低氧誘導(dǎo)microRNA-146a促進(jìn)軟骨細(xì)胞自噬的作用機制研究.pdf

1、目的：目前關(guān)于骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)的病因研究已經(jīng)有很多，例如促炎細(xì)胞因子的作用，軟骨降解反應(yīng)，miR-146a的調(diào)控作用，低氧刺激和骨關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞的自噬作用，但是卻沒有關(guān)于軟骨細(xì)胞中miR-146a和自噬之間關(guān)系的報道，特別是低氧環(huán)境下的關(guān)系。本實驗旨在明確軟骨在低氧條件下miR-146a和軟骨細(xì)胞自噬之間的作用關(guān)系。
　　方法：軟骨細(xì)胞培養(yǎng)在不同程度氧含量的條件下，通過定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quanti

2、tative Polymerase Chain Reaction，QPCR)和免疫印跡試驗(Western blot)檢測主要細(xì)胞因子HIF-1α，HIF-2α，MiR-146a，Bcl-2和自噬標(biāo)記基因ULK-1，ATG-5的表達(dá)。自噬標(biāo)記基因LC-3則通過免疫熒光法檢測。通過基因水平的過表達(dá)和下調(diào)操作，結(jié)合定量聚合酶鏈反應(yīng)和免疫印跡試驗等方法檢測mRNA和蛋白，證實miR-146a與Bcl-2的相互作用。
　　結(jié)果：低氧條件能

3、夠維持軟骨細(xì)胞表型，促進(jìn)細(xì)胞自噬，并通過HIF-1α而不是HIF-2α促進(jìn)miR-146a的表達(dá)，但是miR-146a對HIF-1α并無反作用。低氧誘導(dǎo)細(xì)胞自噬需要HIF-1α，miR-146a和Bcl-2的介入。低氧誘導(dǎo)HIF-1α的表達(dá)，HIF-Iα促進(jìn)miR-146a的表達(dá)，而miR-146a卻顯著阻止自噬抑制劑Bcl-2的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞自噬。但是Bcl-2對HIF-1α和miR-146a的表達(dá)則均無影響。HIF-1α與miR