MicroRNA-146a在膿毒癥髓源抑制細(xì)胞中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：髓源抑制細(xì)胞（myeloid derived suppressor cells，MDSCs）是一群異質(zhì)性的髓系來源未成熟細(xì)胞，對(duì)T細(xì)胞有強(qiáng)烈的抑制作用，參與多種疾?。ò[瘤、自身免疫性疾病等）的發(fā)生和發(fā)展。已有研究顯示，膿毒癥中MDSCs數(shù)量顯著增多，但其在膿毒癥不同階段的可能存在不同的作用。同時(shí)，MDSCs的表型在膿毒癥不同階段也會(huì)發(fā)生演變，但其分子機(jī)制尚不清楚。
　　MicroRNA是一類小型的（20-23個(gè)核苷酸長(zhǎng)度

2、）非編碼RNAs，具有調(diào)節(jié)基因表達(dá)的功能，廣泛分布于真核細(xì)胞中，具有高度保守性、時(shí)序表達(dá)及組織表達(dá)特異性。它在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因基因表達(dá)，從而影響多種病理生理過程。大量研究報(bào)道，microRNA在免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)中起重要作用。
　　本研究采用國際通用的盲腸穿孔結(jié)扎（cecal ligation and puncture，CLP）膿毒癥模型，它可以模擬從膿毒癥早期促炎癥反應(yīng)到晚期抗炎反應(yīng)和免疫抑制狀態(tài)的進(jìn)展過程。研究證實(shí)在CLP后MDS

3、Cs大量增殖，并且在膿毒癥后期骨髓中MDSCs的比例可以達(dá)到85％以上。大量研究報(bào)道也發(fā)現(xiàn)髓源抑制細(xì)胞（MDSCs）的免疫抑制特性與膿毒癥進(jìn)展過程中免疫功能紊亂有關(guān)，但其具體的調(diào)控機(jī)制需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)分離膿毒癥3天和7天的MDSCs，比較其表型差異；并檢測(cè)MDSCs中miR-146a的表達(dá)，了解其與MDSCs表型變化之間的關(guān)系，探討miR-146a對(duì)膿毒癥MDSCs表型的影響。
　　方法：（1）收集分離CLP后3天和7

4、天時(shí)小鼠骨髓MDSCs細(xì)胞。（2）將CLP后3天和7天分離骨髓中的MDSC進(jìn)行體外培養(yǎng)并給與脂多糖（LPS）刺激，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，分別檢測(cè)CLP后3天和7天時(shí)MDSC分泌的細(xì)胞因子（TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-10）。（3）檢測(cè)CLP后3天和7天時(shí)MDSCs細(xì)胞的精氨酸酶活性。（4）T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)CLP后3天和7天時(shí)MDSC細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞的抑制作用。（5）QRT-PCR檢測(cè)CLP后3天和7天時(shí)小鼠骨髓MDSC中miR

5、-146a表達(dá)。
　　結(jié)果：CLP后3天和7天的MDSCs分泌細(xì)胞因子的能力有顯著差異（P<0.05），CLP后3天時(shí)以分泌促炎因子（TNF-α、IL-6）為主，CLP后7天時(shí)以分泌抗炎因子（IL-10、TGF-β）為主。并且CLP后3天和7天的MDSCs分泌的精氨酸酶也表現(xiàn)顯著差異（P<0.05），CLP后7天比3天時(shí)表現(xiàn)出更高的精氨酸酶活性。通過T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)也證實(shí)CLP后3天和7天的MDSCs細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞的抑制作用有顯著差異

6、(P<0.01），CLP后7天時(shí)有更強(qiáng)的抑制活性。又通過QRT-PCR檢測(cè)小鼠骨髓MDSCs中miR-146a表達(dá)，發(fā)現(xiàn)CLP7天時(shí)和CLP3天時(shí)表達(dá)量有顯著差異（P<0.001），CLP7天時(shí)比3天時(shí)的miR-146a表達(dá)量顯著升高（P<0.001）。
　　結(jié)論：在膿毒癥的進(jìn)展過程中，MDSCs表型隨之發(fā)生演變，膿毒癥晚期MDSCs免疫抑制活性較早期顯著增強(qiáng)。miR-146a表達(dá)上調(diào)可能是膿毒癥晚期MDSCs免疫抑制活性增強(qiáng)的重