4種膳食纖維的生物活性比較及經(jīng)P13K通路改善HepG2細胞IR機制探討.pdf

1、郭軍玲4種膳食纖維的生物活性比較及經(jīng)P13K通路改善HepG2細胞IR機制探討目的：摘要(1)提取全谷豆復合包、全大豆、全谷物小麥、全谷物玉米中膳食纖維，了解其含量、理化性質(zhì)和體外抗氧化能力的不同；(2)觀察單一和復合膳食纖維對高糖誘導的胰島素抵抗HepG2細胞的影響，掌握4組膳食纖維對HepG2細胞胰島素抵抗的改善作用及差異；(3)探討單一和復合膳食纖維對胰島素抵抗HepG2細胞P13K信號通路的影響，初步探明其作用機制。方法：(1)

2、用酶化學法提取全谷豆復合包、全大豆、全谷物小麥、全谷物玉米中的膳食纖維；(2)按國標法測定4種膳食纖維的含量和組成，測定4種膳食纖維的膨脹率、持水力、不飽和脂肪(花生油)吸附力、飽和脂肪(豬油)吸附力、膽固醇吸附能力和葡萄糖透析延遲指數(shù)比較其物理性質(zhì)，并通過DPPH自由基清除率和總抗氧化能力(TAOC)法測定其體外抗氧化能力；(3)使用高濃度葡萄糖誘導HepG2細胞建立胰島素抵抗模型。通過MTT法，結合葡萄糖消耗量、糖原累積量以及細胞中

3、甘油三酯(TG)含量的測定，確定建立體外胰島素抵抗模型的最佳時間和最佳濃度；(4)檢測各組膳食纖維對胰島素抵抗HepG2細胞的影響。實驗分為空白對照組、二甲雙胍陽性對照組、全谷豆復合包膳食纖維組、全大豆膳食纖維組、全谷物小麥膳食纖維組、全谷物玉米膳食纖維組，培養(yǎng)液中加入各組膳食纖維進行干預，干預后測定各組細胞的葡萄糖消耗量、糖原含量、TG含量和抗氧化指標丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平以及糖代謝指標丙酮酸激酶(PK)的活

4、力。采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)測定磷酸化絲氨酸／蘇氨酸激酶蛋白激酶B(PKB／Akt)、磷酸化糖原合酶激酶3p(GSK313)、脂肪酸合成酶(FAS)的含量；運用半定量逆轉錄一聚合酶鏈反應(RTPCR)方法測定絲氨酸／蘇氨酸激酶蛋白激酶B(PKB／Akt)、糖原合酶激酶313(GSK313)、脂肪酸合成酶(FAS)的mRNA表達；通過P13K的抑制劑WT預處理抑制Akt蛋白磷酸化后，進一步觀察各組膳食纖維對胰島素抵抗

5、HepG2細胞的影響。墅蘭銎!登墮壘塹絲塑竺塑適竺些鱉壑絲!!!!望墮墼董!!里竺墅墨!!!!型籮1?！籲lJ—一纖維具有更強的體外抗氧化能力；(2)150mmol／L的葡萄糖作用HepG2細胞24h可形成理想陰胰島素抵UL；出胞模型；(3)4組膳食纖維均能改善HepG2細胞胰島素抵抗狀態(tài)，～定程度上保護細胞正常的糖脂代謝功能，且復合膳食纖維組比單一來源膳食纖維組具有更好的綜合作用；(4)未經(jīng)抑制劑wT處理組比處理組對HepG2細胞