調(diào)脂顆粒對內(nèi)皮細胞的自噬的干預(yù)研究.pdf

1、目的:研究調(diào)脂顆粒對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vascular endothelialcell，HUVEC)在細胞、蛋白質(zhì)、分子水平自噬的影響，從而探討調(diào)脂顆?？箘用}粥硬化的作用機制。
　　方法:運用血清藥理學(xué)方法，以調(diào)脂顆粒含藥血清處理生理狀態(tài)及病理狀態(tài)（過度自噬狀態(tài)）下的肉皮細胞。通過MTT比色法檢測調(diào)脂顆粒含藥血清對內(nèi)皮細胞生長的影響。Western blot檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ、Be

2、clin-1的相對表達量變化，免疫熒光法檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)自噬小體的數(shù)目變化，SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)自噬相關(guān)基因mTOR、ATG5、ATG7、Beclin-1的相對表達量變化。
　　結(jié)果:調(diào)脂顆粒含藥血清處理內(nèi)皮細胞后，較空白組，細胞活力無明顯改變，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對表達上調(diào)，LC3自噬小體數(shù)量增加(p＜0.05)，Beclinl在分子及蛋白層面表達均無明顯差異(p＞0.05)。雷帕霉素(Ra

3、pamycin，Rapa)處理內(nèi)皮細胞后，較空白組比較自噬相關(guān)蛋白及相關(guān)基因表達上調(diào)。調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理HUVEC后，細胞活力無明顯改變，較雷帕霉素單獨處理比較，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ的相對表達顯著下降，LC3自噬小體數(shù)量明顯減少(p＜0.05或p＜0.01)，各自噬相關(guān)基因表達均上調(diào)，Beclin-1在分子及蛋白層面表達均無明顯差異(p＞0.05)。3MA(6-氨基-3-甲基嘌呤，3-Metllyladenine)聯(lián)合雷

4、帕霉素組與雷帕霉素組在各蛋白及分子水平存在明顯差異(p＜0.05)，但與各濃度調(diào)脂顆粒含藥血清聯(lián)合雷帕霉素處理組無明顯差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論:在蛋白及分子水平層面，調(diào)脂顆粒上調(diào)生理狀態(tài)下內(nèi)皮細胞自噬，抑制病理狀態(tài)下內(nèi)皮細胞自噬，驗證了調(diào)脂顆粒可促進內(nèi)皮細胞適度自噬，抑制內(nèi)皮細胞過度自噬，這可能是其抗動脈粥樣硬化的作用機制之一。各調(diào)脂顆粒藥物組與相關(guān)對照組的LC3表達存在差異，而Beclin1的表達無明顯差異，這說明調(diào)脂顆