薯蕷皂苷對大鼠心肌收縮力作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察薯蕷皂苷（dioscin，Dio）對大鼠心肌細(xì)胞鈉通道、鈣通道以及胞內(nèi)鈣離子濃度的影響，探索薯蕷皂苷對心肌收縮力的作用，并初步探討其作用機(jī)制與鈉鈣交換體（Sodium Calcium Exchanger，NCX）的關(guān)系。
　　方法：
　　1.采用酶解法急性分離大鼠單個心肌細(xì)胞，利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，在電壓鉗模式下，記錄低、中、高三個濃度的薯蕷皂苷對鈉通道、鈣通道電流及其動力學(xué)參數(shù)的影響。
　　2.

2、采用Langendorff逆行主動脈灌流法對大鼠離體心臟進(jìn)行灌流，利用壓力感受器插管法測定左心室相關(guān)心功能參數(shù)，記錄低、中、高三個濃度的薯蕷皂苷及其在應(yīng)用NCX阻斷劑SEA0400情況下對左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末期壓（LVEDP）、左心室內(nèi)壓最大上升/下降速率（±dp/dtmax）以及心率（HR）的影響。觀察藥物對灌流末心肌組織SOD的影響。
　　3.利用激光共聚焦顯微觀察薯蕷皂苷及SEA0400對大鼠心肌細(xì)胞H9c

3、2細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響，并利用多功能酶標(biāo)儀觀察藥物對細(xì)胞線粒體膜電位的影響，以探索薯蕷皂苷在產(chǎn)生正性肌力作用的同時是否會對細(xì)胞造成損傷。結(jié)果：
　　1.膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對照組相比，0.1，1，10μmol·L-1的薯蕷皂苷可濃度依賴性增加 INa電流密度，分別使電流峰值由-52.91±1.58 pA·pF-1增加到-57.93±2.28 pA·pF-1（n=8，p<0.05），-76.14±2.76 pA·pF-1和-

4、82.40±4.71 pA·pF-1（n=8，p<0.01），I-V曲線下移，內(nèi)向電流增加。各濃度薯蕷皂苷可使鈉通道電流激活曲線和復(fù)活曲線左移，加速激活與復(fù)活過程，而對鈉通道的失活過程沒有明顯影響。
　　2.膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對照組相比，0.1，1，10μmol·L-1的薯蕷皂苷均使ICa,L電流密度減小且呈濃度依賴性，分別電流峰值由-3.46±0.15 pA·pF-1減小到-3.31±0.12 pA·pF-1（n=8，p

5、<0.05），-3.03±0.13 pA·pF-1和-2.69±0.18 pA·pF-1（n=8，p<0.01），I-V曲線上移，內(nèi)向電流減小。各濃度薯蕷皂苷可使鈣通道電流激活曲線和復(fù)活曲線右移，減慢激活與復(fù)活過程，而對鈣通道的失活過程沒有明顯影響。
　　3.激光共聚焦測定鈣離子熒光強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，0.1，1，10μmol·L-1的薯蕷皂苷可使 H9c2細(xì)胞中 Ca2+相對熒光強(qiáng)度由16.62±0.89分別增加至21.48±0.

6、80，25.68±0.69和19.84±0.66（n=8，p<0.01）；而在NCX阻斷劑SEA0400存在的情況下，0.1，1，10μmol·L-1的薯蕷皂苷使細(xì)胞內(nèi)Ca2+相對熒光強(qiáng)度分別變?yōu)?1.20±0.82，17.09±0.63和14.80±0.47，與單獨(dú)給予薯蕷皂苷有顯著性差異（n=8，p<0.01）。在細(xì)胞外液中無Ca2+或無Na+時，給予1μmol·L-1的薯蕷皂苷使Ca2+相對熒光強(qiáng)度減小為8.17±0.50和12.

7、73±0.39，與單獨(dú)給予1μmol·L-1的薯蕷皂苷差異顯著（n=8，p<0.01）。
　　4.多功能酶標(biāo)儀測定線粒體膜電位結(jié)果顯示，與正常對照組相比，0.1，1μmol·L-1薯蕷皂苷，1μmol·L-1SEA0400及同時給予SEA0400和1μmol·L-1均對大鼠H9c2細(xì)胞線粒體膜電位無明顯影響，而10μmol·L-1薯蕷皂苷會使JC-1單體與聚合物的比值由1.14±0.03增加為1.35±0.06（n=6，p<0.0

8、1），即引起線粒體膜電位下降。
　　5.離體心臟灌流結(jié)果顯示，0.1，1μmol·L-1薯蕷皂苷可顯著增加左心室收縮壓（LVSP），由86.83±3.93和79.20±2.14 mmHg分別增加至98.34±5.38，94.19±4.82 mmHg（n=8，p<0.01），增加近13％和18%；增加左室內(nèi)壓最大上升速率（dp/dtmax），由2.84±0.77，2.99±0.56 mmHg·ms-1分別增加至3.14±0.82，3

9、.27±0.18 mmHg·ms-1，增加約11%和9%。10μmol·L-1薯蕷皂苷則使 LVSP和dp/dtmax均減小，LVSP由91.21±2.47 mmHg減至71.10±5.81 mmHg（n=8，p<0.01），dp/dtmax由3.14±0.29 mmHg·ms-1變?yōu)?.80±0.29 mmHg·ms-1。各濃度薯蕷皂苷均使心率明顯減慢。
　　6.單獨(dú)給予1μmol·L-1鈉-鈣交換體特異性抑制劑SEA0400對

10、左心室各心功能指標(biāo)無明顯影響，但可部分阻斷薯蕷皂苷對各指標(biāo)的作用，減小薯蕷皂苷對各指標(biāo)的影響。
　　7. SOD測定結(jié)果顯示，各濃度薯蕷皂苷（0.1，1，10μmol·L-1）均使灌流后大鼠心臟組織 SOD濃度增高，由2.67±0.23μg·mL-1分別增加至3.16±0.10，3.32±0.24（n=6，p<0.01）和2.95±0.16μg·mL-1（n=6，p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.薯蕷皂苷通過加快鈉