2007～2012年湖北省流感流行病調(diào)查和H3N2病毒HA基因分析.pdf

1、目的:
　　流感病毒是引起急性呼吸道感染性疾病的主要病原體之一，病毒的傳播途徑廣（飛沫、氣溶膠等），速度快，并易發(fā)生變異。病毒不僅可引起人、豬、禽、犬和馬等跨物種傳播，而且人類感染嚴(yán)重時(shí)可以導(dǎo)致病毒性肺炎、多臟器功能損傷、呼吸衰竭甚至死亡。通過哨點(diǎn)醫(yī)院的監(jiān)測(cè)可以系統(tǒng)了解湖北省流感的流行趨勢(shì)特征，同時(shí)通過對(duì)季節(jié)性H3N2的HA基因測(cè)序了解基因變異情況，為湖北省流感防控策略的制定提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.描述性流

2、行病學(xué)分析
　　收集湖北省2007～2012年的流感監(jiān)測(cè)資料，Excel2013建立數(shù)據(jù)庫，繪制流行病學(xué)圖表，SPSS17.0處理數(shù)據(jù)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α≤0.05，分析流感流行的年齡分布、季節(jié)分布、流行強(qiáng)度和流行毒株型別變化等。
　　2.分子生物學(xué)研究
　　(1)抗原性分析方法
　　MDCK細(xì)胞復(fù)蘇病毒，收獲的病毒液做紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)和紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)(HI)。
　　(2)基因分析
　　磁珠法提取病毒核酸

3、，RT-PCR擴(kuò)增HA基因，1％瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定PCR產(chǎn)物，測(cè)序部分由華大基因武漢分公司完成，采用DNA Star進(jìn)行序列拼接，使用Bioedit對(duì)核苷酸與氨基酸進(jìn)行序列比對(duì)分析，糖基化位點(diǎn)用NetNGlyc1.0server分析，MEGA5.2軟件N-J法構(gòu)建進(jìn)化樹。
　　結(jié)果:
　　(1)流感樣病例(influenza like illness，ILI)監(jiān)測(cè)特征:2007、2008年ILI％有明顯的夏季和冬季兩個(gè)流行峰

4、，2009年呈現(xiàn)秋冬季單峰流行，2010、2011和2012年全年未呈現(xiàn)流行峰。15歲以下青少年ILI％占92％，尤其是5歲以下嬰幼兒比例占66％，是主要的感染人群。
　　(2)流感流行特征:2007年流感以H3N2流行為主;2008年以H1N1流行為主;2009年以新甲型H1N1為主;2010年主要以H3N2流行為主;2011年主要以新H1N1流行為主;2012年以H3N2流行為主。2007、2008、2009、2010和201

5、2年為典型的春冬和夏季兩個(gè)流行峰，2011年只有春冬一個(gè)流行峰。
　　(3) H3N2抗原性變異分析:以A/Hubei/Jingzhou/0779/2012(H3N2)作為參照抗原，所測(cè)毒株效價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)抗原相比，有4倍以上的差異，說明毒株間抗原性存在差異。所測(cè)毒株的核苷酸序列與同時(shí)期（2007～2012年）的標(biāo)準(zhǔn)疫苗株進(jìn)行比對(duì)，有較高的同源性，為97％～99％。
　　(4) H3N2病毒HA基因糖基化位點(diǎn)分析:硚口和江岸地區(qū)毒

6、株有9個(gè)保守的糖基化位點(diǎn)，荊州和當(dāng)陽地區(qū)毒株也是有9個(gè)保守的糖基化位點(diǎn)，但位置與硚口、江岸地區(qū)都不相同，而湖北宜都則有12個(gè)糖基化位點(diǎn)，數(shù)量和位置均與本研究湖北省其他地方不同。
　　(5) H3N2病毒HA基因氨基酸變異分析:HA1區(qū)共有50個(gè)氨基酸位點(diǎn)發(fā)生突變，包括A區(qū)(140，142，144，145)，B區(qū)(157，158，159，189，194，198)，C區(qū)(53，278)，D區(qū)(207)和E區(qū)(81)位點(diǎn)，受體結(jié)合部位有

7、2個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變，即194和225位，其中194位于抗原決定簇B區(qū)，225在非抗原區(qū)。
　　結(jié)論:
　　(1)湖北省2009年新甲型H1N1流感流行過后ILI％降低，流行高峰不明顯，應(yīng)繼續(xù)全年開展監(jiān)測(cè)，5歲以下嬰幼兒為主要監(jiān)測(cè)對(duì)象，是流感的易感人群，應(yīng)及時(shí)接種疫苗來增強(qiáng)保護(hù)力。
　　(2)湖北省2007～2012年間流感流行主要為春冬和夏季兩個(gè)流行高峰，與傳統(tǒng)的流感流行季節(jié)性相吻合，流感季節(jié)以優(yōu)勢(shì)毒株流行為主，非流行季

8、節(jié)為多種流感病毒混合發(fā)病，H3N2亞型流感病毒每隔一年就作為優(yōu)勢(shì)毒株引起流感流行，應(yīng)密切關(guān)注它的流行趨勢(shì)。
　　(3)湖北省6年間H3N2亞型流感發(fā)生了抗原性變異，結(jié)合進(jìn)化樹的結(jié)果分析，毒株核苷酸序列與同時(shí)期疫苗株比對(duì)有較高的同源性，但同一年間，毒株間基因存在一定差異。
　　(4)湖北省不同地域H3N2流感病毒的糖基化位點(diǎn)在數(shù)量和位置上都有很大差異，糖基化位點(diǎn)的增加或缺失對(duì)流感的變異有影響。
　　(5)湖北省H3N2亞