2005～2011年?yáng)|北地區(qū)野鳥(niǎo)源新城疫病毒分子特征和主要的生物學(xué)特性研究.pdf

1、新城疫(Newcastle disease，ND)是禽類重要的致死性病毒性傳染病，其病原為新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)。NDV宿主范圍廣泛，可感染幾乎所有鳥(niǎo)類。野鳥(niǎo)不僅是NDV的自然宿主，還在NDV傳播和進(jìn)化過(guò)程中扮演重要角色，所以野鳥(niǎo)源新城疫病毒是ND流行病學(xué)研究的一個(gè)重要部分，也是容易被忽視的部分。
　　本研究中所用的20株NDV分離自黑龍江省和吉林省的野鳥(niǎo)樣品。本研究對(duì)分離到的20株N

2、DV進(jìn)行了全基因組序列測(cè)定和遺傳進(jìn)化分析，并根據(jù)classⅡ類NDV的分子特征和遺傳進(jìn)化分析選出5株（基因Ⅲ型Mallard/CH/HLJ383/06、基因Ⅶd型WB/CH/HLJ/001/06、基因Ⅶb型Mallard/CH/HLJ127/06、WB/CH/JL01/07和Mallard/CH/HLJ363/05）進(jìn)行致病性試驗(yàn)、單因子血清制備及抗原性分析。測(cè)序結(jié)果顯示，20株NDV基因組長(zhǎng)度有三種類型，分別為15186nt、1519

3、2nt和15198nt;其中15株NDV的F蛋白裂解位點(diǎn)為112RRQKRF117，1株NDV的F蛋白裂解點(diǎn)為112RRQRRF117，屬于典型的強(qiáng)毒株裂解位點(diǎn);其余4株NDV的F蛋白裂解位點(diǎn)為112ERQERL117，屬于典型的弱毒株裂解位點(diǎn)。F基因遺傳進(jìn)化分析顯示4株具有弱毒裂解位點(diǎn)的NDV屬于classⅠ類b亞型;16株具有強(qiáng)毒裂解位點(diǎn)的NDV屬于classⅡ類NDV，其中1株為基因Ⅲ型，4株為基因Ⅶd型，其余11株為基因Ⅶb型。

4、遺傳進(jìn)化分析表明，與classⅠ分離株高度相似的NDV在野鳥(niǎo)和家禽均有分布，classⅠ分離株與classⅠ類5個(gè)參考株的全基因組及6個(gè)結(jié)構(gòu)基因的開(kāi)放閱讀框架區(qū)核酸序列比對(duì)分析表明，classⅠ分離株與參考株之間存在一定差異。但classⅠ分離株與同亞型classⅠ類NDV之間遺傳距離差異小于3％，具有較高的F基因核苷酸一致性，表明本研究中分離的4株classⅠ類NDV在遺傳進(jìn)化上并沒(méi)有形成獨(dú)立的分支，推測(cè)是中國(guó)classⅠ類b亞型ND

5、V傳播到野鳥(niǎo)并適應(yīng)產(chǎn)生的。近幾年我國(guó)廣東、湖北、江西、吉林和貴州等地區(qū)分離到的classⅠ類NDV，與本研究的classⅠ類分離株高度相似，表明該基因亞型NDV目前在中國(guó)分布比較廣泛。此外遺傳進(jìn)化分析表明，分離的classⅡ類基因Ⅲ型NDV與疫苗株Mukteswar遺傳進(jìn)化關(guān)系很近，但毒力強(qiáng)于Mukteswar。本實(shí)驗(yàn)分離的classⅡ類基因Ⅶb型NDV與2013年在以色列分離到的基因Ⅶb型NDV Pheasant/H-Israel/2

6、013/746828遺傳關(guān)系最近，分離的classⅡ類基因Ⅶd型NDV與2007年在塞爾維亞分離到的基因Ⅶd型NDV/Serbia/1038/2007遺傳關(guān)系最近。與classⅡ類基因Ⅶ型分離株高度相似的NDV在野鳥(niǎo)和家禽均有分布，表明該基因型NDV可以在野鳥(niǎo)和家禽之間傳播。
　　致病指數(shù)測(cè)定結(jié)果顯示Mallard/CH/HLJ383/06、WB/CH/HLJ/001/06、Mallard/CH/HLJ127/06、WB/CH/J

7、L01/07和Mallard/CH/HLJ363/05的ICPI值均大于1，表明這5株分離株均為強(qiáng)毒株。對(duì)F48E9、Go/CH/HLJ/LL01/08、Mallard/CH/HLJ383/06、WB/CH/HLJ/001/06、Mallard/CH/HLJ127/06、WB/CH/JL01/07和Mallard/CH/HLJ363/05進(jìn)行F蛋白和HN蛋白抗原位點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)蛋白抗原位點(diǎn)在不同基因型NDV之間僅有1個(gè)氨基酸不同，HN抗

8、原位點(diǎn)在不同基因型NDV之間出現(xiàn)多個(gè)氨基酸不同。交叉中和試驗(yàn)結(jié)果顯示，分離株Mallard/CH/HLJ363/05和Mallard/CH/HLJ383/06與F48E9具有明顯的抗原差異;Mallard/CH/HLJ363/05與WB/CH/JL01/07具有明顯的抗原差異，Mallard/CH/HLJ383/06與WB/CH/JL01/07具有明顯的抗原差異;其它毒株之間抗原差異較小或沒(méi)有差異，表明分離的基因Ⅶ型NDV與同一基因型毒