不同時(shí)間高糖刺激對(duì)新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)酯素及Ⅰ型原表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本研究通過(guò)觀察不同時(shí)間高糖刺激對(duì)體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)脂素、Ⅰ型膠原表達(dá)的影響，進(jìn)而探討內(nèi)脂素和Ⅰ型膠原在心肌纖維化形成過(guò)程中的作用，為臨床糖尿病所致的心血管疾病的預(yù)防和診治提供新的思路。
　　方法：無(wú)菌試驗(yàn)條件下不分性別的提取新生2—3天的Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌成纖維細(xì)胞。然后加入含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基，置于37℃、5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3d，細(xì)胞生長(zhǎng)至融合狀態(tài)時(shí)，按1:

2、2傳代，實(shí)驗(yàn)應(yīng)用2—3代細(xì)胞。經(jīng)48小時(shí)含血清培養(yǎng)，24小時(shí)無(wú)血清培養(yǎng)之后，選取生長(zhǎng)狀態(tài)好的細(xì)胞隨機(jī)分組。①低糖對(duì)照組(NG組，5.5mmol/L)，不同時(shí)間高糖刺激組(HG組，30mmol/L)五組：②6h組、③12h組、④24h組、⑤48h組，⑥高滲對(duì)照組(OC組，含5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。以相同濃度的高糖(30mmol/L)作用不同時(shí)間后，以GAPDH為內(nèi)對(duì)照，應(yīng)用real time

3、-PCR技術(shù)檢測(cè)心肌成纖維細(xì)胞中內(nèi)脂素、Ⅰ型前膠原的mRNA含量，應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)基中內(nèi)脂素、Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.不同時(shí)間的高糖(30mmol/L)作用對(duì)于心肌成纖維細(xì)胞中內(nèi)脂素的mRNA表達(dá)的影響：內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平在12h組、24h組和48h組較低糖對(duì)照組均明顯升高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組內(nèi)脂素mRN

4、A表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；48h組內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；6h組和高滲組內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平略高于低糖對(duì)照組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.不同時(shí)間高糖(30mmol/L)作用對(duì)于心肌成纖維細(xì)胞中Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)的影響：心肌成纖維細(xì)胞在高糖作用下Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平在12h組、24h組、48h組較低糖對(duì)照組均明顯升

5、高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；48h組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；6h組和高滲組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平略高于低糖對(duì)照組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.不同時(shí)間的高糖(30mmol/L)作用對(duì)于培養(yǎng)基中內(nèi)

6、脂素的蛋白表達(dá)的影響：高糖作用下培養(yǎng)基中內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平在12h組、24h組和48h組較低糖對(duì)照組均明顯升高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組培養(yǎng)基中內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；48h組內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；6h組和高滲組內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平略高于低糖對(duì)照組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

7、
　　4.不同時(shí)間高糖(30mmol/L)作用對(duì)于培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)的影響：高糖作用下培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平在12h組、24h組、48h組較低糖對(duì)照組均明顯升高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；48h組培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；6h組