抑制劑雷帕霉素以及MPKAp38的特異性抑制劑SB202190干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞，激光共聚焦顯微鏡檢測自噬小體表面微管相關(guān)蛋白1的輕鏈3（LC3）的表達(dá)、單丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色法以及吖啶橙染色法定量各處理組自噬小體的數(shù)量，統(tǒng)計學(xué)分析三種不同類型抑制劑與內(nèi)皮細(xì)胞自噬之間的關(guān)系。結(jié)果

3、：結(jié)果：免疫印跡法檢測顯示，雷帕霉素能夠降低mT的磷酸化水平，SB202190能夠抑制MAPKp38的磷酸化。在應(yīng)用三種不同類型的抑制劑后，激光共聚焦顯微鏡檢測顯示3MA處理組內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)含LC3的自噬小體數(shù)量明顯減少，而雷帕霉素處理組內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的自噬小體數(shù)量明顯增加，SB202190處理組內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬小體的數(shù)量沒有明顯變化。MDC染色以及吖啶橙染色法同樣提示3MA能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)自噬小體的產(chǎn)生，而雷帕霉素則會增強自噬活性，SB202

4、190則沒有這樣的作用。結(jié)論：結(jié)論：classIIIPI3K參與調(diào)解低氧微環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞自噬的正性，而mTclassIPI3KAkt通路則對低氧條件下的內(nèi)皮細(xì)胞的自噬具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用，而MAPKp38通路則對這一過程沒有影響。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：自噬；PI3K；mTMAPKp38第三部分第三部分低氧誘導(dǎo)自噬對內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響低氧誘導(dǎo)自噬對內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響目的：目的：低氧微環(huán)境下，內(nèi)皮細(xì)胞同時存在凋亡與自噬兩種程序性細(xì)胞死亡方式。本研究擬